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    漸尖葉粉花繡線菊中連翹脂素的分離與鑒定

    2021-04-01 07:04:54段晨晨張學晶李春斌石玉生
    大連民族大學學報 2021年1期
    關鍵詞:葉粉繡線菊脂素

    車 暢,段晨晨,張學晶,李春斌,石玉生

    (大連民族大學 生命科學學院,遼寧 大連 116605)

    植物用藥在中國已有多年的歷史,一直扮演著重要的角色。在不同領域的書籍中對植物藥也有著廣泛的記載?!吨兴幋笤~典》就記載著繡線菊屬 (Spiraea) 植物的藥用價值,如漸尖繡線菊具有通便利尿[1]、調(diào)經(jīng)止痛、消腫解毒、去腐生肌、明目退翳的功效[2]。繡線菊屬植物屬薔薇科,繡線菊亞科[3],全世界約有100種,主要分布于北溫帶[4],中國約有70多種,主要分布于河南、陜西、甘肅、云南、四川等地區(qū)[5]。繡線菊屬植物為多年生落葉灌木,大部分植物的花色艷麗,葉子細致,大多生長在山坡曠地、疏密雜木林、山谷或河溝旁,生長適應性強,種子、葉、根均可入藥。近年研究發(fā)現(xiàn)繡線菊屬植物中含有生物堿[6-7]、萜類[8]、黃酮[9]、木脂素、苯丙素類、甾體等多種化學成分,現(xiàn)代藥理研究結果也表明該屬植物具有抗血栓[10]、抗菌[11]、抗病毒[12]、抗血小板聚集[13]、抗炎、抗氧化、抗疲勞等作用[14]。

    1 材料與方法

    1.1 材 料

    材料:采自于云南的漸尖葉粉花繡線菊全草,黑龍江中醫(yī)藥大學陳效忠副教授鑒定其為漸尖葉粉花繡線菊(SpiraeajaponicaL.f.var.acuminataFranch),樣品標本現(xiàn)保存于黑龍江中醫(yī)藥大學中草藥標本館。

    1.2 儀器與試劑

    儀器:LT-TQNS-200,200L提取濃縮機組,北京中聯(lián)臺電機械有限公司;LC-20AD高效液相色譜儀,日本島津SHIMADZU;LCMS-2010EV液相質(zhì)譜儀,日本島津SHIMADZU;LC100半制備等度液相色譜,北京賽諾華博科技有限責任公司;DC952505-0分析色譜柱,Agela Technologies;YMC-Pack ODS-A半制備色譜柱,Agela Technologies;其他設備均為實驗室常規(guī)設備。

    試劑:色譜純甲醇,Avantor Performance Materials;色譜純乙腈,Avantor Performance Materials;色譜純?nèi)宜?,Avantor Performance Materials;硅膠100~200目,國藥集團化學試劑有限公司;ODS,Agela Technologies;其他試劑均為國產(chǎn)分析純試劑。

    2 提取分離

    取干燥漸尖葉粉花繡線菊全草30 kg粉碎,用95%乙醇100 L浸泡4 h后,加熱回流提取3次,每次3 h,提取液減壓回收,濃縮得到1.2 kg浸膏。將得到的浸膏加入0.1mol·L-1的鹽酸調(diào)節(jié)浸膏pH為2~3。分別用石油醚和乙酸乙酯萃取,分別得到石油醚層萃取物和乙酸乙酯層萃取物。用濃氨水調(diào)節(jié)萃取物pH為9~10,然后用二氯甲烷萃取,得二氯甲烷萃取物,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮,得到初提物260 g。初提物用硅膠柱層析進行分離,用不同比例的甲醇和二氯甲烷依次進行洗脫,分別為50∶1、30∶1、25∶1、20∶1、15∶1、10∶1、8∶1、5∶1、3∶1、1∶1。通過薄層色譜法將組分相似的進行合并,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮,得到浸膏,共得到用9個部位命名為CHE1~9。CHE4部位洗脫物浸膏采用甲醇-水梯度洗脫的條件使用中壓制備進行分離,用濃度為10%~80%的甲醇進行洗脫,每500 ml為一個組分,共得到65個組分。將組分用高效液相進行檢測分析,篩選出含有目標成分的組分;將這些篩選出的樣品通過改變波長、流動相等條件找到分離度較好的制備條件。

    3 實驗結果

    化合物1 白色粉末;1H-NMR (600MHZ, CD3OD) δH:7.00 (1H, s, H-2), 6.80 (1H, d, J=8.2 HZ, H-5), 6.97 (1H, d, J=8.2 HZ, H-6), 4.11 (1H, d, J=7.2HZ, H-7), 2.93 (1H, m, H-8), 4.12 (1H, m, H-9a), 3.82 (1H, m, H-9b), 4.88 (1H, d, J=5.1HZ,H-7'), 3.31 (1H, m, H-8'), 3.84, 3.42 (H2-9'), 3.85, 3.85, 3.84 (各3H, s, CH3O-3,3',4');13C-NMR (150MHz, CD3OD) δC:133.2 (C-1), 111.3 (C-2), 149.5 (C-3), 147.8 (C-4), 119.6 (C-5), 119.6 (C-6), 89.8 (C-7), 56.1 (C-8), 71.1 (C-9), 133.2 (C-1'), 111.3(C-2'), 149.5 (C-3'), 147.8 (C-4'), 116.5 (C-5'), 116.5 (C-6'), 83.7 (C-7'), 51.6 (C-8'), 71.1 (C-9'), 56.8 (9H,CH3O-3,3',4')。數(shù)據(jù)與文獻[15]報道基本一致,故確定化合物1為連翹脂素?;衔?結構式如圖1, 化合物1液相色譜圖如圖2。

    圖1 化合物1結構式

    圖2 化合物1液相色譜圖

    4 討論與展望

    本實驗所鑒定出的化合物連翹脂素為木脂素類化合物,為首次在本植物中發(fā)現(xiàn)的化合物,由于純化分離的量較少,本實驗并沒有進行活性鑒定。但查閱大量文獻后了解到連翹脂素作為藥物的重要性,例如:連翹脂素在對人肝癌細胞(SMMC-7721)體外活性實驗研究中,具有活性;對小鼠黑色素肉瘤細胞(B16)也具有較強的抑制活性。同時研究表明連翹脂素具有較強的抗炎,抗氧化,降血脂活性,具有重要的醫(yī)學價值[16]。在今后的實驗中可以深入研究化學成分的細胞活性。本植物中主要的化學成分還有生物堿類和萜類,這兩類化合物也具有很大的開發(fā)和利用價值。繡線菊屬植物作為植物用藥,在中國已有幾百年的歷史。但目前對粉花繡線菊的檢測研究很少,尤其是繡線菊變種。本實驗建立了漸尖葉粉花繡線菊中連翹脂素的提取純化和含量測定的方法,為繡線菊屬植物的藥用價值和后續(xù)開發(fā)提供了依據(jù)。

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