全自動(dòng)微生物鑒定儀在淋球菌鑒定中的意義研究

張國斌 沈陽市疾病預(yù)防控制中心 （遼寧 沈陽 110032）

內(nèi)容提要： 目的：分析全自動(dòng)微生物鑒定儀在淋球菌鑒定中的意義。方法：本實(shí)驗(yàn)所采取的樣本來源為某院2017年6月～2019年6月門診疑似淋病的女性患者子宮頸分泌物樣本，共計(jì)116例。對(duì)于所有樣本實(shí)施儀器法以及手工法細(xì)菌學(xué)檢測工作，分析結(jié)果。結(jié)果：利用手工實(shí)驗(yàn)法，于116個(gè)疑似病例內(nèi)檢出71例存在淋球菌；全自動(dòng)微生物鑒定設(shè)備中，于116個(gè)疑似病例內(nèi)檢出70例存在淋球菌。兩組受試者檢測精準(zhǔn)性無明顯差異，P＞0.05。設(shè)備法平均用時(shí)為（54.24±1.65）h，手工法平均用時(shí)為（73.52±1.62）h。和手工法相比，設(shè)備法檢測用時(shí)更少，P＜0.05。結(jié)論：全自動(dòng)微生物鑒定設(shè)備在院內(nèi)微生物鑒定方面發(fā)揮出了舉足輕重的作用。利用此鑒定儀可在根本上提升并球菌檢出率。

淋病為一類臨床常見病、多發(fā)病。該疾病主要指的是經(jīng)由淋球菌感染所引發(fā)的一類性傳播疾病。相關(guān)統(tǒng)計(jì)證實(shí)，此類疾病在細(xì)菌性性傳播疾病中流行率第二位。患者發(fā)病之后，可能會(huì)出現(xiàn)諸如宮頸炎、尿道炎等合并癥。利用有效方式全面減少淋病的傳播率，有著相當(dāng)重要的現(xiàn)實(shí)意義[1]?，F(xiàn)如今，在多種因素的影響之下，致使淋球菌耐藥情況趨于嚴(yán)重。其已然成為了淋病預(yù)防和治療所面臨的重要性問題。結(jié)合實(shí)際情況，本文全面探究全自動(dòng)微生物鑒定設(shè)備在淋球菌鑒定中的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本實(shí)驗(yàn)所采取的樣本來源為某院2017年6月～2019年6月門診疑似淋病的女性患者子宮頸分泌物樣本，共計(jì)116例。對(duì)所有樣本實(shí)施儀器法以及手工法細(xì)菌學(xué)檢測工作。實(shí)驗(yàn)利用珠海銀科醫(yī)學(xué)工程有限公司所提供的淋球菌分離培養(yǎng)板。其他包含葡萄糖、觸酶、革蘭氏染色液、全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)、藥敏鑒定卡、VITEK NH卡。以上材料以及試劑均在有效期內(nèi)。

1.2 方法

1.2.1 傳統(tǒng)手工檢驗(yàn)法

工作人員收集完畢女性陰道分泌物樣本以后，第一時(shí)間將其接種在事先預(yù)熱到37°C的淋球菌分離培養(yǎng)板中。后將拭子緊緊貼于培養(yǎng)基表面滾動(dòng)布大約25%培養(yǎng)皿。在此之后，做好分區(qū)工作。在此之后，于培養(yǎng)皿內(nèi)取得單體細(xì)菌菌落。做好上述工作以后，把接種后的樣本馬上放到5%～10%二氧化碳?xì)獯鼉?nèi)加濕培養(yǎng)處理。時(shí)間為24～48h，溫度環(huán)境為35～36°C[2]。后形成濕潤、突起、光滑現(xiàn)象、圓形、灰白色的非透明樣菌落。進(jìn)一步開展分離工作。取用純培養(yǎng)物開展涂片操作，實(shí)施革蘭染色鏡檢，確定其為革蘭氏陰性菌。具體為卵圓形或腎形，成雙排列。在此之后，實(shí)施觸酶氧化酶試驗(yàn)，確定結(jié)果為陽性、葡萄糖分解18～24h。于35～36°C環(huán)境下培養(yǎng)確定為淋球菌。

1.2.2 儀器法

擇取高度疑似培養(yǎng)基菌落，通過革蘭氏染色處理之后，經(jīng)鏡檢確定為革蘭氏陰性雙球菌。在此之后，依照設(shè)備規(guī)定步驟開展菌液配制工作。后將事先填充完畢的鑒定卡和藥敏鑒定卡一起放入到設(shè)備之中。經(jīng)6～8h反應(yīng)后得出結(jié)果。其為99%可能性的淋病奈瑟氏菌，取得鑒定結(jié)果。

在此同時(shí)利用設(shè)備開展藥敏實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)：淋病奈瑟氏菌針對(duì)于頭孢西丁、頭孢曲中的敏感性分別為97.45%以及97.66%；其針對(duì)于四環(huán)素以及青霉素的敏感性為5.99%以及15.28%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本實(shí)驗(yàn)利用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)數(shù)據(jù)內(nèi)的計(jì)數(shù)資料開展χ2檢驗(yàn)分析，計(jì)量資料開展t值檢驗(yàn)分析。P＜0.05，為相關(guān)數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.結(jié)果

利用手工實(shí)驗(yàn)法，于116個(gè)疑似病例內(nèi)檢出71例存在淋球菌；全自動(dòng)微生物鑒定設(shè)備中，于116個(gè)疑似病例內(nèi)檢出70例存在淋球菌。兩組受試者檢測精準(zhǔn)性無明顯差異，P＞0.05。設(shè)備法平均用時(shí)為（54.24±1.65）h，手工法平均用時(shí)為（73.52±1.62）h。和手工法相比，設(shè)備法檢測用時(shí)更少，P＜0.05。利用全自動(dòng)微生物檢驗(yàn)法，能同時(shí)取得藥敏結(jié)果，方便患者及時(shí)診斷，盡早治療。

3.討論

淋病奈瑟氏菌均為造成淋病的重要病原體。其俗稱為淋球菌。這種病菌有著相當(dāng)強(qiáng)的自我調(diào)節(jié)能力水平，可以經(jīng)過變異獲取抗藥性或者能夠令少數(shù)藥品的治療效果降低。且值得說明的是，淋球菌當(dāng)前正對(duì)越來越多品類的抗生素體現(xiàn)出此類免疫力，首先青霉素對(duì)其失效，其次為四環(huán)素、環(huán)丙沙星。現(xiàn)如今，頭孢克肟對(duì)于淋球菌也失去了抵抗效果[3]。

淋球菌一般為豆形或者卵圓形，細(xì)菌長度為0.6～0.8 micro：m，寬度大約為0.5 micro：m。其往往為成對(duì)排列，附近面稍凹陷或者完全扁平，如兩粒豆子一般結(jié)合在一起。淋球菌不會(huì)形成芽孢、無鞭毛存在。

當(dāng)一個(gè)人發(fā)生淋球菌急性感染時(shí)，這些細(xì)菌形態(tài)一般比較典型，大多在細(xì)胞漿之中；慢性感染則在細(xì)胞外淋球菌為一類革蘭陰性細(xì)菌。使用堿性美蘭對(duì)病球菌進(jìn)行染色處理，細(xì)菌體會(huì)表現(xiàn)為藍(lán)色；應(yīng)用Pappehheim Saathof開展染色時(shí)，淋球菌的菌體會(huì)表現(xiàn)為紅色，而背景則為天藍(lán)色，清晰可見[4]。

淋球菌致病一般和菌體外部結(jié)構(gòu)存在其他關(guān)聯(lián)性。淋球菌外表結(jié)構(gòu)為外膜。膜蛋白、菌毛以及脂多糖為外膜的主要成分。膜蛋白能夠令淋球菌粘附于人體黏膜中。經(jīng)過細(xì)胞吞噬效用作用在人體細(xì)胞之中，并在細(xì)胞之內(nèi)大批量繁殖，引起細(xì)胞崩解。當(dāng)淋球菌擴(kuò)散到黏膜下層時(shí)，會(huì)造成感染[5]。菌毛會(huì)黏附在女性的子宮以及患者的口腔上皮表面，其有著非常高的致病率以及傳染性。淋球菌的唯一自然宿主為人類，淋球菌往往通過性接觸實(shí)現(xiàn)傳播。當(dāng)發(fā)生不潔性行為之后，淋球菌有可能侵入到人體泌尿生殖系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)繁殖。女性患者往往會(huì)表現(xiàn)為子宮頸炎以及尿道炎，而男性患者則以尿道炎為常見。倘若沒有在第一時(shí)間對(duì)該疾病患者開展行之有效的治療，極有可能擴(kuò)散到患者的整個(gè)生殖系統(tǒng)之中。胎兒會(huì)通過產(chǎn)道感染出現(xiàn)淋病性急性結(jié)膜炎。值得說明的是，人類本身對(duì)于淋球菌不存在自然免疫力。全年齡人群均易感，在患病之后免疫能力不高，且不能夠預(yù)防再感染[6]。

謝美紅[7]等研究表明：淋病為中國法定傳染疾病?，F(xiàn)如今，隨著中國臨床廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，加上抗菌藥物選擇壓力等多因素綜合作用，導(dǎo)致淋球菌耐藥情況變得十分嚴(yán)峻。該學(xué)者經(jīng)過測定共計(jì)5類抗菌藥物MIC值，結(jié)果表明：淋球菌針對(duì)青霉素耐藥率達(dá)到了91.8%、淋球菌針對(duì)于四環(huán)素的耐藥率達(dá)到了75.4%以上。兩者的MIC90值以及MIC50值均比耐藥標(biāo)準(zhǔn)要高。雖然說其針對(duì)于四環(huán)素以及青霉素耐藥水平均比較高，且以上兩個(gè)藥品現(xiàn)已不被臨床視為治療淋病的主要方案。但不容忽視的是，PPNG以及質(zhì)粒介導(dǎo)的TGNG流行率依然為淋球菌耐藥性流行病學(xué)監(jiān)測的重點(diǎn)指標(biāo)。在該實(shí)驗(yàn)中，TGNG以及PPNG的檢出概率分別達(dá)到了32.2%以及31.1%。

喹諾酮類抗菌制劑曾被視為一種治療無并發(fā)癥淋病患者的首選方案。該門類藥品主要經(jīng)過抑制DNA螺旋酶，就此抑制菌體DNA和蛋白質(zhì)合成。但不容忽視的是，隨著現(xiàn)如今全世界諸多臨床治療失敗案例的報(bào)道。喹諾酮類抗菌藥物也漸漸成為了淋病的失效藥品。在該組實(shí)驗(yàn)中，環(huán)丙沙星的耐藥概率為97.3%，其MIC90值已經(jīng)超出了耐藥標(biāo)準(zhǔn)32倍之多。最近5年以來，我國部分地區(qū)的淋球菌針對(duì)環(huán)丙沙星耐藥率達(dá)到了97%以上，其表現(xiàn)出持續(xù)高耐藥率水平。由此不難看出，淋球菌針對(duì)于既往臨床推薦的藥物環(huán)丙沙星已經(jīng)出現(xiàn)相當(dāng)嚴(yán)重的耐藥情況，這一點(diǎn)值得臨床所重視。

衛(wèi)舒帆[8]等分析了全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)與兩類微生物鑒定類的應(yīng)用情況。該學(xué)者結(jié)合2010年頒布的《中國藥典》方法，針對(duì)于相關(guān)樣本開展增菌培養(yǎng)、分離、純化、接種，共計(jì)取得2株未知待測菌株。經(jīng)革蘭染色以及鏡檢，最終確定細(xì)菌鑒定卡之種類。實(shí)驗(yàn)使用全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)開展實(shí)驗(yàn)工作，結(jié)果表明：通過全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)加以鑒定，共計(jì)2株未知菌株分別為傷口埃細(xì)菌以及泛軍屬。該學(xué)者指出：全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)可以在短期內(nèi)精準(zhǔn)鑒定出污染菌的具體品類。應(yīng)用此法開展鑒定工作有著便捷、快速、成本低廉、實(shí)用性高等優(yōu)勢。

和以往相比，當(dāng)前我國濫用抗生素現(xiàn)象更為嚴(yán)重。在此情況之下，致使淋球菌耐藥狀況趨于嚴(yán)重。針對(duì)于淋病奈瑟氏菌的鑒定工作來講，在相當(dāng)長的一段時(shí)間內(nèi)臨床均利用革蘭染色和并球菌培養(yǎng)法完成檢驗(yàn)工作。前者因?yàn)樵诹＜?xì)胞之中的衰老菌、葡萄球菌核染成革蘭陰性結(jié)果，因此加大了假陽性的出現(xiàn)概率[9]。而開展淋球菌培養(yǎng)法完成檢驗(yàn)，則非常容易造成假陰性情況。

針對(duì)于淋球菌的檢測來講，雖然說利用傳統(tǒng)人工法開展培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性較高。但值得說明的是，此類方法檢出淋球菌的概率偏低。在本次實(shí)驗(yàn)內(nèi)，共計(jì)45例受試者利用手工法未能檢出淋球菌。之所以出現(xiàn)這種情況，主要原因?yàn)椋?/p>

第一，從對(duì)于臨床提醫(yī)生的要求來看，淋球菌通常寄生在柱狀上皮之內(nèi)。因此在工作人員取樣過程中應(yīng)當(dāng)首選尿道口位置，擇取宮頸管內(nèi)柱狀上皮細(xì)胞。不要收集陰道表面鱗狀上皮細(xì)胞。如果受試對(duì)象為未成年兒童應(yīng)，當(dāng)取用陰道口或者尿道口樣本；倘若受試者患處分泌物過多，應(yīng)首先利用經(jīng)過滅菌處理的0.9%NS溶液對(duì)該位置加以清洗。通過此法，也能夠在原有基礎(chǔ)上提升并球菌檢出率，祛除多余雜菌[10-12]。在選擇尿道口取樣時(shí)，盡可能應(yīng)用灌酸鈣拭子，避免使用棉拭子。從實(shí)際情況而言，很多醫(yī)療單位主要經(jīng)由醫(yī)生與門診或住院部取樣送檢，未能按照科學(xué)標(biāo)準(zhǔn)取樣。而化驗(yàn)師僅僅負(fù)責(zé)復(fù)查培養(yǎng)工作。其也為造成較難培養(yǎng)出淋球菌的重要原因，淋病奈瑟氏菌抵抗能力偏差、對(duì)于營養(yǎng)環(huán)境要求高，其在分離之后保存時(shí)間極短，容易死亡。并且淋病奈瑟氏菌有著自溶的特點(diǎn)。所以說，樣本采集送檢相當(dāng)關(guān)鍵。在開展臨床工作中，醫(yī)生在收集受試者樣本時(shí)必須規(guī)范操作，確保所送檢的樣本質(zhì)量合格。在根本上提升淋病奈瑟氏菌檢出概率。

第二，從檢驗(yàn)工作針對(duì)于患者方面的要求來看，患者接受檢查之前一段期間內(nèi)，盡量避免使用抗生素。在實(shí)際臨床中我們能夠發(fā)現(xiàn)：有很多患者未能深入性認(rèn)識(shí)性病的危害性，其在發(fā)生疾病以后往往使用過抗生素。當(dāng)自身癥狀無法得到有效緩解時(shí)，才前往醫(yī)院接受治療。在此刻，留取受試者的分泌物樣本較難培養(yǎng)出淋球菌。

第三，從檢驗(yàn)工作對(duì)工作室人員要求方面來看，和其他菌種相比，淋球菌培養(yǎng)環(huán)境較為嚴(yán)格。在第一次培養(yǎng)時(shí)，需要具備5%～10%的二氧化碳?xì)怏w環(huán)境，同時(shí)也要維持一定濕度才能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)菌培養(yǎng)。值得說明的是，傳統(tǒng)手工法的實(shí)施針對(duì)于實(shí)驗(yàn)室工作人員的職業(yè)素養(yǎng)要求較高。與之相比，儀器法僅僅需要工作人員熟知設(shè)備操作程序即可。將樣本放入到設(shè)備之內(nèi)，能夠取得滿意的檢測結(jié)果。通過此法可提升淋球菌檢出率。且和人工法相比，儀器法所用時(shí)間更少，且檢出淋球菌精準(zhǔn)度無明顯差異。本組實(shí)驗(yàn)所得出的相關(guān)結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)的真實(shí)性。

由此能夠看出，全自動(dòng)微生物鑒定設(shè)備在院內(nèi)微生物鑒定方面發(fā)揮出了舉足輕重的作用?；诖?，建議有條件的醫(yī)療機(jī)構(gòu)配備該類鑒定設(shè)備。利用此鑒定儀可在根本上提升并球菌檢出率。