維吾爾族醫(yī)學(xué)常用藥材“夏合坦然”考證及鑒定△

阿依別克·熱合木都拉，趙雅琴，吾買爾·阿布力孜，邱遠(yuǎn)金

1.新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所/國家中醫(yī)藥管理局 新疆中藥民族藥資源重點研究室，新疆 烏魯木齊 830002；2.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830002

開展維吾爾族醫(yī)學(xué)(簡稱維吾爾醫(yī))常用藥材的植物資源考證研究是促進(jìn)維吾爾醫(yī)藥學(xué)發(fā)展與提升維吾爾民族醫(yī)藥文化的迫切需要。目前，維吾爾醫(yī)藥材資源及種質(zhì)鑒定等存在疑議和誤區(qū)，相關(guān)從業(yè)人員使用的維吾爾藥材沒有統(tǒng)一名稱。雖然，目前已有多個維吾爾藥藥材規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)，但維吾爾醫(yī)臨床常用藥材夏合坦然等尚未被標(biāo)準(zhǔn)收載，存在“同物異名”的問題。

1 文獻(xiàn)考證

夏合坦然是維吾爾醫(yī)中常用藥材品種之一，最初以阿拉伯文、波斯文、烏爾都文等多種語言文字進(jìn)行描述記載，各類書籍中都以音譯，所收錄的名稱存在很大差異。如《回回藥方》卷三十六中夏合坦然有沙亦他刺只、失他刺知、撒他剌、撒忒剌、沙他刺只、失答刺只、折答刺、失答那知、失答蘭只、撤的刺、撒荅剌等多種名稱。在該書考釋中，共計提到此藥材76處，其中有68處記載為血根草或延胡索，由印度進(jìn)口的稱為印度血根草[1]。 約在公元1010年，中亞人阿維森納所著《醫(yī)典》中將其稱為Xahtrej，并記載其以綠、鮮、苦者為佳品，屬性為一級寒、三級干。公元1868年，阿富汗人米爾·穆罕默德·玉蘇因所著《藥物大全》中將其稱為Xahtare，書中記載該品種為常見植物，分2種：一種葉小，似芫荽，花似香堇ViolaodorataL.；一種葉深綠色，花白色，味苦、澀，葉比其他部分效果佳，以鮮、綠、苦者為佳品?！栋莸匾浪帟分幸砸糇g為夏臺熱吉、夏塔熱等[2]。1964年，喀什市維吾爾醫(yī)醫(yī)院《維吾爾醫(yī)常用藥材》中稱其為Xatre，中文名稱為爵床(香蘇)，拉丁名為Justicaprocumbens(Gardenialatifolia) L.，對其描述與《藥物大全》相似。1982年，前蘇聯(lián)И.И.依柯洛莫夫等烏茲別克文《醫(yī)典》中仍稱其為Xahtrej，拉丁名為FumariaofficinalisL.。1984年，巴基斯坦人艾肯木·穆孜瓦爾·玉蘇因·艾斯瓦尼所著《藥物志》中將其稱為Pitpaptre，英文名為Fumaria，阿拉伯語名為Xahtrej，波斯語名為Xahtare 。1987年，阿布都里米提·玉蘇甫·阿吉等所著《維吾爾醫(yī)制劑學(xué)與復(fù)方學(xué)》中稱其為Xahtre，中文名為蘭堇，阿拉伯語名為Xahtere，拉丁名為F.officinalisL.[3]。

2 材料

SZ61型體視顯微鏡(奧林巴斯株式會社)；BX51型倒置顯微鏡(奧林巴斯株式會社)；C11440-22C型風(fēng)冷式高分辨X射線探測器(濱松光子學(xué)株式會社)。DNA提取試劑盒[天根生化科技(北京)有限公司]；2×Taq聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR) Master Mix(北京艾德萊生物科技有限公司)。

從新疆維吾爾自治區(qū)具有代表性的維吾爾醫(yī)醫(yī)院及維吾爾飲片企業(yè)中收集到6批次的藥材樣品，其中5個批次由新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所凱撒·蘇來曼研究員鑒定為地錦草，另一批次由新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所樊叢照副研究員采集鑒定為煙堇(表1)。

表1 夏合坦然樣品信息

樣品中除資源普查收集的原植物標(biāo)本外都為待加工藥材樣品，因此無法得到植物全株完整形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

3 方法與結(jié)果

3.1 形態(tài)鑒別

依據(jù)《中國植物志》《新疆植物志》中的經(jīng)典植物外觀形態(tài)特點，采用體視顯微鏡對植物根、莖、葉、花、蒴果及種子等植物外形進(jìn)行觀察。

從觀察結(jié)果看，根據(jù)植物形態(tài)差異可將樣品分為2類。第一類為AK、DO、KR、DA、AN，其特征為：葉片正面綠色、背面淡綠色，兩面被疏柔毛，橢圓形，長10 mm、寬5 mm，頂端略圓，底部略漸變狹斜，中部以上邊緣有鋸齒，葉柄較短，長2 mm；蒴果直徑約2 mm，三棱卵球形，有明顯的3個分裂分果；種子直徑約1 mm，三棱卵球形，灰色(圖1)。這些形態(tài)特征及主要結(jié)構(gòu)組成與大戟科大戟屬植物較為一致，因此這5種植物歸屬為大戟科。第二類為XA，與其他樣不同品，葉片長1.5 cm，回羽狀分裂結(jié)構(gòu)，葉柄的基部有短柄，有2～3 mm果序，堅果，近球形，直徑1.5～2.0 mm，表面有皺紋，果梗長為3～4 mm，與罌粟科煙堇屬植物的形態(tài)特征表現(xiàn)及主要結(jié)構(gòu)更為相近，歸為第二類(圖2)。

注：A.葉片；B.果實；C.種子。圖1 第一類樣品的葉片、果實、種子形態(tài)結(jié)構(gòu)

注：A.葉片；B.果實。圖2 第二類樣品葉片和果實形態(tài)結(jié)構(gòu)

3.2 顯微鑒別

藥材粉碎，過80目篩，取粉末適量放于潔凈的載玻片上，用水合氯醛加熱進(jìn)行透化處理，重復(fù)3次后甘油封片。于顯微鏡下觀察，AK、DO、KR、DA、AN樣品顏色均為綠色或綠褐色，葉表皮細(xì)胞外壁成突起狀，葉肉組織、細(xì)脈末端周圍的細(xì)胞放射狀排列，最外層表皮細(xì)胞為類圓形，皮層較寬，形成層明顯，木質(zhì)部較寬，呈環(huán)帶狀，導(dǎo)管呈放射狀徑向排列，纖維較多而氣孔較少(圖3)。其顯微構(gòu)造及粉末特征與大戟科植物較為接近。XA最外層表皮細(xì)胞為類長方形，皮層不明顯或無，木質(zhì)部導(dǎo)管呈輻射狀排列，莖表皮細(xì)胞明顯大于前5種樣品莖表皮細(xì)胞，氣孔較明顯有木薄壁細(xì)胞及較多的纖維，可見莖表皮細(xì)胞及淡黃綠色氣孔，氣孔結(jié)構(gòu)較稀疏，多為長橢圓形(圖4)。其顯微構(gòu)造及粉末特征與罌粟科植物的較為接近。

注：A.表皮細(xì)胞；B.木質(zhì)部；C.導(dǎo)管。圖3 第一類樣品粉末顯微鑒別照片

注：A.表皮細(xì)胞；B.導(dǎo)管；C.莖表皮細(xì)胞；D.纖維。圖4 第二類樣品粉末顯微鑒別照片

3.3 同步輻射光源成像

采用同步輻射硬X射線技術(shù)結(jié)合同軸相襯成像法、相位恢復(fù)算法及計算機斷面層檢查(CT)重構(gòu)技術(shù)，實現(xiàn)夏合坦然藥材的微米級分辨率的無損三維原位結(jié)構(gòu)的鑒定。

AK、DO、KR、DA、AN樣品的微觀特性結(jié)構(gòu)構(gòu)造中根莖表現(xiàn)為導(dǎo)管微管束的微觀形態(tài)、纖維束、淀粉粒等結(jié)構(gòu)也清晰可見；莖節(jié)內(nèi)部有導(dǎo)管束、纖維束和圓形薄壁細(xì)胞分布；種皮包裹單個種子三棱狀，油管集中分布在種子周邊，內(nèi)含胚囊及胚芽呈現(xiàn)環(huán)狀分布等(圖5)。XA藥材樣品根莖導(dǎo)管的微觀形貌和導(dǎo)管細(xì)胞壁增厚形成的微管束、木栓纖維束、淀粉粒等清晰可見；莖節(jié)橫切致密纖維束有環(huán)狀分布，有多個微導(dǎo)管束，在子午面和冠狀面中也有大量纖維束和圓形薄壁細(xì)胞縱向分布；種子胚組織細(xì)胞形態(tài)、外胚乳組織細(xì)胞形態(tài)、淀粉類結(jié)構(gòu)等清晰可見，中心部位有集中的胚芽結(jié)構(gòu)(圖6)。

注：A.根基；B.莖節(jié)；C果實；下同。圖5 第一類植物根莖、莖節(jié)、果實成像照片

圖6 第二類植物根莖、莖節(jié)、果實成像照片

3.4 分子鑒定

稱取干燥藥材樣品30 mg，用DNA提取研磨儀1000 r·min-1研磨，根據(jù)植物基因組DNA提取試劑盒說明書進(jìn)行提取，提取后產(chǎn)物置于-20 ℃條件下保存，用于目標(biāo)序列的擴增。實驗選用葉綠體片段psbA-trnH進(jìn)行擴散。利用fwdPA、revTH的通用引物在Bio-Rad PCR儀中進(jìn)行樣品PCR擴增，反應(yīng)體系25 μL(包括2×TaqPCR Master Mix 12.5 μL，2.5 μmol·L-1引物各1 μL，樣品總DNA 2 μL，ddH2O 8.5 μL)。psbA-trnH序列擴增程序：95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性1 min，55 ℃退火1 min，72 ℃延伸1.5 min，30個循環(huán)；72 ℃延伸7 min；12 ℃保存。

綜合收集到的藥材葉綠體序列在基原植物GenBank數(shù)據(jù)庫中Blast鑒定得到了有效的鑒定結(jié)果。AK、DO、KR、DA、AN樣品與大戟科大戟屬植物地錦草EuphorbiahumifusaWilld.的相似度為99%；而XA與罌粟科煙堇屬植物煙堇F.vaillantiiLoisel.的相似度為96%。

4 討論

結(jié)合多種鑒別鑒定方法得出的結(jié)果，獲得了2種不同類型的植物種類。一種為大戟科植物地錦草E.humifusaWilld.，另一種為罌粟科植物煙堇F.vaillantiiLoisel.。

《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)2015年版記載，地錦草能夠清熱解毒、涼血止血、利濕退黃，用于痢疾、泄瀉、咯血等[4]。維吾爾醫(yī)藥中地錦草藥材既沒有應(yīng)用歷史，也沒有文獻(xiàn)史料的記載。煙堇雖不是《中國藥典》2015年版收載品種，但在維吾爾醫(yī)中較為常用?！吨腥A本草》維吾爾藥卷中記載其用于清血生寒、純化異常血液質(zhì)、祛風(fēng)止癢、清熱退燒、通便通尿，主治熱性或血液質(zhì)性疾病，如梅毒，皮膚痰癢，各種粒瘡、濕疹和皮癬[5]。

黃輝等[2]對維吾爾藥用同科同屬植物歐煙堇進(jìn)行文獻(xiàn)綜述，指出地錦草是歐煙堇的誤用品，但并未對實物樣本進(jìn)行研究。陳燕等[6]在對維吾爾藥歐煙堇與其誤用品地錦草的生藥學(xué)鑒別中分別采用性狀、顯微與理化鑒別方法進(jìn)行簡單的比較，但沒有對實際中應(yīng)用的植物藥材和基原歸屬開展深入研究和闡述。雖然煙堇和歐煙堇都為煙堇屬不同種的植物，可否互用有待進(jìn)一步驗證。本研究結(jié)合傳統(tǒng)經(jīng)驗與現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段對夏合坦然進(jìn)行了溯源考證和基原鑒別，為今后該藥材資源的規(guī)范化種植栽培和可持續(xù)利用提供參考。