人中性粒細胞載脂蛋白和中性粒細胞CD64在慢性前列腺炎患者前列腺液中的表達及其意義

韋毅，農(nóng)君仁，吳秋龍，盧國平

1廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院泌尿外科，南寧 530001；2廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院檢驗科，南寧 530001

慢性前列腺炎，作為一種中青年男性多發(fā)的泌尿生殖系統(tǒng)疾病，包括慢性細菌性前列腺炎(chronic bacterial prostatitis，CBP)和慢性前列腺炎/ 慢性盆腔疼痛綜合征(chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndromes，CP/CPPS)[1-2]，臨床主要表現(xiàn)為疼痛和排尿異常。慢性疼痛致使患者生活質(zhì)量嚴(yán)重下降，且治療不當(dāng)極易引發(fā)性功能障礙，甚至導(dǎo)致不育，因此及時快速診斷、準(zhǔn)確掌握病情進展從而實現(xiàn)合理用藥是治療成功的關(guān)鍵[3-4]。中性粒細胞CD64(neutrophil CD64，nCD64)可介導(dǎo)中性粒細胞的吞噬作用，被公認(rèn)為是診斷細菌性感染的標(biāo)志物[5]。人中性粒細胞載脂蛋白(human neutrophil lipocalin，HNL)又被稱作人中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin，NGAL)，在機體異常時受外周血中性粒細胞的影響而從細胞中釋放出來，常被用于細菌、病毒感染的鑒別診斷[6-9]。目前，關(guān)于慢性前列腺炎患者前列腺液中HNL、nCD64表達變化與感染程度的關(guān)系研究較少。本研究通過檢測慢性前列腺炎患者前列腺液中HNL、nCD64的表達水平并分析其與疾病感染程度的關(guān)系，探討了HNL、nCD64對慢性前列腺炎的臨床診斷和病情評估價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年2月－2019年10月廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院收治的慢性前列腺炎患者178例，年齡20～55(38.6±4.1)歲，體重指數(shù)(body mass index，BMI)為(23.97±1.46) kg/m2，病程5～43(21.38±2.45)個月，美國國立衛(wèi)生研究院慢性前列腺炎癥狀指數(shù)(National Institutes of Health Chronic Prostatitis Symptom Index，NIH-CPSI)評分為(16.89±2.53)分。根據(jù)是否感染細菌分為CP/CPPS組(40例，細菌培養(yǎng)陰性)與CBP組(138例，細菌培養(yǎng)陽性)，然后根據(jù)NIH-CPSI評分將CBP組患者分為輕度組(65例)、中度組(46例)與重度組(27例)。另選擇同期于本院進行健康體檢者40名作為對照組。年齡21～54(38.3±4.1)歲，BMI (24.32±1.51) kg/m2。本研究經(jīng)廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批(20170138)，所有研究對象均知情同意。

1.2相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照中華醫(yī)學(xué)會泌尿外科學(xué)分會頒布的《慢性前列腺炎中西醫(yī)結(jié)合診療專家共識》[10]。 (1)以下臨床癥狀持續(xù)或反復(fù)3個月以上：尿道口出現(xiàn)黏性分泌物，不同程度的排尿不暢、尿痛、尿急、尿頻、尿道灼熱以及夜尿增多等排尿異常癥狀；自覺陰囊潮濕，不同程度的陰莖、會陰、尿道、肛周部等骨盆區(qū)域疼痛。(2)體格檢查：觸診前列腺質(zhì)地較韌，或有腺體飽滿，或軟硬不均，或有炎性結(jié)節(jié)；有局限性壓痛。(3)前列腺按摩液檢查：白細胞計數(shù)(white blood cell count，WBC)>10個/ 高倍鏡視野(HP)，卵磷脂小體數(shù)量減少或消失。(4)細菌培養(yǎng)：采用“兩杯法”，前列腺按摩前細菌培養(yǎng)陰陽性均可，按摩后陽性則為CBP；前列腺按摩前后細菌培養(yǎng)均陰性為CP/CPPS。

1.2.2納入標(biāo)準(zhǔn) 符合以上慢性前列腺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)；病程>3個月；年齡>20歲；前列腺按摩液均由同一醫(yī)護人員按照相同標(biāo)準(zhǔn)采集。

1.2.3排除標(biāo)準(zhǔn) 合并其他急、慢性感染；合并嚴(yán)重心腦血管、肝、腎等原發(fā)疾??；合并精囊炎、淋病、非淋菌性尿道炎、尿道狹窄、良性前列腺增生及前列腺癌等；合并嚴(yán)重精神和神經(jīng)疾??；近 1個月接受過有可能影響本研究結(jié)果的檢查治療；因標(biāo)本量過少、實驗分散而漏做導(dǎo)致報告數(shù)據(jù)不完整者。

1.2.4NIH-CPSI評分標(biāo)準(zhǔn)[11]疼痛癥狀有4項，排尿癥狀有2項，癥狀嚴(yán)重程度有2項，生活質(zhì)量有 1項，共9項，分?jǐn)?shù)0～43分?？傇u分1～14分為輕度，15～29分為中度，30～43分為重度，病情越嚴(yán)重則NIH-CPSI評分越高。

1.3標(biāo)本采集 標(biāo)本采集采用“兩杯法”，碘附常規(guī)消毒尿道外口，留取10 ml中段尿液收集于加蓋無菌管中，經(jīng)直腸按摩前列腺，用加蓋無菌管收集前列腺液，最后尿道外口殘留的1滴前列腺液用于常規(guī)檢查，再用碘附消毒尿道外口，留取10 ml初段尿液。兩次收集的尿液用于實驗室細菌檢查，收集的前列腺液保存于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4前列腺液中HNL、nCD64表達水平的檢測 采用HNL檢測試劑盒(長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司，注冊證號20162400304)，以ELISA法檢測前列腺液中HNL的表達水平，嚴(yán)格參照試劑盒說明書步驟操作。采用CD64-PE抗體檢測試劑盒(貨號340768，美國BD公司)和流式細胞儀(FACS Calibur，美國BD公司)檢測nCD64的表達水平。取兩支流式專用試管，分別加入50 μl前列腺液，再分別加入CD64-PE抗體和同型陰性對照，混勻后室溫避光孵育15 min，加入紅細胞裂解液并混勻，避光作用10 min，PBS洗滌，離心棄上清，將細胞懸浮于PBS溶液中，混勻，靜置10 min，置于流式細胞儀檢測并計算nCD64的表達水平。

1.5CP/CPPS的影響因素定義 其他病原體感染包括支原體、沙眼衣原體、病毒、真菌、滴蟲及寄生蟲。排尿功能失調(diào)包括逼尿肌-括約肌協(xié)同失調(diào)、功能性尿路梗阻及尿流率降低。神經(jīng)內(nèi)分泌異常指局部病理刺激經(jīng)神經(jīng)調(diào)節(jié)后異常釋放激素等各種物質(zhì)引發(fā)其他內(nèi)臟器官疼痛進而牽涉前列腺。免疫反應(yīng)異常指壞死組織、病原體殘余碎片以及前列腺來源的某些精漿蛋白作為抗原誘發(fā)的前列腺免疫反應(yīng)。盆腔相關(guān)疾病包括不適當(dāng)?shù)男曰顒印⒕米纫鸬穆耘枨怀溲?、精索靜脈曲張、痔、前列腺外周帶靜脈叢擴張等。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以±s表示，兩組間比較采用獨立t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。采用Pearson相關(guān)法分析CBP組HNL、nCD64水平與NIH-CPSI評分的相關(guān)性，logistic回歸法分析CBP、CP/CPPS的影響因素，受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)評價HNL、nCD64對CBP的診斷價值。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1一般資料比較 各組研究對象的年齡、BMI和病程差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與對照組相比，CP/CPPS組、CBP組及其各亞組前列腺液中WBC均明顯升高(P<0.05)；CBP各亞組前列腺液中WBC均高于CP/CPPS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；輕度組、中度組和重度組前列腺液中WBC依次升高，組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。CP/CPPS組與CBP組NIH-CPSI評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但中度組NIH-CPSI評分高于輕度組，重度組高于中度組和輕度組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，表1)。

表1 各組慢性前列腺炎患者一般資料比較(±s)Tab.1 Comparison of general data of chronic prostatitis patients in each group (±s)

表1 各組慢性前列腺炎患者一般資料比較(±s)Tab.1 Comparison of general data of chronic prostatitis patients in each group (±s)

BMI. 體重指數(shù)；WBC. 白細胞計數(shù)；HP. 高倍視野；NIH-CPSI. 美國國立衛(wèi)生研究院慢性前列腺炎癥狀指數(shù)；CP/CPPS. 慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛綜合征；CBP. 慢性細菌性前列腺炎；-. 無數(shù)值；與對照組比較，(1)P<0.05；與CP/CPPS組比較，(2)P<0.05；與輕度組比較，(3)P<0.05；與中度組比較，(4)P<0.05。

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2.2前列腺液中HNL、nCD64水平比較 與對照組比較，CP/CPPS組前列腺液中HNL水平明顯升高(P<0.05)，nCD64水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。CBP各亞組HNL、nCD64水平均明顯高于對照組和CP/CPPS組(P<0.05)。輕度組、中度組和重度組前列腺液中HNL、nCD64水平均依次升高，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，表2)。

2.3HNL、nCD64水平與NIH-CPSI評分的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，CBP組前列腺液中HNL、nCD64水平均與NIH-CPSI評分呈明顯正相關(guān)(r=0.897，P<0.001；r=0.919，P<0.001，圖1)。

2.4CBP、CP/CPPS的影響因素分析 將細菌感染，前列腺液中的WBC、HNL、nCD64，其他病原體感染(排除細菌感染)，排尿功能失調(diào)，神經(jīng)內(nèi)分泌異常，免疫反應(yīng)異常，盆腔相關(guān)疾病作為自變量(賦值：是=1，否=0)，前列腺液中的WBC、HNL及nCD64為連續(xù)數(shù)值型變量，直接納入實測值，將CBP、CP/CPPS發(fā)生情況作為因變量(賦值：發(fā) 生=1，未發(fā)生=0)，行多因素logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，細菌感染、HNL及nCD64是CBP的獨立危險因素(P<0.05)，其他病原體感染、排尿功能失調(diào)、神經(jīng)內(nèi)分泌異常、免疫反應(yīng)異常及盆腔相關(guān)疾病是 CP/CPPS的獨立危險因素(P<0.05，表3)。

表2 各組慢性前列腺炎患者前列腺液中HNL、nCD64水平比較(±s)Tab.2 Comparison of HNL and nCD64 levels in prostatic fluid of chronic prostatitis patients in each group (±s)

表2 各組慢性前列腺炎患者前列腺液中HNL、nCD64水平比較(±s)Tab.2 Comparison of HNL and nCD64 levels in prostatic fluid of chronic prostatitis patients in each group (±s)

HNL. 人中性粒細胞載脂蛋白；nCD64. 中性粒細胞CD64；CP/CPPS. 慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛綜合征；CBP. 慢性細菌性前列腺炎；與對照組比較，(1)P<0.05；與CP/CPPS組比較，(2)P<0.05；與輕度組比較，(3)P<0.05；與中度組比較，(4)P<0.05。

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圖1 慢性細菌性前列腺炎患者前列腺液中HNL、nCD64水平與NIH-CPSI評分的相關(guān)性Fig.1 The relativity of HNL and NCD64 levels in prostatic fluid to the NIH-CPSI scores in CBP patients

2.5HNL、nCD64對CBP的診斷價值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，前列腺液中HNL、nCD64診斷CBP的曲線下面積(AUC)分別為0.837、0.899，最佳臨界值分別為165.36 μg/L、4078.28個/細胞，敏感度分別為83.2%、88.7%，特異度分別為80.8%、85.3%。HNL、nCD64聯(lián)合診斷的AUC為0.949，敏感度為95.4%，特異度為92.6%，二者聯(lián)合診斷CBP的價值更高(圖2)。

表3 CBP、CP/CPPS影響因素的多因素logistic回歸分析Tab.3 Multivariate logistic regression analysis on the influencing factors of CBP and CP/CPPS

3 討 論

慢性前列腺炎臨床癥狀多變，病程復(fù)雜，極易反復(fù)發(fā)作，是誘發(fā)前列腺增生和前列腺癌等疾病的重要因素[12]。傳統(tǒng)分類方法中，CBP和慢性非細菌性前列腺炎(chronic nonbacterial prostatitis，CNP)均屬于慢性前列腺炎范疇[13]。美國國立衛(wèi)生研究院(National Institutes of Health，NIH)新的分類方法中，Ⅱ型即CBP，Ⅲ型即CP/CPPS，包括CNP和前列腺痛(prostatodynia，PD)[14]。臨床上，CBP常有下尿路感染反復(fù)發(fā)作或致病菌于前列腺液中持續(xù)存在的情況出現(xiàn)。CP/CPPS以患者長期反復(fù)出現(xiàn)骨盆區(qū)域疼痛，并伴發(fā)不同程度的排尿異常甚至性功能障礙為主要表現(xiàn)。

圖2 慢性前列腺炎患者ROC曲線分析HNL、nCD64對CBP的診斷價值Fig.2 ROC curve analysis of HNL and nCD64 in diagnosis of CBP in prostatitis patients

作為常用的評估炎癥反應(yīng)的實驗室指標(biāo)，通常情況下WBC越高表明炎癥反應(yīng)越嚴(yán)重。本研究發(fā)現(xiàn)，CP/CPPS組、CBP組及其各亞組前列腺液中WBC均高于對照組，CBP各亞組均高于CP/CPPS組；輕度組、中度組和重度組前列腺液中WBC依次升高。分析原因為，CP/CPPS分為WBC升高的炎癥性CP/CPPS和WBC正常的非炎癥性CP/CPPS，而本研究未將CP/CPPS組按照WBC情況進行詳細分組，因此CP/CPPS組WBC明顯高于對照組，但明顯低于有細菌感染的CBP組，且結(jié)果提示CBP組中細菌感染程度隨病情加重而加重。NIH-CPSI評分常用于評估慢性前列腺炎患者病情的嚴(yán)重程度。本研究中CP/CPPS組與CBP組NIH-CPSI評分無明顯差異，提示兩組患者的病情無差異；CBP中度組NIH-CPSI評分高于輕度組，重度組高于中度組和輕度組，分析原因為細菌感染是導(dǎo)致CBP發(fā)病的主要因素，因此病情越重，NIH-CPSI評分越高，細菌感染越 嚴(yán)重。

通常情況下，免疫球蛋白超家族成員中的CD64在中性粒細胞表面表達水平較低，當(dāng)發(fā)生細菌感染時，細菌脂多糖和細胞因子則促使中性粒細胞大量表達跨膜糖蛋白CD64分子，并特異性識別免疫球蛋白G的Fc段，進而參與機體免疫反應(yīng)。因此CD64水平常被用作監(jiān)測細菌感染性疾病嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)[15]。既往研究報道，細菌感染組CD64的陽性表達率明顯高于非細菌感染組[16]。與非感染組和局部感染組相比，敗血癥組CD64水平明顯升高，且CD64水平在敗血癥初期、中期和恢復(fù)期逐漸下降[17]。正常機體中，HNL處于穩(wěn)定狀態(tài)，當(dāng)被致病菌感染后，活化的外周血中性粒細胞會將HNL由細胞內(nèi)釋放至細胞外，導(dǎo)致HNL含量增加。有研究顯示，急性細菌感染患者血清HNL濃度明顯高于健康者和急性病毒感染患者[18]。血清HNL水平可用于膿毒癥嚴(yán)重程度的評估，感染性休克患者血清HNL水平明顯高于膿毒癥患者和健康者[19]。因此，血清HNL水平也是判斷細菌感染性疾病嚴(yán)重程度的敏感指標(biāo)[20]。早期研究證實，HNL水平在細菌感染時顯著升高，病毒感染時輕度升高，因此，HNL可用于細菌、病毒感染的鑒別診斷，而nCD64則僅是診斷細菌性感染的標(biāo)志物[21]。本研究中CP/CPPS組患者可能存在病毒感染的情況，因此，與對照組比較，CP/CPPS組前列腺液中HNL水平明顯升高，而nCD64水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義。CBP各亞組前列腺液中HNL、nCD64水平均明顯高于對照組和CP/CPPS組，輕度組、中度組和重度組前列腺液中HNL、nCD64水平依次升高，表明前列腺液中HNL、nCD64水平均與細菌感染有關(guān)，且隨感染程度的加重而升高。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，CBP組前列腺液中HNL、nCD64水平均與NIH-CPSI評分呈明顯正相關(guān)，進一步證實前列腺按摩液中HNL、nCD64水平可用于判斷CBP的感染嚴(yán)重程度。

CBP多因葡萄球菌屬、棒狀桿菌屬、腸球菌屬及大腸埃希菌等細菌性病原體逆行感染而發(fā)病[22]。目前普遍認(rèn)為多種病因共同導(dǎo)致了CP/CPPS，雖然尚未有可靠證據(jù)，但有研究報道，病毒、真菌、沙眼衣原體等病原體感染，盆底神經(jīng)肌肉的異常活動以及炎癥可能是CP/CPPS的重要致病因素[23]。本研究多因素logistic回歸分析顯示，細菌感染、HNL及nCD64是CBP的獨立危險因素(P<0.05)，其他病原體感染、排尿功能失調(diào)、神經(jīng)內(nèi)分泌異常、免疫反應(yīng)異常及盆腔相關(guān)疾病是CP/CPPS的獨立危險因素(P<0.05)，與既往研究結(jié)果一致[23]。ROC曲線分析顯示，前列腺液中HNL、nCD64診斷CBP的最佳臨界值分別為165.36 μg/L和4078.28個/細胞，AUC分別為0.837和0.899，二者單獨診斷的價值相當(dāng)，但聯(lián)合診斷的AUC最大(0.949)，敏感度和特異度更高，因此診斷價值更大。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，慢性前列腺炎患者前列腺液中HNL、nCD64水平隨細菌感染程度的加重而升高，且具有正相關(guān)性，聯(lián)合檢測HNL和nCD64對臨床診斷和感染程度的判斷有一定參考價值。后續(xù)研究仍需進一步探討應(yīng)用HNL、nCD64評估CBP患者預(yù)后的臨床價值，以期為CBP的病情和預(yù)后評估提供更準(zhǔn)確、高效、便捷的臨床指標(biāo)。