黃芪甲苷通過SIRT1/PGC-1α通路促進(jìn)退變的髓核細(xì)胞增殖

馮仲鍇，孫永強(qiáng)，劉汝銀，岳宗進(jìn)，王新立

(河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院骨科脊柱病區(qū)，河南鄭州　450002)

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◇中醫(yī)藥研究◇

黃芪甲苷通過SIRT1/PGC-1α通路促進(jìn)退變的髓核細(xì)胞增殖

馮仲鍇，孫永強(qiáng)，劉汝銀，岳宗進(jìn)，王新立

(河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院骨科脊柱病區(qū)，河南鄭州450002)

目的探究黃芪甲苷對(duì)退變髓核細(xì)胞功能的影響及其作用機(jī)制。方法原代培養(yǎng)正常與退變髓核細(xì)胞并觀察，免疫組化檢測(cè)細(xì)胞中膠原蛋白Ⅱ(collagenⅡ)的表達(dá)；分別采用20、40、60、80μg/mL的黃芪甲苷處理細(xì)胞，通過CCK-8和MTT試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力和增殖，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；Westernblotting檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax和沉默信息調(diào)節(jié)因子2同源蛋白1(SIRT1)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔助激活因子-1(PGC-1α)的表達(dá)及其乙?；土姿峄剑槐壬z測(cè)丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、β-galactosidase和三磷酸腺苷(ATP)的含量。結(jié)果與正常髓核細(xì)胞相比，退變髓核組織中壞死細(xì)胞更多，且collagenⅡ表達(dá)降低；細(xì)胞經(jīng)不同濃度黃芪甲苷處理后，40μg/mL黃芪甲苷不僅能顯著提高退變髓核細(xì)胞活力，促進(jìn)細(xì)胞增殖并抑制其凋亡，而且能上調(diào)細(xì)胞中SIRT1、PGC-1α的蛋白表達(dá)和PGC-1α磷酸化水平，下調(diào)PGC-1α乙?；剑黾覵OD和ATP含量，降低MDA和β-galactosidase含量。結(jié)論黃芪甲苷可能通過激活SIRT1/PGC-1α信號(hào)通路促進(jìn)髓核細(xì)胞的增殖和存活。

黃芪甲苷；腰椎間盤突出癥；髓核細(xì)胞；增殖；凋亡；Ⅱ型膠原；沉默信息調(diào)節(jié)因子2同源蛋白1；過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔助激活因子-1α

腰椎間盤突出癥為下腰痛常見的原因之一，其主要特征是退變椎間盤內(nèi)髓核細(xì)胞功能降低和數(shù)量減少，collagenⅡ功能性基質(zhì)合成變緩等[1]。沉默信息調(diào)節(jié)因子2同源蛋白1(SIRT1)能促進(jìn)軟骨細(xì)胞生存，防止細(xì)胞炎性反應(yīng)[2]。過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔助激活因子-1α(PGC-1α)表達(dá)異常是老年性疾病發(fā)病的重要原因[3]，其蛋白的轉(zhuǎn)錄活性主要受磷酸化和乙酰化修飾方式的影響。之前有研究報(bào)道了SIRT1/PGC-1α信號(hào)通路的激活在保護(hù)心肌細(xì)胞和腎小球細(xì)胞抗氧化損傷和衰老等方面起重要作用[4]，但其對(duì)髓核細(xì)胞的功能研究尚未見報(bào)道。

傳統(tǒng)中藥黃芪的活性成分黃芪甲苷具有抗衰老等作用[5]。為了探討黃芪甲苷是否通過調(diào)控SIRT1/PGC-1α信號(hào)通路影響腰椎間盤突出患者髓核細(xì)胞的存活，本研究檢測(cè)了黃芪甲苷對(duì)腰椎間盤突出患者髓核細(xì)胞增殖、凋亡、SIRT1/PGC-1α信號(hào)通路以及氧化反應(yīng)相關(guān)部分基因表達(dá)的影響，以期為腰椎間盤突出癥的治療在尋找新的藥物靶點(diǎn)方面提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1研究對(duì)象研究對(duì)象來自2013年7月～2015年11月在河南省中醫(yī)院擇期手術(shù)的背柱側(cè)彎和腰椎間盤突出癥，患者36～55周歲，各11例(所有腰椎間盤突出患者的病理分型為膨出型，病變部位后縱韌帶未破裂，髓核組織未脫出)。術(shù)后收集廢棄的髓核組織每例約500mg。本研究經(jīng)河南省中醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均被告知實(shí)驗(yàn)詳情并簽署書面同意書。

1.2方法

1.2.1髓核細(xì)胞的原代細(xì)胞篩選及培養(yǎng)髓核組織經(jīng)洗滌、剪碎后加入胰蛋白酶，于37 ℃、50mL/LCO2恒溫箱中培養(yǎng)20min，棄上清，加入collagenⅡ(Invitrogen,Carlsbad,USA)消化后，濾液中加入PBS，離心，棄上清。用含200mL/L小牛血清的DMEM-F12(Invitrogen)培養(yǎng)基于37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，7d后第1次換液，以后每隔3d換液1次。有明顯細(xì)胞貼壁后，倒置相差顯微鏡下刮除長梭形及角形成纖維細(xì)胞區(qū)域，保留短梭形髓核細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)。

1.2.2免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)髓核細(xì)胞內(nèi)collagenⅡ的表達(dá)PBS清洗細(xì)胞，40g/L多聚甲醛固定30min，5mL/LTritonX-100通透化處理；經(jīng)H2O2和檸檬酸鹽緩沖液孵育后封閉30min；分別加CollagenⅡ一抗(Abcam,Cambridge,UK)、二抗(Abcam)孵育，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，封片后光鏡下觀察染色結(jié)果。

1.2.3CCK-8試劑盒檢測(cè)髓核細(xì)胞活力將髓核細(xì)胞以1×105個(gè)/mL的密度接種于96孔板中，細(xì)胞分為對(duì)照組(CON，無黃芪甲苷)和黃芪甲苷20、40、60、80μg/mL組。培養(yǎng)細(xì)胞24h后每孔加入20μLCCK-8溶液，孵育1h后測(cè)定A450nm。

1.2.4MMT法測(cè)定髓核細(xì)胞的增殖能力以2×104個(gè)細(xì)胞接種于96孔板，加含40μg/mL黃芪甲苷的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)24、48、72h，加20μL噻唑藍(lán)溶液于37 ℃孵育，吸棄孔內(nèi)溶液，加入150μL二甲基亞楓，避光振蕩10min后測(cè)A490nm[6]。

1.2.5流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡培養(yǎng)并收集髓核細(xì)胞，經(jīng)冷PBS清洗后，加入500μL緩沖液調(diào)整細(xì)胞密度至1×106個(gè)/mL。室溫避光加入5μLAnnexinV-FITC孵育15min，再加入5μLPI孵育5min，流式細(xì)胞儀上檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。

1.2.6丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、三磷酸腺苷(ATP)、β-糖苷酶(β-galactosidase)活性的測(cè)定髓核細(xì)胞中MDA、SOD等指標(biāo)嚴(yán)格按照測(cè)定試劑盒說明書進(jìn)行檢測(cè)[7]，MDA含量測(cè)定A532nm，SOD測(cè)定A550nm。β-半乳糖苷酶活性通過酶標(biāo)儀檢測(cè)，以鄰硝基苯基-β-半乳糖苷為無色底物，水解產(chǎn)生亮黃色鄰硝基酚，比色法定量測(cè)定細(xì)胞裂解液中β-半乳糖苷酶的活性。反相HPLC測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ATP含量。色譜柱采用ZorbaxRxC185μmODS柱(4.6mm×250mm)，流動(dòng)相為含有60mg/L甲醇的50mmol磷酸鹽緩沖液(pH=6.0)，流量為0.8mL/min，檢測(cè)254nm處波長。

1.2.7Real-timePCR檢測(cè)基因mRNA表達(dá)Trizol法提取細(xì)胞內(nèi)總RNA，吸取1μLRNA溶液測(cè)其濃度和純度。反轉(zhuǎn)錄按照試劑盒(Formentas)說明完成。熒光定量試劑盒(Fermentas)檢測(cè)各基因mRNA的表達(dá)情況。反應(yīng)的循環(huán)條件為：90 ℃預(yù)變性10min，95 ℃變性15s，60 ℃退火30s，72 ℃延伸30s，共38個(gè)循環(huán)。

1.2.8Westernblotting檢測(cè)蛋白及其乙?；⒘姿峄教崛〖?xì)胞總蛋白并用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。經(jīng)100g/L聚丙烯酰胺凝膠電泳并轉(zhuǎn)膜，加入一抗(Abcam)4 ℃孵育過夜，二抗(Abcam)室溫孵育1h。DAB顯色，曝光后分析灰度值。以β-actin為內(nèi)參。

2　結(jié)　　果

2.1人椎間盤正常髓核細(xì)胞和退變髓核細(xì)胞的形態(tài)及collagenⅡ的表達(dá)培養(yǎng)正常和退變的人腰椎間髓核細(xì)胞后觀察，發(fā)現(xiàn)正常髓核細(xì)胞大概4d左右開始貼壁生長，細(xì)胞形態(tài)清晰可見，貼壁后的原代髓核細(xì)胞多成類圓形和短梭形(圖1A)。而退變髓核細(xì)胞直到第6天才開始貼壁生長，細(xì)胞分裂及增殖極為緩慢，出現(xiàn)較多壞死的髓核細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)相對(duì)模糊(圖1B)。

特異標(biāo)志物collagenⅡ免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，在正常髓核細(xì)胞中呈現(xiàn)明顯棕黃色，且離胞核越近染色越深(圖1C)。在退變的髓核細(xì)胞中，胞質(zhì)棕黃色顆粒表達(dá)比正常髓核細(xì)胞要少(圖1D)，提示collagenⅡ在退變髓核細(xì)胞中的表達(dá)降低。

圖1正常和退變的髓核細(xì)胞形態(tài)變化及免疫組化檢測(cè)CollagenⅡ的表達(dá)情況

Fig.1ImmunohistochemicalstainingofcollagenⅡandmorphologyofnormalanddegenerativenucleuspulposuscells

A、B：正常和退變髓核細(xì)胞的形態(tài)；C、D：免疫組化檢測(cè)正常和退變髓核細(xì)胞表面CollagenⅡ的表達(dá)。

2.2低濃度黃芪甲苷能提高退變髓核細(xì)胞的活力分別用20、40、60、80μg/mL黃芪甲苷培養(yǎng)細(xì)胞96h。CCK-8檢測(cè)結(jié)果表明，在黃芪甲苷濃度20～40μg/mL時(shí)，退變髓核細(xì)胞的活力逐漸升高，且在40μg/mL時(shí)細(xì)胞活性最強(qiáng)(P=0.005 8，圖2)。當(dāng)黃芪甲苷濃度達(dá)到80μg/mL時(shí)，對(duì)細(xì)胞活性起到抑制作用(P=0.021)。

圖2CCK-8試劑盒檢測(cè)不同濃度黃芪甲苷對(duì)退變髓核細(xì)胞活力的抑制作用

Fig.2InhibitionofdifferentconcentrationsofastragalosideoncellviabilitydetectedwithCCK-8Kit

與對(duì)照組相比，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 黃芪甲苷促進(jìn)退變髓核細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡與對(duì)照組相比，40μg/mL黃芪甲苷對(duì)退變髓核細(xì)胞增殖起促進(jìn)作用(P48=0.022，P72=0.038，P96=0.027；圖3A)。經(jīng)黃芪甲苷處理后，細(xì)胞早期凋亡率由9.36%下調(diào)至4.75%(圖3B)。黃芪甲苷能上調(diào)BcL-2表達(dá)(P=0.044)，下調(diào)Bax表達(dá)(P=0.011，圖3C)。這些結(jié)果提出黃芪甲苷能促進(jìn)退變髓核細(xì)胞增殖，又抑制其凋亡。

2.4黃芪甲苷對(duì)退變髓核細(xì)胞中氧化反應(yīng)相關(guān)基因表達(dá)的影響圖4A和4D表明，MDA(P=0.031)和β-galactosidase(P=0.014)在黃芪甲苷干預(yù)組表達(dá)低于對(duì)照組；圖4B和圖4C顯示，SOD活性(P=0.030)和ATP濃度(P=0.033)在黃芪甲苷處理后高于對(duì)照組。這些結(jié)果提示黃芪甲苷可能通過抗氧化作用調(diào)控退變髓核細(xì)胞的增殖和凋亡。

2.5黃芪甲苷對(duì)退變髓核細(xì)胞中SIRT1/PGC-1α信號(hào)通路的影響為了探討黃芪甲苷是否通過調(diào)控SIRT1/PGC-1α信號(hào)通路調(diào)控細(xì)胞抗氧化，采用Westernblotting方法檢測(cè)了SIRT1、PGC-1α蛋白的表達(dá)(圖5A)以及PGC-1α的乙?；土姿峄?圖5B)。在黃芪甲苷干預(yù)組中，SIRT1(P=0.017)和PGC-1α(P=0.024)的表達(dá)均高于對(duì)照組。PGC-1α的乙?；皆邳S芪甲苷干預(yù)后的細(xì)胞中下調(diào)(P=0.046)，而磷酸化水平上調(diào)(P=0.041)。表明黃芪甲苷可能通過激活SIRT1/PGC-1α信號(hào)通路調(diào)控細(xì)胞的抗氧化作用。

3　討　　論

黃芪甲苷是骨質(zhì)疏松等骨衰老疾病治療中的常見藥物[5,8-9]，它不僅能誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化[10]，還具有促進(jìn)骨髓基質(zhì)細(xì)胞和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞等增殖的作用。為了探究黃芪甲苷對(duì)退變髓核細(xì)胞的作用，本研究首先采用不同濃度的黃芪甲苷處理細(xì)胞，觀察細(xì)胞的活性、增殖和凋亡情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，40μg/mL的黃芪甲苷能最大限度地提高退變髓核細(xì)胞的活性，促進(jìn)細(xì)胞增殖；與此同時(shí)，細(xì)胞凋亡被抑制。待藥物濃度繼續(xù)增加80μg/mL后，細(xì)胞活性受到抑制。這些結(jié)果與之前報(bào)道的研究結(jié)果基本一致，即兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞在40μg/mL的黃芪甲苷培養(yǎng)基中生長速度最快[11]。綜合這些結(jié)果，說明一定濃度的黃芪甲苷對(duì)退變髓核細(xì)胞生長具有明顯的促進(jìn)作用，由此也可以確定40μg/mL是黃芪甲苷促進(jìn)細(xì)胞增殖的最適濃度，此后的實(shí)驗(yàn)均采用這一濃度。

圖3 黃芪甲苷對(duì)退變髓核細(xì)胞增殖和凋亡的影響Fig.3EffectofastragalosideoncellproliferationandapoptosisindegenerativenucleuspulposuscellsA:MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖;B:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡;C:Westernblotting檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Bcl-2和Bax的表達(dá)。與對(duì)照組相比,*P<0.05。

圖4黃芪甲苷對(duì)退變髓核細(xì)胞中氧化反應(yīng)相關(guān)基因表達(dá)的影響

Fig.4Effectofastragalosideontheexpressionofoxidationreactionrelatedgenesindegenerativenucleuspulposuscells

A、B、C、D：比色法分別鑒定各組細(xì)胞內(nèi)MDA含量、SOD活性、ATP含量和β-galactosidase活性。與對(duì)照組相比，*P<0.05。

圖5Westernblotting檢測(cè)黃芪甲苷對(duì)退變髓核細(xì)胞SIRT1/PGC-1α信號(hào)通路的影響

Fig.5EffectsofastragalosideonSIRT1/PGC-1αsignalingpathwayindegenerativenucleuspulposuscellsmeasuredbyWesternblotting

A：細(xì)胞內(nèi)SIRT1和PGC-1α蛋白的表達(dá)；B：細(xì)胞內(nèi)PGC-1α乙酰化和磷酸化的水平。與對(duì)照組相比，*P<0.05。

SIRT1目前被認(rèn)為是一種新型蛋白參與細(xì)胞的衰老過程[12-13]，而且能通過激活蛋白激酶B(Akt)信號(hào)通路抑制退變髓核細(xì)胞的凋亡[14]。之前的研究發(fā)現(xiàn)，SIRT1/PGC-1α信號(hào)通路在心肌細(xì)胞和腎小球細(xì)胞抗氧化損傷和衰老等方面起重要作用[4]。SIRT1可通過對(duì)PGC-lα的去乙?；土姿峄饔眉せ頟GC-1α，啟動(dòng)多個(gè)線粒體氧化相關(guān)的基因表達(dá)[15]。在本實(shí)驗(yàn)中，黃芪甲苷不僅可以提高退變髓核細(xì)胞中SIRT1酶活性，也能上調(diào)PGC-1α蛋白磷酸化水平、下調(diào)PGC-1α蛋白乙酰化水平激活PGC-1α，說明黃芪甲苷發(fā)揮其促進(jìn)細(xì)胞增殖作用與SIRT1/PGC-1信號(hào)通路的激活相關(guān)。另外，40μg/mL的黃芪甲苷增加了細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶基因SOD等的活性和ATP含量，同時(shí)又降低了細(xì)胞內(nèi)氧化產(chǎn)物MDA和β-galactosidase，這也進(jìn)一步證實(shí)黃芪甲苷通過激活SIRT1/PGC-1通路保護(hù)退變的髓核細(xì)胞免受氧化損傷，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活。

綜上所述，黃芪甲苷可作為髓核細(xì)胞的生長刺激因子以激活髓核細(xì)胞活性和細(xì)胞外基質(zhì)的合成，這將有利于其退行性椎間盤病變的修復(fù)和重建，也為其臨床治療提供了新的理論依據(jù)。但其在活體水平的作用仍不明確，還需進(jìn)一步研究。

[1]ZHUZ,HUANGP,CHONGY,etal.NucleuspulposuscellsderivedIGF-1andMCP-1enhanceosteoclastogenesisandvertebraedisruptioninlumbardischerniation[J].IntJClinExpPatho, 2014, 7(12):8520-8520.

[2] 胡斌，徐宏光，宋俊興. 沉默信息調(diào)節(jié)因子2同源蛋白1與軟骨細(xì)胞[J]. 國際骨科學(xué)雜志, 2012, 33(4):237-239.

[3] 閆春雷，黃欣，蘇樂群.PGC-1α的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和翻譯后修飾[J]. 中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào), 2015, 31(1):12-19.

[4]FUNKJA,SCHNELLMANNRG.AcceleratedrecoveryofrenalmitochondrialandtubulehomeostasiswithSIRT1/PGC-1αactivationfollowingischemia-reperfusioninjury[J].ToxicolApplPharm, 2013, 273(2):345-354.

[5]YUL,WULIJIA,GONGG.Anti-agingandenhancedphysiqueactivitiesresearchofastragalusmongolicuswaterextractinmice[J].ClinExpPharmacol, 2015, 5(175):2161-1459.1000175.

[6]MOSMANNT.Rapidcolorimetricassayforcellulargrowthandsurvival:applicationtoproliferationandcytotoxicityassays[J].JImmunolMethods, 1983, 65(1):55-63.

[7]FUYF,XIONGY,GUOZ.Areductionofendogenousasymmetricdimethylargininecontributestotheeffectofcaptoprilonendothelialdysfunctioninducedbyhomocysteineinrats[J].EurJPharmacol, 2005, 508(1):167-175.

[8]KOOHJ,SOHNEH,KIMYJ,etal.EffectofthecombinatorymixtureofRubuscoreanusMiquelandastragalusmembranaceusBungeextractsonovariectomy-inducedosteoporosisinmiceandanti-RANKsignalingeffect[J].JEthnopharmacol, 2014, 151(2):951-959.

[9]JINGX,QIUB,WANGJ,etal. In vitroanti-tumoreffectofhumandendriticcellsvaccineinducedbyastragaluspolysacharin:anexperimentalstudy[J].ZhongguoZhongXiYiJieHeZaZhi, 2014, 34(9):1103-1107.

[10]QIANXW,PANDM,TANXI,etal.EffectofserumoftraditionalChinesemedicineontheexpressionofCol2a1andacanduringchondrogenicdifferentiationofratbMSCsin vitro[J].LishizhenMed&MateriaMedRes, 2012, 23(2):340-343.

[11] 劉維統(tǒng)，王躍，郝鵬，等. 黃芪甲苷對(duì)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 實(shí)用醫(yī)院臨床雜志, 2009, 6(4):44-47.

[12] 周正頤.SIRT1在炎癥反應(yīng)和細(xì)胞衰老的研究進(jìn)展[J]. 大家健康, 2015, 9(10):289-289.

[13]POTENTEM,GHAENIL,BALDESSARID,etal.SIRT1controlsendothelialangiogenicfunctionsduringvasculargrowth[J].GeneDev, 2007, 21(20):2644-2658.

[14]WANGDW,HUZM,HAOJ,etal.SIRT1inhibitsapoptosisofdegenerativehumandiscnucleuspulposuscellsthroughactivationofAktpathway[J].Age, 2013, 35(5):1741-1753.

[15]NEMOTOS,FERGUSSONMM,FINKELT.SIRT1functionallyinteractswiththemetabolicregulatorandtranscriptionalcoactivatorPGC-1α[J].JBiolChem, 2005, 280(16):16456-16460.

(編輯卓選鵬)

AstragalosidepromotestheproliferationofdegenerativenucleuspulposuscellsthroughactivatingSIRT1/PGC-1αpathway

FENGZhong-kai,SUNYong-qiang,LIURu-yin,YUEZong-jin,WANGXin-li

(DepartmentofOrthopedics,RachiopathyWard,theSecondAffiliatedHospitalofHenanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450002,China)

ObjectiveToexploretheeffectsandmechanismsofastragalosideondegenerativenucleuspulposuscells.MethodsNormalanddegenerativenucleuspulposuscellswereculturedandobserved,collagenⅡwasdetectedbyimmunohistochemicalstaining.Degenerativenucleuspulposuscellswereculturedwithastragalosideattheconcentrationsof20, 40, 60and80μg/mL,respectively.ThecellviabilityandproliferationweredetectedusingCCK-8assayandMTT.Meanwhile,cellapoptosiswasdeterminedbyflowcytometryanalysis;WesternblottingwasthenusedtodeterminetheexpressionsofBcl-2,Bax,SIRT1andPGC-1αaswellasthelevelofacetylationandphosphorylationforPGC-1α;MDA,SOD,β-galactosidaseandATPweremeasuredbycolorimetry.ResultsComparedwiththenormalnucleuspulposuscells,thedegenerativenucleuspulposuscellsshowedmorepatchesofnecrosisandlowerexpressionofcollagenⅡ.Thecellviabilityandproliferationwereincreasedaftertreatmentwith40μg/mLofastragaloside.However,cellapoptosiswasinhibited.Moreover,theastragaloside-treatedgroupshowedincreasedSIRT1andPGC-1α,phosphorylationofPGC-1α,SODandATP;butdecreasedacetylationofPGC-1α,MDAandβ-galactosidase.ConclusionLow-doseastragalosidepromotestheproliferationandsurvivalofdegenerativenucleuspulposuscellsthroughactivatingSIRT1/PGC-1αpathway.

astragaloside;lumbarintervertebraldischerniation;degenerativenucleuspulposuscell;proliferation;apoptosis;typeⅡcollagen;Sirtuin1;PPARγcoactivator-1α

2016-03-17

2016-04-27

馮仲鍇.E-mail:huiqingguohn@163.com

R318；R285.5

A

10.7652/jdyxb201605026

優(yōu)先出版：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20160805.0950.004.html(2016-08-05)