外泌體通過Toll樣受體調(diào)節(jié)固有免疫的研究進展①

許亞輝 胡素芹 郭 健 （北京中醫(yī)藥大學中醫(yī)學院，北京100029）

外泌體最早于 1983 年被 PNA 等［1］用抗體追蹤法在綿羊網(wǎng)織紅細胞中發(fā)現(xiàn)，關于外泌體參與免疫應答的研究，于1998年由ZITVOGEL 等［2］發(fā)現(xiàn)，其研究樹突狀細胞（dendritic cells，DCs）來源的外泌體能夠引起小鼠腫瘤排斥反應，自此揭開了外泌體抗腫瘤免疫的研究。固有免疫應答是人體抵抗病原體入侵的第一道防線，引起固有免疫應答的物質(zhì)主要有病原相關分子模式（pathogen associated molecu?lar pattern，PAMP）和損傷相關分子模式（damage associated molecular pattern，DAMP），其識別受體包括甘露糖受體、清道夫受體、Toll 樣受體（Toll-like receptors，TLRs）等模式識別受體，其中最主要的是TLRs。TLRs 表達于多種固有免疫細胞，如巨噬細胞、NK 細胞和DCs，主要通過識別病原微生物特定的、保守的內(nèi)源和外源分子模式［3］，從而誘導固有免疫應答，引起炎癥介質(zhì)和細胞因子的釋放，并調(diào)節(jié)適應性免疫應答。參與固有免疫的細胞和分子主要有吞噬細胞、殺傷細胞、DCs 及補體、細胞因子、CD 分子，近年來研究發(fā)現(xiàn)，外泌體與固有免疫細胞和分子之間存在密切聯(lián)系，并參與調(diào)節(jié)機體對病原體的識別，從而介導固有免疫應答［4］，除了 PAMP 和DAMP，外泌體內(nèi)包含的一些物質(zhì)也能夠激活TLRs，通過將病原體成分和宿主自身成分一起傳遞給受體細胞，從而激活受體細胞觸發(fā)固有免疫［5］。

1 外泌體與免疫應答

外泌體是細胞外囊泡（extracellular vesicles，EVs）的一種主要形式，與細胞質(zhì)膜融合后通過出芽的形式被分泌到細胞外，攜帶蛋白質(zhì)、核酸、脂類等多種生物信息，幾乎存在于所有的組織、細胞間隙、體液中，如血清和淋巴液、間質(zhì)液、尿液、唾液、乳汁和精液，參與免疫應答［6-18］。外泌體裝載著各種免疫相關分子，包括溶酶體相關膜蛋白1 和2、免疫球蛋白超家族成員8 和主要組織相容性復合體，能與特異性肽鏈相結(jié)合，特別是DCs 釋放的EVs 含有主要組織相容性復合體Ⅰ類和Ⅱ類分子，能夠激活同源T 細胞，誘導體液免疫應答；還包含母本細胞來源的四分子交聯(lián)體家族成員CD63、CD81、CD82、CD37、CD9［19-25］。2007 年，THAKUR 等［26］發(fā)現(xiàn)細胞間可以通過外泌體中的RNA 來交換遺傳物質(zhì)，之后越來越多的研究發(fā)現(xiàn)外泌體內(nèi)還包含DNA、mRNA 和miR?NA、lncRNA、circRNA 等非編碼RNA，特別是非編碼RNA 在某些情況下能夠激活TLRs，參與固有免疫應答［27-29］。

外泌體與免疫相關方面的研究主要集中在3個方面：①探索并鑒定不同免疫細胞來源的外泌體大小、內(nèi)含物種類、功能及治療應用［30-31］；②探究外泌體內(nèi)含物作為免疫疾病診斷的生物標志分子，探索與受體細胞作用的分子機制和細胞間通訊功能，闡明外泌體分子生物標志物與疾病發(fā)生發(fā)展的關系，為早期診斷預防提供支持［32-34］；③外泌體載藥研究，即利用外泌體作為藥物載體，直接靶向注射藥物至受體細胞，從而達到降低細胞對藥物的免疫源性、提高藥物運輸和吸收效率，具有精準給藥和跨越組織屏障等優(yōu)點［35-36］?？傊煌庖呒毎麃碓吹耐饷隗w功能不同，可促進免疫應答，也可抑制免疫應答。在固有免疫應答中，外泌體可能通過運載病原體和介導生物信息分子的傳遞，如通過與TLRs作用調(diào)節(jié)固有免疫應答；在適應性免疫應答中，可能通過介導抗原提呈，如激活DCs參與適應性免疫應答。

2 外泌體通過TLR調(diào)控固有免疫應答

Toll 樣受體在識別病原體過程中包括兩種信號轉(zhuǎn)導方式：髓樣分化因子88（medullary differentia?tion factor，MyD88）依賴型和 MyD88 非依賴型，即 β干擾素Toll/IL-1 受體（TIR）結(jié)構域銜接蛋白依賴型（TIR-domain-containing adaptor inducing interferonβ，TRIF），在發(fā)現(xiàn)的13種TLRs中，除了TLR3其他均依賴MyD88 途徑，最終導致信號級聯(lián)反應并激活NF-κB，誘導炎癥因子、趨化因子和Ⅰ型干擾素等細胞因子的分泌［37］。到目前為止，哺乳動物中發(fā)現(xiàn)的TLRs 有13 種，人類和大鼠、小鼠共有的為TLR1-9，人類和大鼠共有的為TLR10，TLR11為小鼠特有，其中與外泌體研究較多的有TLR2、TLR3、TLR4 和TLR7［38-41］。

不同組織細胞來源的外泌體發(fā)揮的功能有區(qū)別，腫瘤來源有利于腫瘤生長微環(huán)境的形成，免疫細胞來源能協(xié)助免疫應答，細菌病毒來源能激發(fā)機體更廣泛的抗炎反應。另外，外泌體與TLRs的作用形式多樣：包括作為載體運輸病原體成分及其中間產(chǎn)物，影響腫瘤轉(zhuǎn)移、免疫逃逸，參與巨噬細胞免疫調(diào)節(jié)，還通過外泌體內(nèi)含蛋白和非編碼RNA 參與固有免疫應答以及發(fā)揮免疫監(jiān)視、免疫調(diào)節(jié)功能。因此，根據(jù)外泌體來源的廣泛性和與TLRs作用形式的多樣性，不僅能夠擴大固有免疫細胞的識別范圍，還可能增強固有免疫應答的抗炎、抗損傷和抗腫瘤效應。

2.1 外泌體通過TLR2 調(diào)控固有免疫應答 TLR2主要識別革蘭氏陽性菌細胞壁的肽聚糖，也可識別脂多糖、脂蛋白等。外泌體通過運載細菌病毒成分及其中間產(chǎn)物至TLR2，擴大TLR2 對病原體的識別范圍，促進炎癥反應和免疫識別。細菌表面存在的活性物質(zhì)如表面活性小肽，是細菌外泌體包裹、運輸并釋放脂蛋白的關鍵物質(zhì)［42］。研究發(fā)現(xiàn)，當巨噬細胞被分歧桿菌感染后，其釋放的外泌體同樣包含分枝桿菌分子脂多糖和脂蛋白，因此能夠激活TLR2，影響未感染的巨噬細胞誘導細胞因子的表達［43］；從感染分歧桿菌巨噬細胞中分離出的外泌體能夠刺激靜息巨噬細胞的促炎反應，這種炎癥反應依賴 TLR2/TLR4/MyD88 信號通路［44］。含肽聚糖的基底外側(cè)外泌體提取物能夠誘導巨噬細胞活化，細菌肽聚糖可通過TLR2介導的吞噬細胞-外泌體途徑被腸腔吸收，被吸收的肽聚糖及其衍生物可促進腸道免疫穩(wěn)態(tài)，而腸道作為機體重要的免疫器官，此過程有利于發(fā)揮腸道的免疫功能［45］。研究發(fā)現(xiàn)登革熱病毒經(jīng)C 型凝集素受體-CLEC2 激活血小板釋放外泌體，其誘導的外泌體進一步激活巨噬細胞和中性粒細胞上的C 型凝集素受體-CLEC5A 和TLR2，從而促進中性粒細胞胞外陷阱的形成和促炎細胞因子的釋放［46］。

外泌體與TLR2 的作用還通過表達熱休克蛋白（heat shock proteins，HSPs）影響腫瘤血管的生成，促進腫瘤轉(zhuǎn)移并介導腫瘤免疫逃逸。HSPs 是一種應激保護性蛋白，受應激源尤其是高溫環(huán)境誘導產(chǎn)生，細菌和哺乳動物均廣泛表達，HSPs 是如何誘導和發(fā)揮調(diào)節(jié)作用其機制尚不清楚，只有一些推測，HPSs/TLR2/NF-κB 可能成為調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境和免疫逃逸的關鍵信號軸［47］。在DCs 中，外泌體表面HSP72 和 HSP105 是 DCs 的強力激活劑，并以 TLR2和 TLR4 依賴性方式刺激 DCs 分泌 IL-6，IL-6 進一步促進腫瘤發(fā)生［48］。髓系抑制性細胞（myeloidderived suppressor cell，MDSC）是一種抑制機體免疫應答并介導腫瘤免疫逃逸的細胞群，HSP70 能夠激活TLR2/IL-6/STAT3 信號軸從而激活MDSC，增強免疫抑制，降低MDSC 的活性可以提高腫瘤免疫療法的效果［49-50］。因此，一方面外泌體通過其運載病原體的功能，擴大了TLR2 對病原體的識別范圍，促進炎癥反應；另一方面外泌體攜帶的HSPs通過刺激DCs等免疫相關細胞，促進了腫瘤的生成，可為腫瘤治療提供新思路。

2.2 外泌體通過TLR3 調(diào)控固有免疫應答 TLR3信號通路激活依賴于TRIF（IFN-β），誘導炎癥細胞因子和Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生。一方面，TRIF 的N 端域與TRAF6 相互作用并激活NF-κB；另一方面，TRIF的C端域與RIP1相互作用并激活TAK1。TLR3能夠特異性識別病毒復制的中間產(chǎn)物雙鏈RNA（doublestranded RNA，ds-RNA），研究發(fā)現(xiàn)大部分病毒的ds-RNA 通過EVs 進行釋放，阻斷EVs 的釋放將導致細胞內(nèi)ds-RNA 水平升高，從而增加了細胞內(nèi)TLR3 的活化［51］。

外泌體與TLR3 的作用主要包括激活TLR3 信號通路，促進腫瘤轉(zhuǎn)移前生態(tài)位的形成以及參與固有免疫應答炎癥反應。研究發(fā)現(xiàn)損傷的肝細胞分泌的外泌體通過介導肝星狀細胞TLR3 的激活，增強γδT 細胞產(chǎn)生IL-17A、IL-1β 和IL-23，從而加劇肝纖維化，敲除TLR3 后此表型消失且肝纖維化癥狀減輕；含線粒體雙鏈RNA的外泌體可以激活Kupffer細胞中的TLR3，誘導IL-17 的表達，加重組織損傷［52-53］。另一方面，除了外泌體對 TLR3 的激活，TLR3 信號也能影響外泌體中miRNA 的水平。KOUWAKI 等［54］研究發(fā)現(xiàn)被乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染的肝細胞釋放的EVs 含有比靜息細胞更高水平的miR-21，并調(diào)節(jié)IL-12 的表達，在后續(xù)的研究中又證明了HBV 刺激巨噬細胞分泌的EVs 含有高水平miR-21，其機制與TLR3 的激活相關，其具體機制為：TLR3 的銜接蛋白TICAM-1 的異位表達能夠增加外泌體中miR-21的水平，但不增加細胞內(nèi)miR-21的水平，表明TICAM-1增強了外泌體對miR-21 的分選，通過TLR3/TICAM-1 調(diào)節(jié)外泌體中miR-21的水平［55］。

轉(zhuǎn)移前生態(tài)位的形成是腫瘤轉(zhuǎn)移的關鍵，原發(fā)性腫瘤促進產(chǎn)生支持腫瘤轉(zhuǎn)移的微環(huán)境，即為轉(zhuǎn)移前生態(tài)位［56］。骨髓來源細胞（bone marrow-derived cells，BMDCs）被原發(fā)性腫瘤源性可溶性因子招募至不同的器官，形成的轉(zhuǎn)移前生態(tài)位成為腫瘤轉(zhuǎn)移的肥沃土壤［57］。曹雪濤院士團隊發(fā)現(xiàn)了肺上皮細胞感知腫瘤衍生的信號和觸發(fā)BMDCs募集，以形成轉(zhuǎn)移前的生態(tài)位，即腫瘤促轉(zhuǎn)移“龕”結(jié)構并誘導癌癥肺轉(zhuǎn)移的機制，即原發(fā)腫瘤產(chǎn)生的外泌體RNA，主要為小核內(nèi)RNA（snRNA），能夠激活肺上皮細胞中TLR3，從而誘導肺中趨化因子分泌以及中性粒細胞的募集，揭示了腫瘤外泌體RNA/TLR3 活化轉(zhuǎn)移路徑，為腫瘤肺轉(zhuǎn)移提供了新視角［58］。

另外，一方面巨噬細胞分泌攜帶miRNA 的外泌體能夠參與固有免疫應答炎癥反應［59-60］，從TLR3 激活的巨噬細胞培養(yǎng)上清分離的外泌體可以有效抑制Huh7 細胞丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）的復制，進一步分析表明，TLR3 活化的巨噬細胞釋放含有抗HCV的miRNA-29的外泌體，抑制miRNA29可恢復HCV 的復制，提示了肝臟免疫丙肝病毒感染的新機制［61］。另一方面外泌體作為TLR3 的運輸載體，參與了活動期類風濕關節(jié)炎的病理炎癥反應，TSUNO 等［62］研究發(fā)現(xiàn)與健康獻血者相比，在活動期類風濕關節(jié)炎患者的血清外泌體中，檢測到了豐富的TLR3 片段，反映了活動期類風濕關節(jié)炎外泌體-TLR3介導的炎癥反應機制。因此，外泌體通過運載病原體相關成分、功能性miRNA 和TLR3 建立起與固有免疫應答的聯(lián)系，在增強機體抗炎抗病毒能力的同時，也可能產(chǎn)生過度的炎癥反應，并且促進腫瘤轉(zhuǎn)移，這些為進一步研究應用外泌體治療疾病提供了新見解。

2.3 外泌體與TLR4 TLR4 是最早發(fā)現(xiàn)的Toll 樣受體家族成員，可識別外源性病原體和內(nèi)源性物質(zhì)及降解物，主要包括革蘭氏陰性菌脂多糖（LPS）、宿主壞死細胞釋放的HSPs 及部分多糖等。外泌體與TLR4 的作用主要包括：運載病原體或miRNA，促進M1 型和M2 型巨噬細胞的極化，運載疾病分子診斷標志物miRNA 和表達熱休克蛋白（HSPs）影響腫瘤發(fā)生和炎癥反應，通過這些作用進而參與機體固有免疫應答。

體內(nèi)巨噬細胞分為M1 型和M2 型，M1 型巨噬細胞具有殺傷功能，M2型能夠調(diào)節(jié)炎癥反應并促進創(chuàng)傷愈合，外泌體能夠影響M1 和M2 之間的極化，促進抗腫瘤或細胞損傷愈合。在中藥領域，發(fā)現(xiàn)一種新型的免疫調(diào)節(jié)劑-植物EVs 樣人參衍生納米顆粒，能夠通過TLR4/MyD88 信號促進腫瘤M2 巨噬細胞向M1 極化，提高抗腫瘤反應［63］。間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）來源的外泌體攜帶miR-182，能夠誘導M1 巨噬細胞向M2 型極化，通過下游靶標TLR4 減輕心肌缺血/再灌注損傷，這可能是 MSCs 移植的新機制［64］。另外，MSCs 可釋放大量外泌體進行細胞間通訊，維持組織修復所需的動態(tài)和穩(wěn)態(tài)微環(huán)境，TI 等［65］研究發(fā)現(xiàn) LPS 預處理的MSCs 來源的外泌體對慢性炎癥和創(chuàng)傷具有修復作用，可更好地調(diào)節(jié)巨噬細胞的平衡能力，促進M2 型巨噬細胞的活化，此過程與外泌體內(nèi)let-7b 相關，并通過TLR4/NF-κB/STAT3/AKT 信號通路調(diào)節(jié)炎癥中極化的巨噬細胞，提示MSCs 來源外泌體是一種新的修復炎癥創(chuàng)傷的免疫療法。

外泌體miRNAs 逐漸被認為是診斷多種疾病的潛在標志物，參與創(chuàng)傷愈合、免疫炎癥反應和腫瘤的發(fā)生發(fā)展［66-71］。腸道不僅是人體的消化器官，更是重要的免疫器官，含有多種固有免疫細胞，如巨噬細胞、NK 細胞，參與腸道固有免疫反應，研究發(fā)現(xiàn)在LPS 誘導的腸道炎癥中，豬乳內(nèi)含外泌體能夠通過抑制TLR4/NF-κB 信號通路的激活進而降低腸道炎癥損傷，并且通過外泌體內(nèi)miR-4334、miR-219和miR-338 的共轉(zhuǎn)染降低了LPS 誘導的腸上皮細胞凋亡，改善新生兒腸道和免疫系統(tǒng)發(fā)育［72］。巨噬細胞來源外泌體攜帶miRNA-148a 通過抑制TLR4/NF-κB/NLRP3 信號通路，緩解心肌缺血/再灌注損傷［73］。另外，DCs在免疫應答中起重要作用，胰腺癌衍生的外泌體能夠通過miR-203 下調(diào)DCs 中的TLR4 和下游細胞因子 TNF-α 和 IL-12，進而影響DCs 在免疫應答中的功能，提示miRNA 可以通過腫瘤來源外泌體轉(zhuǎn)移至免疫細胞影響免疫應答［74］。生物信息學研究表明，MSCs 外泌體包含大量靶向TLR4/NF-κB 信號通路的 miRNA［75］，其中類風濕關節(jié)炎患者血清外泌體中miR-6089是TLR4的直接靶點，miR-6089 可抑制LPS 誘導的巨噬細胞樣THP-1細胞的增殖和活化，并且能夠通過調(diào)控IL-6、IL-29和 TNF-α 的產(chǎn)生影響 TLR4 信號，調(diào)控 LPS/TLR4 介導的炎癥反應［76］。此外，miR-548a-3p有可能成為影響類風濕關節(jié)炎活性的關鍵因素，可通過TLR4/NF-κB軸調(diào)節(jié)巨噬細胞樣細胞的活性［77］。

外泌體表面熱休克蛋白（HSPs）在腫瘤的發(fā)生發(fā)展和TLR4 受體介導的炎癥反應中扮演重要角色，完整的HSPs能以外泌體包裹的形式與靶細胞受體發(fā)生反應，通過激活DCs 和巨噬細胞上依賴于TLR4的炎癥信號通路參與固有免疫應答，并且能發(fā)揮免疫監(jiān)視作用以及作為腫瘤免疫逃逸的生物標志物［78-80］。除了前文表述的外泌體HPSs/TLR2/NF-κB信號軸是腫瘤發(fā)生的關鍵軸，HPSs/TLR4信號軸亦與腫瘤發(fā)生密切相關。腫瘤來源外泌體HSP72和HSP105 通過刺激DCs 上的TLR4 影響腫瘤發(fā)生，誘導IL-6 的促腫瘤侵襲作用［65］。黑色素瘤細胞來源的EVs能夠?qū)⒄５墓撬杓毎D(zhuǎn)化為髓源性抑制細胞（myeloid-derived suppressor cell，MDSC），MDSC具有抑制抗腫瘤免疫反應的功能，研究發(fā)現(xiàn)MDSC通過HSP86/TLR4 信號通路促進程序性死亡配體1（PD-L1）的表達，進而促進腫瘤免疫逃逸［81］?？傊?，外泌體與TLR4 的作用主要依賴于外泌體內(nèi)含物或表面蛋白，如miRNA 和HSPs，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和創(chuàng)傷性炎癥反應；miRNA 還能影響巨噬細胞的類型，且與部分TLR2/TLR3 存在共性，如促炎和促進腫瘤生長。

2.4 外泌體通過TLR7 調(diào)控固有免疫應答 Toll 樣受體家族中，TLR7、TLR8 和TLR9 保持高度的同源性，在細胞內(nèi)涵體中發(fā)揮功能，吞噬和包膜溶解后與其配體結(jié)合，識別微生物的核酸。外泌體可通過TLR7影響固有免疫應答，從而在自身免疫和腫瘤免疫應答中發(fā)揮作用。

病原體入侵機體造成的過度免疫應答是自身免疫性疾病的主要原因，因此抑制過度免疫應答可降低組織損傷。TLR7 作為固有免疫應答的主要受體，能夠被分選進外泌體，從而減少細胞內(nèi)TLR7 信號轉(zhuǎn)導的固有免疫應答，這可能是抑制機體過度免疫、防止免疫炎癥損傷的另一種機制。MAJER 等［82］報道了TLR 的轉(zhuǎn)運蛋白UNC93B1 能特異性限制TLR7的信號傳遞，但不限制TLR9的信號傳遞，并在小鼠中阻止TLR7 依賴的自身免疫，在外泌體中均能檢測到 UNC93B1 和 TLR7，UNC93B1 突變能夠阻礙syntenin-1 蛋白介導的外泌體的產(chǎn)生，提示UNC93B1 通過募集 syntenin-1 蛋白將 TLR7 分選進外泌體，從而減弱細胞內(nèi)TLR7 信號介導的固有免疫應答，降低過度免疫損傷。SALVI 等［83］發(fā)現(xiàn)外泌體傳遞的miRNAs 作為TLR7 的新型內(nèi)源性配體，能夠誘導漿細胞樣樹突細胞的異常激活，從而產(chǎn)生大量Ⅰ型干擾素，Ⅰ型干擾素的過度產(chǎn)生是許多自身免疫性疾病的標志和主要致病因素，因此miRNAs可能成為自身免疫性疾病中新的致病介質(zhì)。

另一方面，外泌體內(nèi)非編碼RNA 促進腫瘤細胞生長和炎癥反應，是目前報道比較多的外泌體-腫瘤-炎癥相關研究［84］。CROCE 等［85］發(fā)現(xiàn)血清來源的外泌體，攜帶非編碼miR-25-3p 和miR-92a-3p，并依賴TLR7/8 信號轉(zhuǎn)導刺激腫瘤相關巨噬細胞IL-6 的分泌，從而促進腫瘤細胞增殖并重塑腫瘤微環(huán)境。另外，小膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)單核吞噬細胞家族成員之一，與巨噬細胞功能相似，參與腦內(nèi)固有免疫反應，小膠質(zhì)細胞同樣表達固有免疫受體，包括TLR7，主要識別未分化的或壞死、損傷的細胞釋放的內(nèi)源性配體。LIU 等［86］在小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)的外泌體中，發(fā)現(xiàn)了內(nèi)源性配體miRNAs Let7c和miR21，能夠被TLR7 識別，從而發(fā)揮神經(jīng)固有免疫調(diào)節(jié)。除了miRNAs，腫瘤來源外泌體中的長鏈非編碼RNAs（lncRNA）同樣參與調(diào)節(jié)固有免疫應答，HU等［87］發(fā)現(xiàn)暴露于嗎啡的星形膠質(zhì)細胞產(chǎn)生的包括外泌體在內(nèi)的EVs，可被小膠質(zhì)細胞內(nèi)體吸收，進而激活TLR7，隨后上調(diào)lincRNA-Cox2 的表達，最終導致小膠質(zhì)細胞吞噬功能受損，影響中樞固有免疫。這些為基于外泌體非編碼RNA 治療小膠質(zhì)細胞功能受損類疾病提供了重要價值。

此外，PD-1 介導的腫瘤免疫逃逸是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素，PD-1 是一種免疫抑制分子，其配體為PD-L1，高表達于腫瘤細胞。PD-1 與PD-L1 相結(jié)合能夠降低免疫系統(tǒng)對腫瘤的識別和T細胞的抗腫瘤效應。HADERK 等［88］研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤來源外泌體可通過促進PD-L1 的表達介導腫瘤免疫逃逸，該實驗發(fā)現(xiàn)慢性淋巴細胞白血病患者血漿外泌體內(nèi)的非編碼Y RNA-hY4 呈明顯的富集狀態(tài)，且hY4 轉(zhuǎn)入型單核細胞能導致腫瘤相關細胞因子如CCL2、CCL4、IL-6 和 PD-L1 的表達增加，但此過程在 TLR7缺陷型單核細胞中不存在，表明外泌體內(nèi)hY4 可以通過影響TLR7 信號通路促進PD-L1 介導的腫瘤免疫逃逸。

3 展望

外泌體通過TLRs 與固有免疫應答建立了一種細胞通信的新形式，但是目前主要存在兩個技術問題限制了外泌體與TLRs 以及其他關于固有免疫方面的研究，一是外泌體的分離、提取和富集技術的提高；二是如何更有效地區(qū)分外泌體與其他EVs，特別是與微囊泡區(qū)別鑒定。在最近的研究中，YANG等［89］分析了外泌體分離研究策略，并提供了當前外泌體分離技術，為更高效地分離和后續(xù)研究外泌體提供了技術支持。

近年來研究發(fā)現(xiàn)TLRs 的配體PAMP 能被分泌進外泌體中，進而激活TLRs 通路，引發(fā)了外泌體在固有免疫應答中可能發(fā)揮作用的猜測，然而，外泌體介導的攝取是否是一種普遍的細胞間通訊機制尚未明確，涉及的分子機制也尚不清楚。研究發(fā)現(xiàn)當TLR9 的激活劑CpG 寡脫氧核苷酸（ODN）刺激巨噬細胞時，巨噬細胞分泌的EVs 能攝取ODN 并轉(zhuǎn)運到幼稚巨噬細胞，并誘導趨化因子TNF-α 的釋放，并且EVs 內(nèi)的Cdc42 能增強這種攝取能力，這種攝取方式增加了外泌體與TLRs間通訊的新途徑，但是EVs內(nèi)攝取物質(zhì)的核酸拓撲結(jié)構之類的問題仍未得到解決，ODN 如何以及何時從EVs 釋放并與TLR9相互作用，仍有待研究［90］。此外，負責外泌體釋放和攝取的細胞器的性質(zhì)以及最終目的地、運輸方式不甚清晰，一些TLRs 的激活物、TLRs 片段以及其他生物信息分子是如何被選擇性地裝載到外泌體中，釋放并與受體細胞相結(jié)合，進而參與影響固有免疫應答，這些問題仍需要進一步的探索。因此，需要依靠不斷發(fā)展的外泌體生物技術，探究其在免疫相關疾病上的發(fā)生機制，為免疫相關疾病的治療提供新的分子機制和生物基礎。