可選擇性的讓甘氨酸和D-丙氨酸從肽N末端游離的曲菌肽酶

楠木憲一

有報(bào)告說革蘭氏陰性菌Ochrobacterium anthropi的D-氨基酸特異性氨肽酶（D-stereospecific aminopeptidase，DAP），會(huì)從基質(zhì)開始以極為特異的方式讓N末端的D-丙氨酸游離。幾乎找不到有關(guān)真核生物的D-氨基酸的特異性氨肽酶的相關(guān)報(bào)告，但研究人員還是從曲菌基因中抽取到的氨基酸氨肽酶中，發(fā)現(xiàn)了與上述DAP相同的基因。

與O.Anthropi的DAP有相同性的DNA領(lǐng)域在某種絲狀菌的基因中找到了，考慮到該基因的特異性，將其命名為甘氨酸-D-丙氨酸氨基肽酶（glycine-D-Alanine aminopeptidase，gdaA）。gdaA與O.Anthropi的DAP在氨基酸排列上的有43%是相同的，即讓gdaA基因過量表達(dá)并使其積蓄在曲菌細(xì)胞內(nèi)。曾用最少瓊脂培養(yǎng)基和全瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)gdaA基因高表達(dá)株、該菌破壞株以及對(duì)照株，并未發(fā)現(xiàn)它們?cè)诜敝骋约版咦有纬缮系牟顒e，由此認(rèn)為gdaA基因并非曲菌繁殖所必需的基因。另外，用液體全培養(yǎng)基培養(yǎng)基因破壞株和對(duì)照株，從回收的菌體中調(diào)制無細(xì)胞的提取液，檢測(cè)其氨基肽酶活性，結(jié)果顯示對(duì)照株隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長其比活性增長，而gdaA基因破壞株的分解活性卻始終處于低水，據(jù)此可認(rèn)為gdaA是曲菌細(xì)胞內(nèi)使甘氨酸和D-丙氨酸游離，即氨基肽酶活性的主要酶。