熒光實時定量PCR法檢測流感病毒核酸的質(zhì)控效果分析

遼陽市衛(wèi)生健康服務(wù)中心臨床檢驗科 （遼寧 遼陽 111000）

內(nèi)容提要：目的：探究流感病毒核酸檢測中采用熒光實時定量PCR法的質(zhì)控效果分析。方法：于2017年3月～2018年3月，選取本院收治的流感病例576例，全部患者都借助實時熒光定量PCR法檢測流感病毒核酸，并對陽性率與陽性樣本類型進(jìn)行檢測與總結(jié)。結(jié)果：全部病例576例經(jīng)流感病毒核酸檢測有136例呈陽性，陽性率23.61%；所有陽性樣本中，甲型H1N1、甲型H3流感、甲通分別有117例、9例、10例，所占比例分別為20.31%、1.56%、1.74%。結(jié)論：流感病毒核酸檢測中采用熒光實時定量PCR法檢測具有科學(xué)性與有效性的特點，可快速、準(zhǔn)確地檢測流感病毒核酸，對檢測結(jié)果予以質(zhì)量控制，可使檢測結(jié)果準(zhǔn)確性進(jìn)一步提高，臨床價值顯著。

流感屬于急性呼吸系統(tǒng)疾病，通常是因為流感病毒導(dǎo)致的，主要以呼吸道癥狀、酸痛以及高熱等為主要表現(xiàn)[1]。流感的潛伏期較短，但傳播速度較快，具有較強的傳染性，對人類的生命安全有嚴(yán)重威脅。因此充分重視流感的預(yù)防十分必要[2]。熒光實時定量PCR法將傳統(tǒng)PCR法的特異性不強與污染等問題充分改善，借助電腦軟件的配合，促使每次循環(huán)都可將一次熒光信號強度檢測出來，從而獲取標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量的結(jié)果[3]?，F(xiàn)階段，熒光實時定量PCR法在多個領(lǐng)域發(fā)揮重要作用，如疾病診斷以及食品安全等。為了分析熒光實時定量PCR對流感病毒核酸的質(zhì)量控制效果，本研究選取于2017年3月～2018年3月收治的流感病例576例，都借助實時熒光定量PCR法檢測流感病毒核酸，具體情況如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

于2017年3月～2018年3月選取本院收治的流感病例576例，其中有男性290例，所占比例50.35%，女性286例，所占比例49.65%；年齡13～87歲，平均（50.26±37.74）歲。

1.2 方法

提取流感病毒核酸：提取全部流感病例的流感病毒核酸，方法如下：選取一支1.5mL試管，確保其無菌、無酶，將560μL AVL加入其中，選取140μL病毒培養(yǎng)物置入，充分混合15s，在15～20°C環(huán)境下保溫10min，予以離心處理；將560μL的70%乙醇加入其中，使混合器旋轉(zhuǎn)充分混勻15s，混合液分兩次吸在帶濾膜離心柱上，選擇8000rpm進(jìn)行離心處理1min，將收集管內(nèi)的離心液棄除；將柱蓋小心打開，將560μL AVL加入其中，關(guān)蓋，6000g，選擇8000rpm進(jìn)行離心處理15min，把離心后的濾柱轉(zhuǎn)移至新的收集管（2mL）上，將500lAW2添加柱中，關(guān)蓋，6000g，選擇8000rpm進(jìn)行離心處理3min，將收集管內(nèi)的離心液棄除，離心處理，使AW2液完全棄除；把1.5mL離心管裝入離心柱上，將杯蓋小心打開，把60μL AVE慢慢加入，在室溫下保持1min，6000g，選擇8000rpm進(jìn)行離心處理1min，對離心液有效收集，也就是提取病毒RNA。

熒光實時定量PCR法：對混合液20μL處理好的5μL樣本RNA進(jìn)行熒光實時定量PCR檢查側(cè)，都采用FAM通道作為反應(yīng)體系25μL的熒光通道，使基團(tuán)None猝滅。把PCR反應(yīng)管有效蓋好并予以擴增反應(yīng)，條件為50°C30min～95°C10min（95°C15s～55°C40s，循環(huán)次數(shù)45次）。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

于陰陽性參考都正常的情況下，CT值＜36說明反應(yīng)為陽性，沒有CT值或者CT值是0說明反應(yīng)為陰性，灰區(qū)表示Ct值在36～40范圍內(nèi)。

2.結(jié)果

于2017年3月～2018年3月采集的流感病例576例經(jīng)流感病毒核酸檢測有136例呈陽性，陽性率23.61%；有陽性樣本中，甲型H1N1、甲型H3流感、甲通分別有117例、9例、10例，所占比例分別為20.31%、1.56%、1.74%。

3.討論

流感作為屬于傳染性疾病的一種，具有較快的傳播速度，且傳染性比較強。流感主要是因為流感病毒導(dǎo)致的，主要分為三類，一類為甲型，一類為乙型，另一類為丙型[4]。流感在我國具有較高的發(fā)病率，且流感在我國也很容易出現(xiàn)變異，人如果感染流感病毒，會直接威脅人們的生活與工作，也會導(dǎo)致一系列并發(fā)癥，威脅人們的生命健康安全。因此，加強對流感的檢測與防控，對確保人們的生命安全有積極影響。對流感病毒的檢測，一般會受到檢測環(huán)境的干擾，所以，加強對實驗室檢測方法的質(zhì)量控制，可盡可能確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，進(jìn)而對防控流感提供有條件[5]。

流感病毒很容易變異，人們對變異性流感病毒菌株的免疫性較弱，致使流感極易爆發(fā)與蔓延，對整個地區(qū)人們的生命健康與安全造成直接的影響。

最近幾年，借助熒光定量PCR技術(shù)檢測流感病毒核酸的檢測效果良好，熒光實時定量PCR法就是于PCR指數(shù)擴增過程中，借助持續(xù)監(jiān)測熒光信號強弱的變化情況，對特異性產(chǎn)物的量進(jìn)行即時測定，并由此推測目標(biāo)基因的初始量。熒光實時定量PCR法對流感病毒核酸的檢測效果較好，具有操作簡便、安全性高、可重復(fù)操作以及特異性較強的特點，由整個實驗過程都處在封閉環(huán)境內(nèi)，因此，使污染風(fēng)險明顯降，且檢測效果具有科學(xué)性與準(zhǔn)確性的特點，促使其在臨床上被廣泛運用[6]。

本研究探究了熒光實時定量PCR對流感病毒核酸的質(zhì)量控制效果，結(jié)果顯示：采集的流感病例576例經(jīng)流感病毒核酸檢測有136例呈陽性，陽性率23.61%；所有陽性樣本中，甲型H1N1、甲型H3流感、甲通分別有117例、9例、10例，所占比例分別為20.31%、1.56%、1.74%，不同流感病毒的發(fā)生率間有明顯不同，說明熒光實時定量PCR法對流感病毒核酸的檢測具有科學(xué)與有效的特點。但熒光實時定量PCR法也存在一定不足，如對實驗操作有較高的要求，操作人員對有關(guān)原理以及操作熟練掌握，且對實驗結(jié)果的影響因素較多，需確保環(huán)境溫度等相關(guān)因素的穩(wěn)定，且實驗的成本相對較高，基層普及有一定難度。因此，熒光實時定量PCR法對流感病毒核酸檢測需予以質(zhì)量控制，使實驗室技術(shù)水平顯著提高，促使檢驗結(jié)果準(zhǔn)確性進(jìn)一步提升。

總而言之，流感病毒核酸檢測中采用熒光實時定量PCR法檢測，科學(xué)性與有效性特征顯著，可對流感病毒核酸快速且準(zhǔn)確的檢測，加強對檢測結(jié)果的質(zhì)量控制，可提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，為臨床治療提供有利參考。