免疫組化技術(shù)在制作病理組織切片中的應(yīng)用價(jià)值分析

李博

大慶油田總醫(yī)院,黑龍江 大慶 163001

在惡性腫瘤診斷中組織病理診斷一直是金標(biāo)準(zhǔn)[1]，也是主要方式，在病理組織切片制作過(guò)程中，免疫組化技術(shù)就是主要的一種，是通過(guò)染色反應(yīng)，對(duì)細(xì)胞內(nèi)抗原或組織進(jìn)行定位，在惡性腫瘤診斷、鑒別、預(yù)后判定等方面被廣泛應(yīng)用。有著操作簡(jiǎn)單、標(biāo)本保存時(shí)間長(zhǎng)、定位準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)[2]。為了進(jìn)一步確定其應(yīng)用價(jià)值本院進(jìn)行了此次研究，詳情如下：

1 資料和方法

1.1一般資料 將90例2019年9月-2020年9月在本院做病理組織檢驗(yàn)患者的病理組織標(biāo)本作為本次研究對(duì)象，并利用數(shù)字表法分組，隨機(jī)分成各45片(例)。對(duì)照組患者35～65歲，中間值(49.62±5.58)歲，男女比例20:25，標(biāo)本來(lái)源：8例胃癌、7例乳腺癌、12例肺癌、18例肝癌。研究組患者37～68歲，中間值(43.71±5.26)歲，男女比例21:24，標(biāo)本來(lái)源：9例胃癌、6例乳腺癌、13例肺癌、17例肝癌。比較兩組標(biāo)本及患者的基礎(chǔ)信息無(wú)顯著差異(P>0.05)，不會(huì)對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生影響。

1.2方法

1.2.1對(duì)照組 在病理組織切片制作過(guò)程中采用傳統(tǒng)方法，①病理組織離體后30分鐘內(nèi)固定處理，放到低溫環(huán)境中或是放在固定液中保存。之后將其放到10%中性緩沖甲醛溶液內(nèi)，處理8～24小時(shí)[3]。②經(jīng)過(guò)處理的標(biāo)本通過(guò)熱修復(fù)法，修復(fù)和引導(dǎo)抗原，抗原修復(fù)時(shí)間為3～15分鐘，修復(fù)液pH值7.5～8.5，修復(fù)溫度大于100℃。③根據(jù)病理組織切片制作流程規(guī)范操作，為了防止發(fā)生邊緣效應(yīng)，要均勻添加試劑、劑量充足，脫蠟時(shí)間充足，試劑面積比切片組織大0.05～0.35cm。

1.2.2研究組 在病理組織切片制作過(guò)程中采用免疫組化技術(shù)，①在室溫環(huán)境中，進(jìn)行常規(guī)脫蠟切片操作，之后在3%雙氧水中浸泡組織標(biāo)本20分鐘，再對(duì)組織切片反復(fù)沖洗三次，沖洗液為磷酸鹽緩沖液，每次沖洗時(shí)長(zhǎng)為5分鐘，共沖洗15分鐘[4]。②在1000mL燒杯中放入pH值為6的檸檬酸緩沖液(700mL)，加熱到沸騰狀態(tài)，將組織切片放入其中，繼續(xù)加熱15分鐘取出，所有切片滴加一抗后進(jìn)行過(guò)夜孵育，冰箱溫度為40℃。③取出組織切片，使用磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗三次，每次5分鐘[5]。④在室溫狀態(tài)下，所有切片滴加二抗，進(jìn)行15分鐘的孵育，之后再次使用磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗三次，每次5分鐘。⑤把組織切片放到顯色劑中5～10分鐘，取出后用蘇木精襯染、水洗，再用脫水透明樹(shù)膠封固。

1.3觀察指標(biāo) 對(duì)兩組病理組織切片制作質(zhì)量做評(píng)估，顯微鏡下不容易觀察，對(duì)比不明顯，氣泡或褶皺較多、組織結(jié)構(gòu)受損、編號(hào)不清，則為差質(zhì)片；顯微鏡下比較容易觀察，沒(méi)有脫片、非特異性著色等情況，無(wú)氣泡或污染，褶皺少，無(wú)組織結(jié)構(gòu)受損，則為良質(zhì)片；顯微鏡下非常容易觀察，染色明顯，可見(jiàn)清晰的細(xì)胞形態(tài)、沒(méi)有裂痕損害情況，薄厚均勻，組織結(jié)構(gòu)完整，則為優(yōu)質(zhì)片。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 借助SPSS22.0軟件處理研究數(shù)據(jù)，x2檢驗(yàn)定數(shù)資料，用百分比描述，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義成立時(shí)P<0.05。

2 結(jié) 果

研究組差質(zhì)片2片(4.44%)、良質(zhì)片16片(35.56%)、優(yōu)質(zhì)片27片(60.00%)，制片優(yōu)良率為95.56%；對(duì)照組差質(zhì)片12片(26.67%)、良質(zhì)片18片(40.00%)、優(yōu)質(zhì)片15片(33.33%)，制片優(yōu)良率為73.33%，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義成立(P<0.05)。

3 討 論

在惡性腫瘤病理組織學(xué)診斷中，免疫組化技術(shù)是主要技術(shù)，有著較高的準(zhǔn)確率[6]。所謂免疫組化，主要是定位、定性、定量分析病理組織中的抗原，從根本上講，免疫組化顯色屬于酶催化作用，在與抗原抗體復(fù)合物中的過(guò)氧化物、底物、堿性磷酸酶產(chǎn)生反應(yīng)過(guò)程中，產(chǎn)生的復(fù)合物帶有相應(yīng)的顏色，同時(shí)在組織、細(xì)胞抗原中沉淀，所以可以體現(xiàn)出組織病理的陽(yáng)性表達(dá)情況。細(xì)胞標(biāo)本、石蠟切片是兩種常用的病理組織標(biāo)本，后者應(yīng)用率更高[7]。與傳統(tǒng)的制作病理組織切片的技術(shù)相比較，免疫組化技術(shù)不僅準(zhǔn)確性高，而且敏感性好、反應(yīng)時(shí)間短，能鑒別腫瘤細(xì)胞屬性、確定腫瘤分期、判定腫瘤性質(zhì)。另外，有研究表明[8]，在未分化的惡性腫瘤分類診斷中，免疫組化技術(shù)也有著良好的效果。

在此次研究中，利用免疫組化技術(shù)的研究組，制片優(yōu)良率為95.56%，利用傳統(tǒng)制片技術(shù)的對(duì)照組僅為73.33%，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義成立(P<0.05)。充分說(shuō)明，免疫組化技術(shù)的運(yùn)用有助于改善病理組織制片質(zhì)量，染色明顯，組織結(jié)構(gòu)完整不容易受損，不容易產(chǎn)生氣泡或褶皺，細(xì)胞形態(tài)清晰可見(jiàn)，在顯微鏡下更容易觀察。

總而言之，在制作病理組織切片中免疫組化技術(shù)有著較高的應(yīng)用價(jià)值，制片質(zhì)量更高，有助于提高病理檢驗(yàn)水平，值得深入推廣應(yīng)用。