γδ T細(xì)胞在創(chuàng)面治療中的作用及其影響因素研究進(jìn)展

黃國林，陳端凱，唐乾利

(1. 廣西岑溪市中醫(yī)醫(yī)院，廣西 岑溪 543200；2. 右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000)

創(chuàng)面修復(fù)一直是臨床上一個(gè)棘手的難題，其治療周期較長，并且費(fèi)用昂貴。據(jù)報(bào)道，美國每年花在創(chuàng)面修復(fù)中的費(fèi)用遠(yuǎn)超過500億美元[1]。創(chuàng)面修復(fù)涉及的機(jī)制復(fù)雜，一直是研究的熱點(diǎn)。人們?cè)谘芯磕[瘤免疫治療時(shí)發(fā)現(xiàn)T淋巴細(xì)胞的亞群γδ T細(xì)胞在創(chuàng)面的修復(fù)過程中具有獨(dú)特的作用[2]?，F(xiàn)就γδ T細(xì)胞在創(chuàng)面治療中的作用及其影響因素作一綜述。

1 創(chuàng)面的概述

正常皮膚受到外界侵害時(shí)，會(huì)導(dǎo)致皮膚的損傷及皮膚的完整性遭到破壞，稱之為創(chuàng)面[3]。臨床上一般把創(chuàng)面分為兩類：一類是急性創(chuàng)面，一般小面積創(chuàng)面通過機(jī)體的自我修復(fù)，通常能夠及時(shí)實(shí)現(xiàn)功能與美觀的恢復(fù)；另外一類則是慢性創(chuàng)面，其正常修復(fù)程序的紊亂，導(dǎo)致傷口不能或者延遲恢復(fù)，在臨床上常導(dǎo)致瘢痕或者長久不愈的結(jié)果[4]。若想要?jiǎng)?chuàng)面完美愈合，則必需遵循高度精密程序化進(jìn)行的步驟及調(diào)節(jié)方式，而這些步驟包括了[5-7]：①創(chuàng)面形成后，最開始呈現(xiàn)的血管收縮以及纖維蛋白凝塊形成的快速止血狀態(tài)；②出現(xiàn)白細(xì)胞趨化炎癥；③出現(xiàn)間充質(zhì)細(xì)胞的增殖、分化以及向傷口部位的遷移；④新生血管的形成；⑤再上皮化，包括了角質(zhì)形成細(xì)胞在傷口的重新生長及遷移；⑥最后呈現(xiàn)組織強(qiáng)度的合成、交聯(lián)及出現(xiàn)規(guī)則的膠原排列。

2 γδ T淋巴細(xì)胞的概述

臨床上根據(jù)T細(xì)胞受體(TCR)的表達(dá)，將T細(xì)胞主要分為兩個(gè)細(xì)胞亞群：αβ T細(xì)胞和γδ T細(xì)胞[8]。γδ T細(xì)胞是一組有別于αβ T細(xì)胞的T淋巴細(xì)胞，其表面由γ鏈和δ鏈組成。γδ T細(xì)胞還可進(jìn)一步分為2種細(xì)胞亞群：Vδ1 T細(xì)胞(主要分布于上皮相關(guān)淋巴組織)和Vδ2 T細(xì)胞(主要分布于外周血)[9-10]。Vδ1 T細(xì)胞和Vδ2 T細(xì)胞具有不同的功能。Vδ2 T細(xì)胞主要參與免疫應(yīng)答[11-14]，而Vδ1 T細(xì)胞主要具有免疫調(diào)節(jié)功能[15]。許多研究發(fā)現(xiàn)γδ T細(xì)胞廣泛地存在于上皮組織的細(xì)胞內(nèi)[16-17]，并且是最早在胸腺中發(fā)育的T細(xì)胞之一(占1%～5%)。γδ T細(xì)胞作為T淋巴細(xì)胞的一種亞型，存在有不變體T細(xì)胞受體的γδ T細(xì)胞，科學(xué)家將其命名為樹突狀表皮T細(xì)胞(dendritic epidermal T cells，DETCs)，其在皮膚動(dòng)態(tài)平衡、腫瘤免疫監(jiān)測(cè)、創(chuàng)傷修復(fù)等方面發(fā)揮著重要作用。

3 γδ T細(xì)胞的促進(jìn)創(chuàng)面愈合的理論基礎(chǔ)

細(xì)胞對(duì)于傷口愈合的作用，主要是通過細(xì)胞-細(xì)胞或者細(xì)胞-基質(zhì)的直接相互作用來實(shí)現(xiàn)的，還有的則是通過某些可溶性介質(zhì)的釋放而發(fā)揮作用。而DETCs就能夠通過其特有的γδ TCR識(shí)別那些受到應(yīng)激的角質(zhì)形成細(xì)胞上所表達(dá)的抗原或者所形成的蛋白因子后進(jìn)行程序性激活。一旦激活，DETCs會(huì)收縮樹突，呈圓形，并分泌一系列細(xì)胞因子、趨化因子和組織特異性生長因子，從而增加角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和浸潤白細(xì)胞的聚集，促進(jìn)皮膚的傷口愈合和免疫監(jiān)視[18-23]。故DETCs參與了表皮穩(wěn)態(tài)的維持和修復(fù)。因此γδ T細(xì)胞在創(chuàng)面修復(fù)中的作用毋庸置疑，但是其作用的具體機(jī)制仍不得而知[18，20，24]。

4 γδ T細(xì)胞在促進(jìn)創(chuàng)面愈合中的作用機(jī)制

4.1 γδ T細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子作用效果 DETCs分泌的細(xì)胞因子中有胰島素樣生長因子1(insulin like growth factor 1，IGF-1)[24]，它通過阻止角質(zhì)形成細(xì)胞和表皮生長因子自身的凋亡來幫助傷口愈合?？茖W(xué)實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)了IGF-1在皮膚組織中有很大的存在價(jià)值，研究發(fā)現(xiàn)富含IGF-1的皮膚組織在顯微鏡下可以明顯觀察到表皮的增厚[25]，相反，缺乏的話表皮則顯得薄弱[26-27]。雖然這個(gè)結(jié)果有很大爭議，但是又有一項(xiàng)新的研究表明，DETCs分泌白細(xì)胞介素-17a，誘導(dǎo)產(chǎn)生抗菌肽，如β-防御素3和再生胰島衍生蛋白3γ[28]。而這些肽類能夠誘導(dǎo)皮膚損傷后角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和分化[29]，表明白細(xì)胞介素-17在傷口部位的感染控制和上皮增生中起著重要的作用。還有研究發(fā)現(xiàn)在機(jī)體表皮受傷后，DETCs釋放的Fgf9能夠促進(jìn)損傷部位的毛囊再生[30]。同時(shí)，DETCs釋放的KGF-1、KGF-2、IL-2、IL-3、IFN-γ 和 TNF-α等[31]，都能夠通過一定的程序激活角質(zhì)化細(xì)胞的作用效果，起到創(chuàng)面愈合的作用。

4.2 γδ T細(xì)胞中整合素的作用效果 整合素是細(xì)胞表面的黏附受體，使細(xì)胞能夠?qū)Νh(huán)境作出反應(yīng)。其在許多細(xì)胞功能中發(fā)揮作用，包括發(fā)育、激活、分化、增殖、移動(dòng)和存活[32]。整合素使細(xì)胞(細(xì)胞骨架)與周圍環(huán)境[細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)，其他細(xì)胞]之間進(jìn)行雙向通訊，與整合素相互作用的ECM蛋白包括膠原、層粘連蛋白(FN)等[33]。通過整合素傳遞的信號(hào)可以從細(xì)胞內(nèi)向細(xì)胞外，調(diào)節(jié)整合素及其配體之間的細(xì)胞外相互作用，也可以從細(xì)胞外向細(xì)胞內(nèi)，影響肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重排以及相關(guān)蛋白(包括細(xì)胞因子)的基因表達(dá)和轉(zhuǎn)錄，從而影響細(xì)胞進(jìn)程[34]。在很早以前已經(jīng)有報(bào)道表明γδ T細(xì)胞中整合素的功能被大大地低估了，但是近幾年科學(xué)界對(duì)其進(jìn)行了大量的挖掘并發(fā)現(xiàn)了其潛在的價(jià)值。已經(jīng)有研究表明整合素能夠進(jìn)行信號(hào)的傳遞以及細(xì)胞的黏附功能，而這些功能都能夠較好地促進(jìn)創(chuàng)面的修復(fù)，但是其具體作用機(jī)制仍需實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

5 影響γδ T細(xì)胞調(diào)控因素

趨化因子受體、細(xì)胞因子和黏附分子都能夠驅(qū)使γδ T細(xì)胞到達(dá)皮膚損傷部位。趨化因子，能夠參與γδ T細(xì)胞的聚集。趨化因子受體10(CCR10)能夠通過角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生的趨化因子27(CCL27)或者本身也可有聚集γδ T細(xì)胞到皮膚發(fā)生炎癥或者損傷的部位[35]。CCR8的配體CCL1在表皮中表達(dá)，進(jìn)一步提示角質(zhì)形成細(xì)胞通過產(chǎn)生趨化因子參與皮膚中γδ T細(xì)胞進(jìn)入損傷部位和在正常皮膚中保留，并隨時(shí)準(zhǔn)備發(fā)揮作用，以保護(hù)生物體[36-37]。CCR6-CCL20受體配體對(duì)皮膚中的γδ T細(xì)胞活化起到關(guān)鍵作用[38]。皮膚生長的γδ T細(xì)胞表達(dá)CCR 6，而配體CCL20可由角質(zhì)形成細(xì)胞、DCS和內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)。正常情況下，人表皮組織表達(dá)的CCL20水平較低，但在急性損傷后升高[39]。在小鼠體內(nèi)缺乏細(xì)胞因子(如IL-7、IL-15和IL-4)會(huì)導(dǎo)致γδ T細(xì)胞的減少或者消除，而IL-10在低濃度時(shí)會(huì)增加γδ T細(xì)胞的生成[40]。這些細(xì)胞因子誘導(dǎo)T細(xì)胞存活和/或增殖。IL-7R信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)誘導(dǎo)TRCY-鏈的重排和轉(zhuǎn)錄，IL-15促進(jìn)γδ表皮T細(xì)胞前體的擴(kuò)增和存活，IL-4信號(hào)通路促進(jìn)表皮γδ T細(xì)胞的生長[41]。因此，細(xì)胞因子受體信號(hào)在皮膚等部位γδ T細(xì)胞的發(fā)育和擴(kuò)張中起著關(guān)鍵作用。同時(shí)，我們知道表皮干細(xì)胞有著很強(qiáng)大的增殖再生能力，在皮膚無損傷的情況下，這些表皮干細(xì)胞處于靜息狀態(tài)。Lee RT等[42]就從這方面入手研究發(fā)現(xiàn)在皮膚組織發(fā)生損傷后，表皮角質(zhì)細(xì)胞就能夠釋放出大量的白細(xì)胞介素-1(IL-1)細(xì)胞因子，進(jìn)而激活γδ T細(xì)胞，然后這些免疫細(xì)胞喚醒靜息狀態(tài)下的干細(xì)胞繁殖并行進(jìn)到傷口部位以修復(fù)損傷[43]。

6 展望

研究γδ T細(xì)胞的報(bào)道越來越多，其功能與作用受到了眾多學(xué)者的關(guān)注，它不僅僅對(duì)腫瘤疾病治療有一定的作用，隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)γδ T細(xì)胞的作用具有多樣性。由于其存在有不變體T細(xì)胞受體，它能夠很好地發(fā)揮著維持皮膚動(dòng)態(tài)平衡、腫瘤免疫監(jiān)測(cè)、創(chuàng)傷修復(fù)等作用。近期還有不少研究證實(shí)了γδ T細(xì)胞具有較強(qiáng)的免疫激活和細(xì)胞殺傷作用[44-45]，進(jìn)一步印證了γδ T細(xì)胞作用的多樣性，值得研究者高度關(guān)注和重視。

綜上所述，γδ T細(xì)胞在創(chuàng)面中的作用，不只是單純地通過自身所能夠釋放的蛋白介質(zhì)或者所組成的成分，還能夠通過外界多種因素刺激活化，來達(dá)到創(chuàng)面的完美修復(fù)?，F(xiàn)在臨床上已廣泛應(yīng)用皮膚再生醫(yī)療技術(shù)(MEBT/MEBO)治療創(chuàng)面，但是其作用機(jī)制體系仍不是很完善，MEBT/MEBO是否能夠通過作用于免疫細(xì)胞γδ T細(xì)胞而發(fā)生修復(fù)作用，或者通過刺激機(jī)體某些蛋白介質(zhì)的釋放，來刺激γδ T細(xì)胞的激活而發(fā)生修復(fù)作用？還需要我們進(jìn)行更加深入的研究，以期為臨床更好地治療創(chuàng)面提供理論支持及更安全有效的方法，期待有更多研究能揭開更多γδ T細(xì)胞神秘作用。