板芩金蕎口服液最佳提取工藝研究

姚靜，王繼安，唐瀛，吳衛(wèi)東，李州

（1.菏澤市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心山東菏澤 274000；2.鄄城縣畜牧服務(wù)中心山東菏澤 274600；3.山東省菏澤市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院山東菏澤 274000）

板芩金蕎口服液是根據(jù)中醫(yī)辨證理論，通過(guò)大量反復(fù)實(shí)踐研發(fā)的新獸藥，主要由板藍(lán)根、魚(yú)腥草、黃芩、金蕎麥等十一味藥材組成，具有清熱解毒、利尿通淋、健脾補(bǔ)腎、提高機(jī)體免疫力之功效[1,2]，對(duì)腎型雞傳染性支氣管炎有很好的防治效果。本試驗(yàn)采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以干膏收率、（R，S）-告依春、黃芩苷的含量為指標(biāo)，對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，旨在建立更科學(xué)、更有效的提取工藝，為板芩金蕎口服液申報(bào)新獸藥提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器安捷倫1100 型高效液相色譜儀；HH-2 型恒溫水浴鍋（江蘇金壇江南儀器廠）；ME104 型電子天平（梅特勒-托利多）；202 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（濰坊精鷹）；YZN50 動(dòng)態(tài)熱回流提取濃縮煎藥機(jī)（宏圖藥化）。

1.1.2 材料板藍(lán)根、魚(yú)腥草、黃芩、金蕎麥等十一味中藥材均購(gòu)自菏澤市醫(yī)藥公司藥材批發(fā)部，經(jīng)鑒定均符合《中華人民共和國(guó)獸藥典》2015 年版有關(guān)規(guī)定；（R，S）-告依春（批號(hào)111753-201603）及黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)110715-201602）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，水為超純水，甲醇等為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 口服液水提工藝考察按照處方比例分別稱(chēng)取各藥材9份，按表1 黃芩熱浸后混同群藥一起進(jìn)行動(dòng)態(tài)熱回流提取[3]，主要考察提取次數(shù)、提取時(shí)間、加水量3 個(gè)因素，并選擇三個(gè)水平進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，以干膏收率、（R，S）-告依春、黃芩苷含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選最佳提取工藝條件，因素水平見(jiàn)表1。

表1 因素水平表

1.2.2 板藍(lán)根的含量測(cè)定色譜條件：色譜柱為安捷倫C18（300mm×4.0mm，10μm），以甲醇-磷酸溶液（10:90:0.02）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為245nm；流速為1.0mL/min；柱溫為室溫，理論板數(shù)按（R，S）-告依春峰計(jì)算應(yīng)不低于5,000[4]。

對(duì)照品溶液的制備：?。≧，S）-告依春對(duì)照品適量，精密稱(chēng)量，加甲醇制成每1mL含40μg 的溶液，即得。

供試品溶液的制備：精密量取本品2mL，置25mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

1.2.3 黃芩苷的含量測(cè)定色譜條件：色譜柱為安捷倫C18（250mm×4.6mm，5μm），以甲醇-水-磷酸（45:55:0.6）為流動(dòng)相；流速為1.0mL/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm；柱溫為室溫，理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2,000[5]。

對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品適量，置100mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲振蕩使溶解，放至室溫，用50%甲醇稀釋制成每1mL含80μg 的溶液。

供試品溶液的制備：精密量取本品2mL，置100mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀測(cè)定，即得。

2 結(jié)果

2.1 口服液水提工藝考察

結(jié)果見(jiàn)表2、3。由直觀分析表明，各因素對(duì)提取效果的因素大小順序?yàn)榧铀浚咎崛〈螖?shù)＞提取時(shí)間，經(jīng)方差分析，加水量對(duì)提取效果有極顯著影響（P＜0.01）；而提取次數(shù)和提取時(shí)間對(duì)提取效果的影響較小，各水平間差異不顯著，考慮到大生產(chǎn)需要節(jié)約時(shí)間和能源，降低成本，提取工藝確定A2B2C3，為藥材加12 倍量水提取2 次，2h/ 次。

2.2 驗(yàn)證性試驗(yàn)結(jié)果

按照處方比例分別稱(chēng)取各藥材3 份，根據(jù)正交試驗(yàn)確定的最佳提取工藝，即黃芩熱浸后混同群藥材加12 倍量水動(dòng)態(tài)熱回流提取2 次，2h/ 次，進(jìn)行放大驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4。3 批樣品的平均干膏收率為27.8%，RED 為0.40%；（R，S）-告依春的平均含量為

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析

4 工藝驗(yàn)證結(jié)果

3 討論

中藥有效成分復(fù)雜，提取工藝路線的設(shè)計(jì)關(guān)系到中藥制劑的質(zhì)量及臨床療效，不當(dāng)?shù)奶崛」に嚥粌H耗時(shí)長(zhǎng)、有效成分含量低、提取效率不高，而且會(huì)影響臨床療效，是復(fù)方中藥制劑的關(guān)鍵技術(shù)[6]。本研究所選處方中板藍(lán)根清熱解毒，輔以黃芩增強(qiáng)其消腫利咽之功效，為本制劑的君藥，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，（R，S）-告依春是板藍(lán)根主要抗病毒活性成分[7]，黃芩苷是黃芩中的主要藥效活性成分[8]，干膏收率是中藥提取的一個(gè)重要指標(biāo)，在一定程度上反映藥材的優(yōu)劣，因此本研究將干膏收率、（R，S）-告依春、黃芩苷含量作為工藝考察的評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選最佳提取工藝，同時(shí)考慮生產(chǎn)成本，最終得到板芩金蕎口服液最佳提取工藝。本研究為板芩金蕎口服液的規(guī)?；a(chǎn)提供了基礎(chǔ)，為新獸藥申報(bào)奠定了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。