理筋手法對頸肌慢性靜力性損傷兔下丘腦和脊髓β-EP和CCK-8含量的影響

李嫚嫚，馬惠昇，穆 靜，李彥雙，袁蘭英

(寧夏醫(yī)科大學(xué) 中醫(yī)學(xué)院，寧夏 銀川 750004)

慢性靜力性損傷是日常生活中常見的損傷類型，如果在工作生活中較長時間處于某種強迫體位或不自然的姿勢，使肌肉處于持續(xù)性緊張狀態(tài)，將會導(dǎo)致局部軟組織出現(xiàn)疼痛、腫脹、功能障礙等癥狀，觸診局部常見皮下條索狀物或結(jié)節(jié)[1-2]，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。臨床研究表明，理筋手法治療慢性靜力性損傷有獨特療效。本研究擬采用長期反復(fù)屈曲家兔頸椎法，建立家兔頸肩部軟組織慢性靜力負荷損傷疼痛模型，對模型家兔施以理筋手法，通過測定中樞疼痛相關(guān)物質(zhì)含量觀察理筋手法對靜力性損傷模型兔損傷的治療效果，以期探索理筋手法鎮(zhèn)痛效應(yīng)的實驗依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

酶標儀(芬蘭Labsystems Multiskan MS公司，型號：352型)；洗板機(芬蘭Thermo Labsystems公司，型號：AC-8)；離心機(國產(chǎn)微量高速離心機，型號：TG16W)；吉爾森P型移液器(Pipetman)；電熱恒溫培養(yǎng)箱(南京實驗儀器廠，型號：HG303)。

1.2 試劑

兔β內(nèi)啡肽(β-EP)酶聯(lián)免疫試劑盒(貨號：XY-β-E P-Rb，批號：E20191212161252)、兔膽囊收縮素8(CCK-8)酶聯(lián)免疫試劑盒(貨號：XY-CCK-8-Rb，批號：E201912161325)均由上海信裕生物科技有限公司生產(chǎn)。

2 實驗方法

2.1 實驗動物與分組

選用健康成年日本大耳白兔70只，6月齡，體質(zhì)量2.0～3.0kg，雌雄各半，由寧夏醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。各組兔均在寧夏醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心分籠喂養(yǎng)，食用標準兔飼料。將實驗兔分為空白組(5只)：不造模也不做任何處理，籠中正常飼養(yǎng)，用于試驗中的空白對比；模型組(5只)：按照模型制備方法連續(xù)造模60天；自然恢復(fù)組(30只)：按照模型制備方法連續(xù)造模60天后停止，觀察造模家兔的自然恢復(fù)過程，分別于造模后第10天、第20天、第30天時處死10只兔進行觀察；治療組(30只)：造模時間與方法同模型組，造模60天后停止造模，開始給予理筋手法治療，治療期間動態(tài)觀察，分別于治療第10天、第20天、第30天處死10只兔進行觀察。

2.2 造模方法

自制造模固定架(圖1)：采用韌性較好的細鋼筋焊制，頭部折成 U字形，固定兔的頭頸部，然后U字兩邊對稱折成Z字形，用于固定前雙腿部，Z字后部延長約15 cm，并于8 cm左右處折彎鉤，彎鉤用于固定兔腰部。造模后如圖2所示，本固定架使造模兔頸部活動受限，但其他部位活動不受限制，且對造模兔的呼吸道影響較小。造模時將兔頸椎保持前屈位5 h，松解后籠中自由飼養(yǎng)，每天1次，連續(xù)2個月。

圖1 造模固定架

圖2 造模后的狀態(tài)

2.3 理筋手法

根據(jù)筋傷疼痛治療應(yīng)活血散筋的原則，選用松筋、撥筋、順筋法，由操作熟練者進行，手法刺激量為2 kg。操作時將家兔固定在手法測定儀測力平臺上，在兔枕骨髁下至第一胸椎部位，先用大拇指和食指指腹著力于頸椎兩側(cè)，上下來回拿揉頸肩部軟組織以松筋，力量2 kg，頻率100次/min，持續(xù)5 min；再用拇指撥筋，力量2 kg，持續(xù)5 min，頻率為80次/min；最后用順筋法，即用拇指指腹自枕骨髁下至第一胸椎局部順毛推捋，力量2 kg，頻率80次/min，持續(xù)5 min。每次治療時間為15 min。

2.4 觀察指標及檢測方法

中樞疼痛相關(guān)物質(zhì)檢測：采用雙抗夾心 ELISA法分別檢測各組兔頸段脊髓和下丘腦中β-內(nèi)啡膚(β-EP)、八肽膽囊收縮素(CCK-8)的含量。

2.5 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 各組家兔脊髓、下丘腦中β-內(nèi)啡肽表達水平比較

造模后，模型組兔脊髓中β-EP含量較正常組升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較，自然恢復(fù)組(10 d，20 d，30 d)和治療組(10 d，20 d，30 d)兔脊髓中β-EP的表達均有顯著差異(P<0.05)。自然恢復(fù)組兔第10天、20天脊髓中β-EP含量均顯著低于自然恢復(fù)組(P<0.05)。自然恢復(fù)組兔第30天脊髓β-EP含量與治療組第30天無顯著差異(P>0.05)。

造模后，模型組兔下丘腦中β-EP含量較正常組升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較，治療組(10 d，20 d，30 d)下丘腦中β-EP的表達有顯著差異(P<0.05)，自然恢復(fù)組(10 d，20 d，30 d)無顯著差異。自然恢復(fù)組兔第10天、20天下丘腦中β-EP含量均顯著低于治療組相應(yīng)時間(P<0.05)，但第30天兩組兔丘下腦β-EP含量無顯著差異(P>0.05)。詳見表1。

3.2 各組家兔下丘腦CCK-8表達水平比較

造模后，模型組兔脊髓中CCK-8含量較正常組升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較，自然恢復(fù)組兔(20 d，30 d)和理筋手法治療組(20 d，30 d)脊髓中CCK-8的表達有顯著差異(P<0.05)，自然恢復(fù)組兔10 d、20 d脊髓中CCK-8含量顯著高于治療組(P<0.05)，但30 d時無顯著差異(P>0.05)。

表1 各組兔脊髓和下丘腦中β-EP含量比較

造模后，模型兔下丘腦中CCK-8含量較正常組升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較，自然恢復(fù)組(20 d，30 d)和理筋手法治療組(10 d，20 d，30 d)下丘腦中CCK-8的表達有顯著差異(P<0.05)，自然恢復(fù)組(10 d)無顯著差異(P>0.05)。自然恢復(fù)組兔10 d下丘腦中CCK 8含量顯著高于治療組(P<0.05)，但20 d、30 d時無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表2 各組兔脊髓和下丘腦CCK-8含量比較

4 討論

慢性靜力性損傷是引起頸肩腰背部等周圍軟組織疼痛的常見原因[3]，臨床一般采用口服止痛藥物緩解疼痛，或者使用外用藥物、針刀、理療、神經(jīng)阻滯等方法進行治療[4]。理筋療法是寧夏少數(shù)民族醫(yī)學(xué)中治療頸肩腰腿痛的主要手段，其操作簡便，治療效果佳，副作用相對較小，具有糾正小關(guān)節(jié)紊亂、解除痙攣、消除局部粘連、減輕炎癥反應(yīng)等作用。本實驗采用家兔頸部長時間反復(fù)低頭位，使頸肩部軟組織反復(fù)經(jīng)受靜力性負荷刺激，誘發(fā)頸肩部軟組織靜力性損傷，建立家兔頸肌慢性靜力性損傷疼痛模型，在后期施以理筋手法，觀察脊髓和下丘腦中β-EP和CCK-8含量的變化，探討理筋手法對慢性靜力性損傷模型的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。

β-EP是組成內(nèi)源性阿片肽系統(tǒng)的重要部分之一，主要分布在下丘腦和垂體。β-EP在疼痛調(diào)節(jié)中作為抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，具有嗎啡樣活性和調(diào)控疼痛信息傳遞的作用，在傷害性感覺中發(fā)揮重要作用[5-6]。生理狀態(tài)下β-EP的含量較少，在病理刺激下，其含量升高，通過μ和δ阿片受體產(chǎn)生抗痛覺過敏或鎮(zhèn)痛作用[7-8]。造模后的慢性靜力性損傷兔的β-EP水平均高于空白組。治療組和自然恢復(fù)組家兔不同時間點脊髓和下丘腦中β-內(nèi)啡肽的變化不盡相同。模型組兔β-EP含量較空白組明顯升高，可能因為長期的靜力性損傷使得機體自身產(chǎn)生修復(fù)反應(yīng)，包括體內(nèi)一些炎癥因子的釋放，通過不同因子的趨化作用和損傷修復(fù)作用，引起脊髓和下丘腦β-內(nèi)啡肽含量升高，從而對機體產(chǎn)生一定的保護作用；自然恢復(fù)組β-EP含量在10 d時開始下降，但治療組高于自然恢復(fù)組，可能因為自然恢復(fù)組中β-內(nèi)啡肽含量在沒有其他治療方法輔助的情況下升高時間不夠持久，對機體的鎮(zhèn)痛效果并不理想。治療組10 d脊髓和下丘腦β-內(nèi)啡肽的含量達到峰值。

CCK有許多存在形式，最主要的是八肽膽囊收縮素(CCK-8)，已發(fā)現(xiàn)的受體為CCKA和CCKB，CCK可能通過興奮CCKA受體與內(nèi)源性阿片系統(tǒng)協(xié)同抑制傷害性信息的傳入，而通過作用于CCKB受體抑制內(nèi)源性阿片的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，從而雙向調(diào)節(jié)傷害性信息的傳入[9-10]。CCK-8是現(xiàn)階段已知腦內(nèi)含量最多的神經(jīng)肽之一，存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道中，并且具有多種調(diào)節(jié)作用，其中之一是其對疼痛感受具有調(diào)整作用[11]。并有研究指出，CCK-8和β-EP作為一對互相拮抗的因子，共同參與了鎮(zhèn)痛作用[12]。本實驗結(jié)果顯示，模型組兔脊髓和下丘腦內(nèi)CCK-8含量明顯增加，可能因為靜力損傷時，局部炎癥持續(xù)存在刺激CCK-8的表達升高而產(chǎn)生痛覺過敏現(xiàn)象。治療組和自然恢復(fù)組兔脊髓和下丘腦中CCK-8含量較模型組降低，但治療組低于自然恢復(fù)組，說明理筋手法可降低兔脊髓和下丘腦內(nèi)升高的CCK-8含量，使其更快接近于正常水平，提示理筋手法可能通過抑制中樞CCK-8的合成，減少對阿片肽的拮抗作用，達到中樞鎮(zhèn)痛的目的。

綜上所述，理筋手法可能通過提高β-EP的表達及降低CCK-8的表達參與中樞鎮(zhèn)痛過程，至于這些物質(zhì)對疼痛的具體調(diào)控機制則有待于進一步研究。