大黃和肉蓯蓉水煎液對家兔離體小腸運(yùn)動(dòng)影響的研究

于向鵬，馬春梅，馬旭東，劉雨娟

（河西學(xué)院醫(yī)學(xué)院，甘肅 張掖 734000）

大黃（rhubarb）為蓼科植物的干燥根和根莖，主產(chǎn)于我國青海、甘肅、四川等地。有瀉下攻積，清熱瀉火，利濕退黃[1]等功效，現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)大黃可通過促進(jìn)大腸蠕動(dòng)、離子分泌和減少水分吸收的機(jī)制發(fā)揮瀉下的功效。肉蓯蓉（cistanche）為列當(dāng)科植物肉蓯蓉的肉質(zhì)莖，產(chǎn)于寧夏、甘肅、新疆等地，具有補(bǔ)腎陽、益精血、潤腸通便等作用[1]。目前有關(guān)大黃和肉蓯蓉通便作用的報(bào)道較多，但二者是否對離體小腸平滑肌的收縮活動(dòng)的影響，報(bào)道少見。因此，本研究主要通過觀察大黃和肉蓯蓉對離體小腸平滑肌收縮性的影響，探討二者促進(jìn)小腸運(yùn)動(dòng)的可能作用機(jī)制，旨在為大黃和肉蓯蓉的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料 健康成年新西蘭家兔（張掖市譽(yù)誠醫(yī)藥生物科技有限公司提供）12 只，雌雄不限，體重（2.0±0.5）kg。生物信息采集與分析系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司提供，型號：BL-420F）；離體組織器官恒溫灌流裝置（成都泰盟科技有限公司提供，型號：B20-420F）；生物張力傳感器（成都泰盟科析科技有限公司，型號：FT-100）；乙酰膽堿（上海笛柏化學(xué)品技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號：P/NK900017）；阿托品（河南潤弘制藥股份有限公司，生產(chǎn)批號：H41020324）；維拉帕米（天津市中央藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：H12020051）；肉蓯蓉（甘肅省張掖市廣泰藥材有限責(zé)任公司，批號：190520）和大黃飲片（甘肅省張掖市廣泰藥材有限責(zé)任公司，批號：180913）。

1.2 方法

1.2.1 大黃、肉蓯蓉水煎液制備 肉蓯蓉水煎液的制備：稱取50 g 肉蓯蓉飲片，加水500 ml，浸泡30 min，煎煮濃縮至300 ml，裝瓶消毒；藥渣加500 ml 的水繼續(xù)煎煮濃縮至250 ml，合并2 次的藥液，即得含生藥91 mg/ml 肉蓯蓉水煎液。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)將藥物稀釋成濃度分別為：0.01 g/ml 的肉蓯蓉稀釋液備用。大黃水煎液的制備同肉蓯蓉水。

1.2.2 離體小腸標(biāo)本的制備 家兔小腸標(biāo)本的制備：實(shí)驗(yàn)前家兔禁食12 h，自由飲水。木棒敲擊其頭部，昏迷后快速沿腹正中線開腹，迅速取出十二指腸，分別剪取2.0～3.0 cm 的腸段數(shù)段，用溫?zé)岬呐_(tái)式液將腸內(nèi)容物洗凈，置于37 ℃新鮮臺(tái)氏液中備用[3]，同時(shí)將臺(tái)式液定容至10 ml，灌流液的溫度為（37.0±0.5）℃，并立即通入含95%O2和5%CO2的混合氣體。隨后將該小腸段隨機(jī)分配至各實(shí)驗(yàn)小組中，小腸段一端用細(xì)線固定于張力換能器上，另一端固定于通氣管鉤上，輕放于灌流管中，更換臺(tái)式液。將張力換能器與生物信息采集分析系統(tǒng)1、2、3、4、5、6、7、8 通道連接，選擇實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：生理學(xué)實(shí)驗(yàn)-消化系統(tǒng)-離體小腸平滑肌灌流實(shí)驗(yàn)，設(shè)置控制參數(shù)（增益G：1 mv、時(shí)間常數(shù)T：3 s、濾波F：50 Hz、掃描速度：5 s/div），記錄1 min 內(nèi)腸段收縮變化情況。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組及處理 ①正常對照組：在灌流液中加入0.85% NaCl 0.2 ml；②陽性對照組：加入濃度為10-6mol/L 的Ach 0.2 ml；③大黃水煎液組：加入濃度為0.01 g/ml 的大黃水煎液0.2 ml；④肉蓯蓉水煎液組：加入濃度為0.01 g/ml 的肉蓯蓉水煎液0.2 ml；⑤阿托品+大黃組：先加入濃度為10-4mol/L 的阿托品0.2 ml，等波形穩(wěn)定后，再加0.01 g/ml 的大黃水煎液0.2 ml；⑥維拉帕米+大黃組：先加入濃度為10-4mol/L 的維拉帕米0.2 ml，待波形穩(wěn)定后，再加0.01 g/ml 的大黃水煎液0.2 ml；⑦阿托品+肉蓯蓉組：操作同⑤和⑥，劑量同④；⑧維拉帕米+肉蓯蓉組：操作同⑤和⑥，劑量同④。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以（）表示，組間顯著性差異采用多因素方差分析，P＜0.05 表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 家兔離體小腸平滑肌正常收縮活動(dòng) 將家兔離體小腸平滑肌放入臺(tái)式液中，自發(fā)活動(dòng)規(guī)律且穩(wěn)定。陽性對照組對家兔離體小腸平滑肌收縮頻率和收縮波幅均大于正常對照組（P＜0.05），具有顯著增強(qiáng)效應(yīng)，見表1、圖1、圖2。

表1 大黃和肉蓯蓉水煎液對十二指腸平滑肌收縮頻率、振幅的影響（n=20，）

表1 大黃和肉蓯蓉水煎液對十二指腸平滑肌收縮頻率、振幅的影響（n=20，）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與肉蓯蓉組比較，ΔP＜0.05；與大黃組比較，ΔΔP＜0.05；與阿托品比較，▲P＜0.05

圖1 家兔離體小腸平滑肌正常收縮活動(dòng)

圖2 乙酰膽堿對家兔離體小腸平滑肌收縮活動(dòng)影響

2.2 大黃、肉蓯蓉水煎液對家兔離體小腸平滑肌的收縮活動(dòng)影響 大黃水煎液組、肉蓯蓉水煎液組對離體小腸平滑肌的收縮頻率及收縮振幅的影響均高于正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1、圖3、圖4。

2.3 阿托品和維拉帕米+肉蓯蓉水煎液對家兔小腸平滑肌的收縮活動(dòng)影響 與正常組比較，阿托品和維拉帕米對家兔離體小腸平滑肌的收縮頻率和振幅均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；分別加入肉蓯蓉水煎液后，阿托品+肉蓯蓉水煎液組對家兔離體小腸平滑肌的收縮頻率及收縮振幅的影響均開始逐漸增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；但維拉帕米+肉蓯蓉水煎液組對家兔離體小腸平滑肌收縮頻率和振幅的影響均不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1、圖5、圖6。

2.4 阿托品和維拉帕米加大黃水煎液對家兔小腸平滑肌的收縮活動(dòng)影響 阿托品+大黃組和維拉帕米＋大黃組家兔離體小腸平滑肌收縮頻率和振幅變化與加入前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1、圖7、圖8。

圖3 肉蓯蓉對家兔離體小腸平滑肌收縮活動(dòng)影響

圖4 大黃對家兔離體小腸平滑肌收縮活動(dòng)影響

圖5 阿托品+肉蓯蓉對家兔離體小腸平滑肌收縮活動(dòng)影響

圖6 維拉帕米+肉蓯蓉對家兔離體小腸平滑肌收縮活動(dòng)影響

圖7 阿托品+大黃對家兔離體小腸平滑肌收縮活動(dòng)影響

圖8 維拉帕米+大黃對家兔離體小腸平滑肌收縮活動(dòng)影響

3 討論

生理狀態(tài)下，腸道處于不斷蠕動(dòng)狀態(tài)，促進(jìn)食糜在腸道內(nèi)向遠(yuǎn)端運(yùn)動(dòng)，不斷消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)，是腸道最基本和最重要的功能[3]。小腸的運(yùn)動(dòng)形式的發(fā)生都是小腸平滑肌收縮的具體外部表現(xiàn)，可以通過觀察小腸平滑肌收縮張力高低和收縮頻率快慢來判斷小腸興奮性高低[4]。研究顯示，小腸平滑肌自發(fā)節(jié)律性收縮活動(dòng)是由小腸縱行肌和環(huán)行肌之間的Cajal細(xì)胞產(chǎn)生的慢波節(jié)律而起步的，任何刺激作用于小腸平滑肌，都是在慢波的基礎(chǔ)上產(chǎn)生動(dòng)作電位，繼而引起平滑肌的收縮。因此在適宜的條件下，離體仍然能夠保持平滑肌收縮的特性與腸壁神經(jīng)叢的作用。

扶埡東等[5]研究發(fā)現(xiàn)大黃中結(jié)合蒽醌及可水解鞣質(zhì)具有促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)及瀉下的作用。朱金照等[6]研究發(fā)現(xiàn)大黃對大鼠小腸運(yùn)動(dòng)有明顯的促進(jìn)作用，其機(jī)制可能與促進(jìn)腸道MTL 及SP 的釋放和抑制VIP 的釋放有關(guān)；而李紅芳等[7]發(fā)現(xiàn)大黃水煎劑可使十二指腸縱行肌收縮波平均振幅降低，從而抑制其活動(dòng)，使十二指腸舒張。由此可見，有關(guān)大黃對腸管平滑肌運(yùn)動(dòng)的作用結(jié)果也不同。但本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)低濃度的大黃水煎液對家兔離體十二指腸平滑肌的收縮頻率、幅度均具有促進(jìn)作用。

肉蓯蓉具有“潤腸通便”的作用，其作用比較緩和，對治療產(chǎn)婦、老年人和身體虛弱等人群有很好的效果[8]。研究證明，肉蓯蓉總寡糖、去半乳糖總寡糖和半乳糖醇均能增強(qiáng)腸蠕動(dòng)，有效改善腸肌運(yùn)動(dòng)功能；本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示肉蓯蓉水煎液能明顯促進(jìn)家兔離體小腸平滑肌收縮活動(dòng)，與既往研究一致。

乙酰膽堿可激動(dòng)腸道平滑肌細(xì)胞膜上的M 受體，興奮胃腸平滑肌并產(chǎn)生強(qiáng)烈的收縮運(yùn)動(dòng)。加入0.01 g/ml 的大黃、肉蓯蓉水煎液后，對其十二指腸平滑肌收縮頻率，收縮振幅的興奮作用的影響幾乎與乙酰膽堿相同。這表明大黃和肉蓯蓉水煎液與乙酰膽堿對十二指腸腸平滑肌興奮作用的影響具有同等程度的促進(jìn)作用，二者對離體十二指腸收縮頻率的影響作用無明顯差異，但大黃能明顯增加其收縮幅度。

阿托品與乙酰膽堿是阻斷M 膽堿受體的抗膽堿藥，具有松弛內(nèi)臟平滑肌，解除平滑肌痙攣的作用；同時(shí)能抑制腺體分泌等作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，阿托品不能對肉蓯蓉水煎液興奮家兔離體小腸平滑肌收縮作用起到抑制作用，這說明肉蓯蓉能改善阿托品對M 受體阻斷作用，卻并不能確定肉蓯對小腸平滑肌收縮功能的增強(qiáng)作用機(jī)制是興奮了M 受體；但是阿托品可明顯抑制大黃對家兔離體十二指腸平滑肌收縮活動(dòng)的促進(jìn)作用，這與呂金勝等[9]的研究結(jié)果一致，但其作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。

維拉帕米作為第一類鈣通道阻滯劑，對小腸平滑肌細(xì)胞上鈣離子通道的阻斷作用可使小腸的收縮活動(dòng)變?nèi)?，自?dòng)節(jié)律的運(yùn)動(dòng)也會(huì)減弱[10]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，維拉帕米可明顯阻斷大黃、肉蓯蓉對家兔離體小腸平滑肌收縮的促進(jìn)作用，由此可見，二者促進(jìn)家兔離體十二指腸平滑肌收縮活動(dòng)的作用機(jī)制可能是促進(jìn)了平滑肌細(xì)胞膜上鈣離子通道開放，鈣離子內(nèi)流有關(guān)。

綜上所述，大黃及肉蓯蓉對家兔離體小腸平滑肌收縮活動(dòng)的幅度和頻率均有促進(jìn)作用，但其作用機(jī)制卻有所不同：相同之處是，二者均能通過促進(jìn)細(xì)胞外液中鈣離子的內(nèi)流而增加小腸平滑肌的收縮張力和收縮頻率；不同之處是，大黃可能通過與小腸平滑肌細(xì)胞膜M 受體的結(jié)合而發(fā)揮興奮效應(yīng)，但肉蓯蓉卻無此影響作用。