灰樹(shù)花化學(xué)成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究進(jìn)展

◎ 鄭傳奇，王 勛，陳 華，王 秋，支永明，劉 波

（貴州黔西南喀斯特區(qū)域發(fā)展研究院，貴州 興義 562400）

灰樹(shù)花（Grifola frondosa (Fr.) S. F. Gray）是一種極具開(kāi)發(fā)前景的高檔珍稀食、藥兩用菌[1]，屬擔(dān)子菌亞門(mén)，層菌綱，無(wú)隔擔(dān)子菌亞綱，非褶菌目，多孔菌科，灰樹(shù)花屬，性甘、味平，具有益氣健脾，補(bǔ)虛扶正的功效[2]?；覙?shù)花屬于中溫型、喜光、好氧的木腐菌[3]。其子實(shí)體肉質(zhì)脆嫩，由匙狀、扇狀或舌狀的菌蓋疊生而成[4]，因含有與鮮味有關(guān)的天門(mén)冬氨酸與谷氨酸含量較高，所以味如雞絲，有“食用菌王子”和“華北人參”的稱呼[5]?；覙?shù)花因生長(zhǎng)環(huán)境不同，別名多樣，如河北稱其栗蘑，浙江稱其云蕈，四川稱千佛菌，日本則叫舞茸。其主要分布于俄羅斯、日本與中國(guó)。因其較高的食用價(jià)值及顯著的藥理作用，近年來(lái)，作為保健食品及抗癌藥物，風(fēng)行于日本和北美市場(chǎng)[6]。

灰樹(shù)花營(yíng)養(yǎng)豐富，其子實(shí)體干品含脂肪1.7%，蛋白質(zhì)31.5%，粗纖維10.7%，灰分6.41%，碳水化合物49.69%，蛋白含量比其他多種菌物要高，是香菇的2倍[7]。其化學(xué)成分種類較多，主要包括多糖、多酚、肽類等，且各成分均有顯著的藥理活性，特別是多糖，具有明顯的抗腫瘤、抗病毒、改善免疫系統(tǒng)等功能[8]。隨著灰樹(shù)花藥理活性及保健功能日益顯現(xiàn)，市場(chǎng)需求量逐漸增加，因此，國(guó)內(nèi)多地均加大了對(duì)灰樹(shù)花的研究和種植，使得灰樹(shù)花產(chǎn)量有所提高，但是其質(zhì)量差異也比較大，突出了灰樹(shù)花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定的重要性，筆者在查閱大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)灰樹(shù)花的化學(xué)成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究進(jìn)行綜述，為進(jìn)一步深入研究灰樹(shù)花的化學(xué)成分、藥理作用、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等方面提供研究資料和方向。

1 化學(xué)成分

1.1 多糖

多糖是灰樹(shù)花的主要化學(xué)成分及活性成分，可分為結(jié)構(gòu)多糖和胞外多糖兩類，且不同地域或不同提取方法所得到的多糖存在差異，汪維云等[9]研究結(jié)果顯示，灰樹(shù)花胞外多糖分子量小于胞內(nèi)多糖，相對(duì)分子質(zhì)量大于45 000 的胞外多糖具有生物活性，小于 10 000 的則幾乎沒(méi)有活性。灰樹(shù)花多糖為雜多糖，其單糖有葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖等，以D-葡萄糖為多見(jiàn)，結(jié)構(gòu)多含β-1，6 及β-1，3 糖苷鍵的葡聚糖[10]。日本神戶藥科大學(xué)的Nanba 最早提出了多糖的D-組分和MD-組分，D-組分分子結(jié)構(gòu)為β-1，3 支鏈的β-1，6- 葡聚糖與β-1，6 支鏈的β-1， 3-葡聚糖，MD-組分分子結(jié)構(gòu)含β-1，3 和β-1，6 糖苷鍵的β-葡聚糖，繼MD-組分分離提取之后，Nanba 又分離出MZ-組分，分子結(jié)構(gòu)為β-1，3 及β-1，6 支鏈的β-D-葡聚糖，隨后，Zhuang 等[11]又從灰樹(shù)花中分離到SX-組分，β-1，3 分支或α-1，4 分支的β-1，6-葡聚糖。Hiroaki 與Nanba 等對(duì)灰樹(shù)花中多糖或蛋白聚糖的D-組分、MD-組分、MZ-組分、X-組分進(jìn)行了結(jié)構(gòu)分析及相關(guān)藥理實(shí)驗(yàn)[12-13]。MD-組分的分子結(jié)構(gòu)與MZ-組分相似，在體內(nèi)和體外均能活化巨噬細(xì)胞[14]， X-組分多糖分子結(jié)構(gòu)為α-1，4 分支的β-1，6-葡聚糖。X-組分、SX-組分均具有較好的抗糖尿病作用，而 D-組分是具有很強(qiáng)生物活性的蛋白聚糖，為酸不溶性熱水提取物，可以激活NK 細(xì)胞，達(dá)到機(jī)體免疫的作用[15]，此外，Mizuno 等[16]從灰樹(shù)花子實(shí)體中分離出具有抗腫瘤作用的5 種多糖組分，Yang 等[17]從灰樹(shù)花菌絲體中分離出GFPS1b 組分，經(jīng)過(guò)結(jié)構(gòu)分析，表明該組分與先前D-組分的多糖結(jié)構(gòu)有差異，GFPS1b組分主鏈含α-1，4 和α-1，3 的糖苷鍵，另外，從灰樹(shù)花菌絲體中分離出EX-GF-Fr.1、2、3 三種組分。Ohno 等[18]利用水提法從灰樹(shù)花中提取到多糖Grifolan（GRN），具有顯著抗腫瘤作用。Ying 等[19]從灰樹(shù)花子實(shí)體中得到具有明顯抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用的多糖GFPW，其組成包括三部分，α-1，6-吡喃半乳糖殘基骨干、α 末端的甘露糖和α-O-2 的1，3-巖藻糖殘基。Mao 等[20]從灰樹(shù)花分離到1 種既有免疫調(diào)節(jié)作用又有抗腫瘤作用的多糖GP11，GP11 由D-葡萄糖、D-甘露糖、和D-半乳糖三種組成。Li 等[21]從富硒灰樹(shù)花中分離到1 種與GP11 具有相同藥理活性的富硒多糖，稱為Se-gp11，通過(guò)結(jié)構(gòu)分析表明，Se-gp11 以隨機(jī)線圈結(jié)構(gòu)的球形存在，由n（葡萄糖）：n（甘露 糖）：n（半乳糖）=1 ∶2.41 ∶4.91 組成?；覙?shù)花多糖種類繁多，具有多種藥理活性，在抗腫瘤、抗糖尿病、抗病毒、抗高血脂及免疫調(diào)節(jié)等方面具有顯著的療效[22]，具有廣闊的開(kāi)發(fā)利用前景。

1.2 多酚類

目前從灰樹(shù)花中分離出的酚類化合物較少，主要有阿魏酸、2-羥基丁二酸、二羥基苯乙酸、4-羥基苯甲酸、咖啡酸、香豆酸、3-羥基白藜蘆醇、白藜蘆醇[23]、表兒茶素沒(méi)食子酸酯、對(duì)香豆?？崴帷?duì)香豆?；剖醄24]等，酚類化合物主要具有抗氧化的藥理 作用。

1.3 甾類成分

目前，國(guó)內(nèi)外研究者從灰樹(shù)花中分離出甾類化合物20 余種，主要是甾醇類及其衍生物，主要有5α，8β-過(guò)氧麥角甾-6，22-二烯-3β-醇、麥角甾醇、3β，5α，6β-三羥基麥角甾醇[25]、麥角甾醇過(guò)氧化物，此外還有麥角甾-4，6，8，22，-四烯-3-酮等。

1.4 其他類成分

除以上提及成分外，灰樹(shù)花還含蛋白質(zhì)、微量元素以及香豆素[25]、生物堿、煙酸、肽類、琥珀酸、甘露醇、甘菊藍(lán)、2-甲酚及脂肪酸等成分。楊生兵等[26]對(duì)灰樹(shù)花發(fā)酵菌絲體與子實(shí)體進(jìn)行分離鑒定，從發(fā)酵菌絲體中鑒定出揮發(fā)性成分94 種，多以酮類、醛類和酯類為主，而從子實(shí)體中鑒定出揮發(fā)性成分62 種，主要以醇類、酮類和醛類為主。

2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

目前，《中國(guó)藥典》未收載灰樹(shù)花藥材，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究較少，因此，對(duì)目前已有灰樹(shù)花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行歸納總結(jié)，旨在為灰樹(shù)花藥材的開(kāi)發(fā)利用、保證中藥材質(zhì)量、推動(dòng)中藥現(xiàn)代化研究提供方向。

2.1 性狀鑒別

2.1.1 灰樹(shù)花鮮品性狀鑒別

灰樹(shù)花子實(shí)體呈肉質(zhì)，有柄或無(wú)柄，多分支，具匙形或扇形菌蓋，重疊成叢，寬達(dá)40～60 cm、厚2～7 mm， 菌蓋直徑2 ～7 cm，菌蓋有灰色、灰白色、淡褐色等[27-28]；嫩菌表面有細(xì)毛，老后光滑，具放射狀條紋，邊緣薄，有一圈不規(guī)則尖凸，菌肉白色，內(nèi)卷；菌管延生，孔面白色至淡黃色，管口呈多角形；孢子無(wú)色，光滑，卵圓形至橢圓形；菌絲壁薄，無(wú)鎖狀聯(lián)合，具分枝與橫隔[29-30]。

2.1.2 灰樹(shù)花干品性狀鑒別

子實(shí)體干品呈珊瑚狀，質(zhì)地脆而堅(jiān)；菌蓋表面較鮮品深，為淺褐色或灰褐色，背面孔狀，折斷時(shí)粉塵散落；具濃郁的香氣，手觸碰后有特殊的香氣殘留在手指間；將干品浸在水中，灰樹(shù)花體積膨脹，水被染成淡黃色。將其進(jìn)行火試，燃燒時(shí)有白色煙霧飄散，菌柄有木材燃燒的味道，燒完略有油狀物殘留[10]。

2.2 顯微鑒別

隆毅等[31]對(duì)不同生境的灰樹(shù)花子實(shí)體粉末性狀進(jìn)行鑒別，結(jié)果為子實(shí)體粉末呈類白色或淺灰黃色，光滑，易在手上粘附，氣微、味淡。顯微鏡下可見(jiàn)眾多菌絲，多彎曲成團(tuán)或平行呈束密集排列，少有分枝、壁較薄，無(wú)鎖狀聯(lián)合，具橫隔，直徑5.5 ～10 μm；擔(dān)孢子橢圓形至卵形，光滑、偶見(jiàn)棕色塊狀結(jié)晶及子實(shí)體層等。劉佳[10]對(duì)灰樹(shù)花進(jìn)行顯微研究，結(jié)果為灰樹(shù)花菌絲無(wú)色壁薄，直徑2 ～4 μm，多數(shù)具分枝，無(wú)鎖狀聯(lián)合，有橫隔。孢子橢圓形，一端稍尖，光滑，無(wú)色，與隆毅的研究有少許差異。

2.3 薄層鑒別

2.3.1 薄層層析鑒別

灰樹(shù)花薄層鑒別方法基本屬于空白，隆毅[31]按照薄層色譜方法，以精氨酸為對(duì)照品溶液，吸取灰樹(shù)花供試品溶液點(diǎn)于硅膠G 薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（3 ∶2 ∶1）為展開(kāi)劑，用茚三酮顯色，在日光下檢視，在同對(duì)照品相應(yīng)的位置上，可見(jiàn)紫紅色斑點(diǎn)出現(xiàn)。

2.3.2 全息薄層色譜鑒別

隆毅[31]研究表明，以麥角甾醇為對(duì)照品溶液，將供試液點(diǎn)于硅膠GF254 薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸（8 ∶4 ∶0.5）為展開(kāi)劑，在紫外燈254 nm、365 nm 下檢視，再噴以2%香草醛-硫酸乙醇溶液，日光下檢視，均可見(jiàn)與對(duì)照品相同的斑點(diǎn)。

2.4 主要成分含量測(cè)定

2.4.1 多糖的測(cè)定

灰樹(shù)花多糖是灰樹(shù)花的主要活性成分，也是目前研究的熱點(diǎn)，以灰樹(shù)花多糖為主要成分制成的劑型較多，如保利生膠囊、舞茸精滴劑、麥特消膠囊等，因此，灰樹(shù)花多糖能在一定程度上反映出其藥材質(zhì)量，可作為質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。隆毅等[32]采用蒽酮-硫酸法，結(jié)合正交試驗(yàn)確定最佳提取工藝，測(cè)定不同產(chǎn)地灰樹(shù)花粗多糖與可溶性糖的含量，結(jié)果18 批不同產(chǎn)地灰樹(shù)花粗多糖含量為8.17%～34.82%，可溶性糖為27.46%～55.65%。樊懿娜等[33]采用熱水法提取灰樹(shù)花多糖，以葡萄糖為對(duì)照品，用苯酚-硫酸法，于490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品和3 個(gè)供試品溶液的吸光度，結(jié)果3 個(gè)供試品葡萄糖含量分別為21.7%、21.3%和20.9%。孫耀[34]采用正交試驗(yàn)確定灰樹(shù)花多糖水提醇沉最佳工藝條件，測(cè)定中性糖含量為43.68%，并對(duì)提取到的灰樹(shù)花粗多糖理化性質(zhì)進(jìn)行了研究。顧華杰等[35]采用蒽酮-硫酸法、費(fèi)林滴定法、苯酚-硫酸法、3，5-二硝基水楊酸法4 種方法，測(cè)定發(fā)酵液中灰樹(shù)花菌絲體的胞外多糖和胞內(nèi)多糖，結(jié)果顯示，3，5-二硝基水楊酸法測(cè)定胞外多糖較好，最佳吸收波長(zhǎng)為490 nm，而苯酚-硫酸法測(cè)定胞內(nèi)多糖較好，最佳波長(zhǎng)為485 nm。

2.4.2 蛋白質(zhì)的測(cè)定

灰樹(shù)花所含蛋白質(zhì)較高，且不同海拔生長(zhǎng)的灰樹(shù)花所含蛋白含量存在差異[36]，李怡彬等[37]用不同廢棄培養(yǎng)料栽培白灰樹(shù)花和灰樹(shù)花，并對(duì)其子實(shí)體中蛋白質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，灰樹(shù)花和白灰樹(shù)花子實(shí)體含蛋白質(zhì)量較高，平均含量22.95%，氨基酸總量均值為17.51%，二者的蛋白含量均高于香菇子實(shí)體。隆毅[31]對(duì)不同產(chǎn)地18 批灰樹(shù)花中蛋白質(zhì)含量進(jìn)行了測(cè)定，采用考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定蛋白含量，結(jié)果為全國(guó)18 批不同規(guī)格與產(chǎn)地的灰樹(shù)花蛋白質(zhì)含量無(wú)明顯差異，建議擬定灰樹(shù)花蛋白含量限度不得低15%。馮猛等[38]在液體培養(yǎng)條件下，測(cè)定了8 個(gè)灰樹(shù)花菌株發(fā)酵液中蛋白質(zhì)含量，結(jié)果顯示，在接種后第7 d 發(fā)酵液中產(chǎn)生的蛋白質(zhì)含量達(dá)高峰，最高含量為0.485 0 mg·mL-1，最低為0.308 9 mg·mL-1。

2.5 指紋特征圖譜

指紋圖譜技術(shù)是中藥鑒別的重要手段，中藥色譜指紋圖譜是指不同產(chǎn)地中藥及其制劑所共有的、具有特異性組分群，經(jīng)色譜測(cè)定得到的特征圖象或圖譜。有關(guān)灰樹(shù)花指紋圖譜研究的文獻(xiàn)報(bào)道較少，李小定[39]等采用糖腈乙酸酯氣相色譜法，利用OV-1701 毛細(xì)管色譜柱對(duì)灰樹(shù)花中7 種單糖的糖腈乙酸酯及內(nèi)標(biāo)肌醇六乙酰酯進(jìn)行分離，并測(cè)定其多糖粗品及4 種等級(jí)的單糖組成。蘭蓉等[40]采用超聲波法提取灰樹(shù)花中揮發(fā)油成分，利用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用技術(shù)分析鑒定，經(jīng)NIST 譜庫(kù)檢索，鑒定出17 種化合物，主要為含酯類的揮發(fā)油成分，包括油酸酯和亞油酸乙酯等。賈瑞博等[41]構(gòu)建了灰樹(shù)花多酚高效液相色譜的分析測(cè)定法，采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)多酚組分進(jìn)行分離鑒定。

隆毅[31]對(duì)不同產(chǎn)地的18 批灰樹(shù)花進(jìn)行了系統(tǒng)的HPLC 指紋圖譜研究，歸納其共有特征，并首次建立了不同規(guī)格灰樹(shù)花水與甲醇提取液的HPLC 指紋圖譜，對(duì)18 批灰樹(shù)花指紋圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)行相似度分析評(píng)價(jià)，結(jié)果相似度均大于0.9。楊海[15]建立了反映活性成分灰樹(shù)花β-葡聚糖的藥材指紋圖譜，采用示差折光檢測(cè)器（RID）進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，可檢出較為明顯的指紋圖譜峰7 個(gè)，且10 批藥材的相似度均在0.95 以上；采用二極管陣列檢測(cè)器（DAD）檢測(cè)時(shí)，可檢出共有峰 16 個(gè)，10 批藥材的相似度在0.90 以上。

3 結(jié)語(yǔ)

灰樹(shù)花是近年來(lái)開(kāi)發(fā)的珍稀食藥用真菌之一，除了具有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可以作為菜肴食用外，其還含有多種活性成分，具有顯著的藥理活性。目前，對(duì)灰樹(shù)花藥理活性成分的研究主要集中在多糖，而對(duì)其他活性成分，如多酚、甾體、肽類等相對(duì)較少，希望后續(xù)研究者可以從這方面再進(jìn)行深入研究。此外，隨著灰樹(shù)花藥理作用及保健功能的日益顯現(xiàn)，市場(chǎng)需求量逐漸增加，使得灰樹(shù)花栽培日益增多，很多研究者對(duì)灰樹(shù)花栽培技術(shù)進(jìn)行了較為詳細(xì)的研究，但是不同生境下生長(zhǎng)的灰樹(shù)花，其性狀、營(yíng)養(yǎng)成分、化學(xué)活性成分等存在差異，缺乏分級(jí)研究。對(duì)灰樹(shù)花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的文獻(xiàn)報(bào)道較少，且存在少許差異，因此，可以擴(kuò)大樣品，選取灰樹(shù)花鮮品與干品同時(shí)進(jìn)行研究，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定有利于保證中藥材質(zhì)量、推動(dòng)中藥產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。因此，中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定對(duì)推動(dòng)中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化具有重大的意義。