大落新婦化學(xué)成分的研究

何 康，伍天苔，范琳琳，申琳燕，陳志琳，鄒 娟?

（1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州貴陽(yáng) 550025；2.貴州健康職業(yè)學(xué)院，貴州銅仁 554309）

大落新婦Astilbe grandisStapf ex Wils.為虎耳草科落新婦屬植物，其同屬植物在我國(guó)有7 種和2 個(gè)變種［1］，大約有6 種用作民族民間草藥。其中，大落新婦在貴州苗族地區(qū)主要用于治療跌打損傷、筋骨疼痛、關(guān)節(jié)疼痛、風(fēng)濕病、腰腿痛等。

文獻(xiàn)調(diào)研顯示，落新婦屬植物主要含有三萜、香豆素、黃酮等成分，在抗腫瘤、鎮(zhèn)咳平喘、抗菌、抗病毒、治療燒燙傷等方面有廣泛的生物活性［2-6］，課題組前期已從該植物中分離得到系列羧基從C17位遷移到C14位的齊墩果烷型三萜。本實(shí)驗(yàn)對(duì)大落新婦根90%甲醇提取物化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離鑒定出18 個(gè)化合物，其中包括1 個(gè)少見(jiàn)的二聚丁烯內(nèi)脂類和3 個(gè)丁烯內(nèi)脂類化合物，以上化合物均為首次從該植物中分離得到，化合物4 為1998 年日本學(xué)者從算盤(pán)子屬Glochidion中發(fā)現(xiàn)以來(lái)的第2 次發(fā)現(xiàn)。

1 材料

AV-500 型超導(dǎo)核磁共振儀、Q-TOF 質(zhì)譜儀（德國(guó)布魯克公司）；J209A-4 型植物粉碎機(jī)（河南黃驊齊家務(wù)科學(xué)儀器廠）；R215 實(shí)驗(yàn)室規(guī)模旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi 公司）。Sephadex LH-20（美國(guó)通用電氣醫(yī)療集團(tuán)）；GF254制備薄層板及200～300 目柱色譜用硅膠（青島海洋化工有限公司）。顯色劑10%硫酸-乙醇溶液，其他試劑均為分析純。

藥材采自六盤(pán)水市鐘山區(qū)石龍村，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)民族醫(yī)藥研究所趙俊華教授鑒定為虎耳草科落新婦屬植物大落新婦Astilbe grandisStapf ex Wils.的根。

2 提取與分離

將12.5 kg 干燥的大落新婦根粉碎，加90%甲醇冷浸提取2 次，每次3 d，將提取液旋干至無(wú)甲醇味，得大落新婦提取物，所得浸膏加水分散后，用等量的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得水相部分和油相部分。油相部分合并旋干得浸膏659.8 g，把浸膏與適量硅膠拌勻，常壓柱層析，采用二氯甲烷-甲醇溶劑系統(tǒng)（100∶0、100∶1、90∶10、85∶15、80∶20、0∶100）進(jìn)行梯度洗脫，回收溶劑得到A～F 6 個(gè)部分，B 部分（7.3 g）經(jīng)硅膠柱層析，以二氯甲烷-乙酸乙酯（100∶5～9∶1）洗脫，得到化合物14（20 mg）、11（1.3 g）、10（30 mg）；C 部分（81.3 g）經(jīng)硅膠柱層析，用二氯甲烷-乙酸乙酯（9∶1～1∶1）洗脫，得到化合物1、2（89 mg）、18（13 mg）；D 部分（65.8 g）經(jīng)硅膠柱層析，用二氯甲烷-乙酸乙酯（9∶1～1∶1）洗脫，再用Sephadex LH-20 純化，得化合物12（48 mg）、4（50 mg）、9（40 mg）；E 部分（133.5 g）經(jīng)硅膠柱層析，用二氯甲烷-甲醇（9∶1～1∶1）洗脫，再用Sephadex LH-20，純化，得化合物15（102 mg）、3（18 mg）；F 部分（417.3 g）經(jīng)硅膠柱層析，用二氯甲烷-甲醇（9∶1～1∶1）洗脫，得到F1～F5，F(xiàn)2 部分（7.1 g）經(jīng)硅膠柱層析，用二氯甲烷-甲醇（95∶5～9∶1）洗脫，得到化合物17（4 mg）、16（8 mg）、13（4 mg）；F3 部分（15.3 g）經(jīng)硅膠柱層析，用二氯甲烷-甲醇（9∶1～8∶2）洗脫，再用Sephadex LH-20 純化，得到化合物6（2 g）、7（20 mg）、8（57 mg）。F3 部分（1.3 g）經(jīng)硅膠柱層析，用二氯甲烷-甲醇（8∶2～7∶3）洗脫，再用Sephadex LH-20 純化，得到化合物5（13 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：無(wú)色油狀（氯仿），分子式C8H8O3。ESI-MSm／z：153.0 ［M-H］-。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：1.61（1H，m，H-7a），2.89（1H，m，H-7b），4.57（1H，ddd，J＝9.9，5.3，2.3 Hz，H-6），4.84（1H，ddd，J＝123.4，4.9，1.8 Hz，H-8），5.74（1H，s，H-2），6.30（1H，m，H-5），6.50（1H，dd，J＝9.9，2.5 Hz，H-4）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：174.5（C-1），164.2（C-3），144.9（C-5），119.8（C-4），113.1（C-2），78.7（C-8），66.6（C-6），40.0（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］基本一致，故鑒定為menisdaurilide。

化合物 2：無(wú)色油狀（氯仿），分子式C8H8O3。ESI-MSm／z：153.0 ［M-H］-。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：1.72（1H，m，H-7a），2.96（1H，m，H-7b），4.57（1H，m，H-6），5.27（1H，ddd，J＝12.7，5.2，1.8 Hz，H-8），5.76（1H，s，H-2），6.30（1H，m，H-5），6.54（1H，d，J＝9.7 Hz，H-4）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：174.5（C-1），164.2（C-3），138.7（C-5），121.8（C-4），112.1（C-2），77.7（C-8），64.3（C-6），37.4（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］基本一致，故鑒定為aquilegiolide。

化合物3：無(wú)色油狀（甲醇），分子式C14H19O8。ESI-MSm／z：313.1 ［M-H］-。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：1.73（1H，m，H-7a），3.01（1H，m，H-7b），3.20（1H，dd，J＝9.3，7.8 Hz，H-2′），3.29（1H，t，J＝9.0 Hz，H-4′），3.38（1H，t，J＝9.0 Hz，H-3′），3.69（1H，dd，J＝11.8，5.6 Hz，H-6′a），3.90（1H，dd，J＝12.0，2.3 Hz，H-6′b），4.47（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），4.69（1H，m，H-6），5.05（1H，ddd，J＝13.4，5.0，1.8 Hz，H-8），5.89（1H，brs，H-2），6.67（1H，dd，J＝10.1，2.6 Hz，H-5），6.55（1H，dd，J＝10.1，1.5 Hz，H-4）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：175.9（C-1），165.7（C-3），144.7（C-5），120.9（C-4），111.6（C-2），103.6（C-1′），80.0（C-8），78.4（C-5′），78.1（C-3′），75.0（C-2′），74.8（C-6），72.4（C-4′），62.8（C-6′），38.3（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］基本一致，故物鑒定為phyllanthurinolactone。

化合物4：白色粉末（甲醇），分子式C16H16O6。ESI-MSm／z：303.1 ［M-H］-。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：1.75（1H，dd，J＝13.4，9.8 Hz，H-7′α），1.92（1H，ddd，J＝14.3，9.4，2.5 Hz，H-7b），2.19（1H，d，J＝17.4 Hz，H-2a），2.61～2.55（2H，m，H-2b，7α），3.07～3.00（1H，m，H-7′ b），4.28（1H，ddd，J＝9.8，6.0，2.1 Hz，H-6），4.69（1H，ddd，J＝10.2，5.8，2.8 Hz，H-6′），5.05（1H，dt，J＝4.3，2.0 Hz，H-8），5.68（1H，dt，J＝10.4，1.7 Hz，H-4），6.00（1H，ddd，J＝10.4，2.4，1.3 Hz，H-5），6.09（1H，s，H-2′），6.24（1H，ddd，J＝10.2，2.6，1.1 Hz，H-5′），6.83（1H，dd，J＝10.3，2.4 Hz，H-4′）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：175.7（C-1），172.9（C-1′），167.1（C-3′），143.4（C-5′），136.0（C-5），126.9（C-4），123.3（C-4′），115.6（C-2′），88.5（C-8′），80.2（C-8），66.0（C-6′），62.1（C-6），49.7（C-3），43.1（C-7′），38.7（C-2），34.9（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為glochidiolide。

化合物5：無(wú)色油狀（甲醇），分子式C12H22O11。ESI-MSm／z：343.1 ［M+H］+。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：3.87～3.13（12H，m，H-2～6，2′～6′），4.49（1H，dd，J＝7.8，1.2 Hz，H-1′），5.12（1H，d，J＝3.7 Hz，H-1）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：98.2（C-1），93.9（C-1′），78.0（C-3，3′），76.2（C-5），74.8（C-2），73.8（C-5′），72.9（C-4′），71.8（C-2′），71.7（C-4），62.8（C-6），62.7（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］一致，故鑒定為黑曲霉糖。

化合物6：白色粉末（甲醇）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：1.25（3H，d，J＝6.3 Hz，H-6），3.36（1H，m，H-4），3.66（1H，m，H-3），3.71（1H，m，H-2），3.79（1H，m，H-5），5.00（1H，d，J＝1.4 Hz，H-1）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：95.8（C-1），74.2（C-4），73.0（C-2），72.1（C-3），69.2（C-5），18.1（C-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］一致，故鑒定為鼠李糖。

化合物7：無(wú)色油狀（甲醇）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：3.53（1H，m，H-1b），3.68（1H，m，H-1a），3.72（1H，m，H-6a），3.84（1H，m，H-6b），3.85（1H，m，H-5），4.09（2H，m，H-3，4）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：103.1（C-2），76.6（C-4），83.1（C-5），77.4（C-3），64.4（C-1），64.1（C-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］一致，故鑒定為果糖。

化合物8：白色粉末（甲醇），分子式C7H14O6。ESI-MSm／z：195 ［M+H］+。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：3.32（3H，s，2-OCH3），3.65（2H，dd，J＝12.0，5.0 Hz，H-6），3.79～3.70（2H，m，H-1），3.85（1H，ddd，J＝6.4，5.0，3.0 Hz，H-5），3.90（1H，dd，J＝6.5，4.2 Hz，H-4）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：109.2（C-2），84.6（C-5），82.6（C-3），78.9（C-4），62.8（C-6），60.5（C-1），49.9（C-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］一致，故鑒定為甲基-α-D-呋喃果糖苷。

化合物9：白色粉末（氯仿）。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：0.68（3H，s，H-18），0.90（3H，d，J＝5.3 Hz，H-21），0.92（3H，s，H-19），1.01（3H，d，J＝6.4 Hz，H-27），2.53～2.45（1H，m，H-17），3.99（1H，m，H-3），3.99（1H，m，H-3′），4.08（1H，t，J＝8.1 Hz，H-2′），4.31（2H，m，H-4′），4.40（1H，d，J＝5.9 Hz，H-6′β），4.59（1H，d，J＝11.9，H-6′α），5.01（1H，d，J＝7.7 Hz，H-1′），5.37（1H，dt，J＝5.5，2.3 Hz，H-6）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：141.3（C-5），122.3（C-6），103.0（C-1′），79.0（C-3），78.9（C-3′），78.5（C-5′），75.8（C-2′），72.1（C-4′），63.2（C-6′），57.2（C-14），56.6（C-17），50.8（C-9），46.4（C-24），42.9（C-13），40.4（C-4），39.8（C-12），37.9（C-1），37.3（C-10），36.8（C-20），34.6（C-22），32.6（C-7），32.5（C-8），30.7（C-2），29.9（C-25），26.8（C-23），24.9（C-15），23.8（C-28），21.7（C-11），20.4（C-27），19.8（C-26），19.6（C-19），19.4（C-21），12.6（C-29），12.4（C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］一致，故鑒定為胡蘿卜苷。

化合物10：白色粉末（氯仿），分子式C45H78O2。ESI-MSm／z：653.6 ［M+H］+。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：0.67（1H，m，H-18），0.82（3H，m，H-29），0.83（3H，m，H-26），0.84（3H，m，H-27），0.90（3H，m，H-21），0.91（3H，d，J＝7.0 Hz，H-24），0.95（1H，d，J＝6.5 Hz，H-14），1.04（3H，s，H-30），2.29（2H，t，J＝7.6 Hz，H-2′），5.40（1H，d，J＝5.4 Hz，H-6）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：173.4（C-1′），139.7（C-5），122.6（C-6），73.7（C-3），56.7（C-14），56.0（C-17），50.0（C-7），45.8（C-24），42.3（C-13），39.7（C-12），38.2（C-4），37.0（C-1），36.6（C-10），36.2（C-20），34.7（C-2′），34.0（C-22），32.0（C-7），31.9（C-8），31.9（C-14′），29.7（C-8′），29.6（C-9′），29.5（C-10′），29.4（C-11′），29.3（C-12′），29.3（C-13′），29.2（C-6′），29.2（C-7′），29.1（C-5′），28.7（C-4′），28.3（C-25），27.8（C-16），26.7（C-2），26.0（C-23），25.1（C-3′），24.3（C-15），23.1（C-28），22.7（C-15′），21.0（C-11），19.8（C-26），19.3（C-19），19.0（C-27），18.8（C-21），14.1（C-16′），12.0（C-29），11.9（C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］一致，故鑒定為β-谷甾醇棕櫚酸酯。

化合物11：白色粉末（氯仿）。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：0.71（3H，s，H-20），0.79（3H，s，H-26），0.81（3H，s，H-27），0.83（3H，s，H-29），0.91（3H，s，H-19），0.91（3H，s，H-21），3.42（1H，m，H-3），5.25（1H，dt，J＝4.5，2.0 Hz，H-6）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：140.9（C-5），121.9（C-6），72.0（C-3），56.9（C-14），56.2（C-17），50.3（C-9），46.0（C-24），42.5（C-13），39.9（C-4），37.4（C-12），36.7（C-10），36.3（C-20），34.1（C-22），32.1（C-8），31.8（C-2），29.9（C-1），29.5（C-7），29.3（C-25），28.4（C-16），26.2（C-23），24.5（C-15），23.2（C-28），22.8（C-11），21.2（C-27），20.0（C-21），19.6（C-26），19.2（C-19），12.1（C-18），12.0（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］一致，故鑒定為β-谷甾醇。

化合物12：白色粉末（氯仿），分子式C24H38O4。ESI-MSm／z：413.3 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：0.95～0.86（12H，m，H-7′，7′，9′，9′），1.39～1.34（16H，m，H-4′，4″，5′，5″，6′，6″，8′，8″），1.70（2H，m，H-3′，3″），4.23（4H，ddd，J＝5.7，4.3，1.1 Hz，H-2′，2″），7.64（2H，dd，J＝5.7，3.3 Hz，H-3，4），7.73（2H，dd，J＝5.7，3.3 Hz，H-2，5）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：169.4（C-1′，1″），132.4（C-1，6，2，5），129.9（C-3，4），69.1（C-2′，2″），40.2（C-3′，3″），31.6（C-8′，8″），30.1（C-6′，6″），25.0（C-5′，5″），24.0（C-4′，4″），14.4（C-9′，9″），11.4（C-7′，7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］一致，故鑒定為鄰苯二甲酸二-（2-乙基己基）酯。

化合物13：白色粉末（氯仿），分子式C10H10O3，ESI-MSm／z：177 ［M-H］-。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：3.80（3H，s，H-OCH3），6.30（1H，d，J＝15.9 Hz，H-8），6.87～6.83（2H，m，H-3，5），7.44～7.40（2H，m，H-2，6），7.65（1H，d，J＝16.0 Hz，H-7）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：168.1（C-9），157.9（C-4），144.8（C-7），130.1（C-3），130.1（C-5），127.3（C-1），116.0（C-2），116.0（C-6），115.3（C-8），51.8（C-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［18］一致，故鑒定為對(duì)香豆酸甲酯。

化合物14：白色粉末（氯仿），分子式C9H10O3，ESI-MSm／z：165 ［M-H］-。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：3.71（2H，s，H-7），3.77（3H，s，8-OCH3），6.89～6.93（1H，m，H-4），6.89～6.93（1H，m，H-5），7.13（1H，dd，J＝7.6，1.6 Hz，H-6），7.21（1H，t，J＝7.7，1.7 Hz，H-3）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：174.2（C-8），155.0（C-2），131.0（C-4），129.2（C-6），120.8（C-5），120.6（C-3），117.3（C-1），52.7（C-7），37.4（8-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［19］一致，故鑒定為鄰羥基苯乙酸甲酯。

化合物15：白色結(jié)晶（甲醇），分子式C9H10O3，ESI-MSm／z：165 ［M-H］-。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：3.62（2H，s，H-7），3.67（3H，s，8-OCH3），6.77（1H，m，H-4），6.78（1H，m，H-6），6.79（1H，m，H-2），7.09（1H，m，H-5）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：174.7（C-8），156.7（C-3），132.1（C-1），129.4（C-5），122.5（C-6），120.4（C-2），115.8（C-4），52.3（C-7），36.4（8-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［20］一致，故鑒定為間羥基苯乙酸甲酯。

化合物16：白色粉末（氯仿），分子式C10H12O5，ESI-MSm／z：211 ［M-H］-。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：3.90（3H，s，7-OCH3），3.94（6H，s，3，5-OCH3），7.32（2H，s，H-2，6）；13CNMR（125 MHz，CDCl3）δ：167.0（C-7），146.8（C-3，5），139.3（C-4），121.2（C-1），106.8（C-2，6），56.6（3，5-OCH3），52.2（7-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［21］一致，故鑒定為丁香酸甲酯。

化合物17：白色粉末（氯仿），分子式C19H30O4。ESI-MSm／z：323.2 ［M+H］+。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：0.87（3H，q，J＝7.1 Hz，H-10′），1.25（10H，s，H-4′，5′，6′，7′，8′），1.38（2H，m，H-9′），1.57（6H，s，H-1′，2′，3′），3.89（3H，s，3-OCH3），3.95（3H，s，4-OCH3），6.94（1H，d，J＝8.3 Hz，H-5），7.55（1H，d，J＝1.9 Hz，H-2），7.64（1H，dd，J＝8.3，1.9 Hz，H-6）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：167.0（C-7），150.1（C-4），146.3（C-3），124.3（C-6），122.4（C-1），114.2（C-2），111.9（C-5），65.7（C-1′），56.3（3-OCH3），52.1（4-OCH3），32.1（C-8′），29.8（C-4′），29.8（C-5′），29.8（C-6′），29.8（C-7′），29.5（C-2′），22.8（C-3′），19.3（C-9′），14，3（C-10′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［22］一致，故鑒定為cotonoate B。

化合物18：白色粉末（氯仿），分子式C13H26O2。ESI-MSm／z：213.2 ［M-H］-。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：0.88（3H，t，J＝7.0 Hz，H-13），1.25（22H，m，H-2-12）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：178.9（C-1），34.0（C-2），32.1（C-3），29.8（C-4），29.8（C-5），29.7（C-6），29.6（C-7），29.5（C-8），29.4（C-9），29.2（C-10），24.9（C-11），22.8（C-12），14.3（C-13）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［23］一致，故鑒定為十二烷酸。

4 討論

課題組前期已從該民族藥中分離得到系列特征三萜類化合物，為繼續(xù)闡明該民族藥中其他成分，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其根90%甲醇提取物化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離鑒定出18 個(gè)化合物，均為首次從該植物中分離得到，其中包括1 個(gè)少見(jiàn)的二聚丁烯內(nèi)脂類（化合物4）和3 個(gè)丁烯內(nèi)脂類化合物（化合物1～3）。分離得到的丁烯內(nèi)脂類化合物目前還未見(jiàn)生物活性的研究報(bào)道，課題組下一步將富集化合物量，并根據(jù)該民族藥在貴州苗族地區(qū)用于治療跌打損傷、筋骨疼痛、關(guān)節(jié)疼痛、風(fēng)濕病、腰腿痛等疾病的特點(diǎn)，繼續(xù)對(duì)其進(jìn)行鎮(zhèn)痛抗炎、抗菌等方面的活性研究，初步闡明其生物活性特點(diǎn)，有望成為該民族藥區(qū)別于其同屬植物的特征性成分。另外，分離中發(fā)現(xiàn)有較大量強(qiáng)極性部分在薄層板上能檢測(cè)到斑點(diǎn)，可進(jìn)一步采用反向色譜、制備和半制備色譜等更有效的分離手段再進(jìn)行研究，可能發(fā)現(xiàn)更多糖基化的三萜、香豆素、丁烯內(nèi)酯等成分。本研究從大落新婦中首次發(fā)現(xiàn)的二聚丁烯內(nèi)酯類、丁烯內(nèi)酯類成分豐富了其結(jié)構(gòu)類型，可為該屬植物的質(zhì)量控制及后續(xù)開(kāi)發(fā)利用提供參考。