ILT4的免疫調(diào)節(jié)功能及其在腫瘤和免疫性疾病中的作用①

林艷清 文瑞婷 楊志剛（廣東醫(yī)科大學(xué)附屬湛江中心醫(yī)院血液風(fēng)濕內(nèi)科，湛江524045）

免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄子（immunoglobulin-like tran?script，ILT），也稱白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體亞家族B（leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B，LILRB）、白細(xì)胞分化抗原85（cluster of differenti?ation 85，CD85），該家族包括抑制性亞型（ILT2、ILT3、ILT4、ILT5）、激活亞型（ILT1、ILT7、ILT8）和可溶性亞型（ILT6），在人體細(xì)胞中廣泛表達(dá)，能夠識(shí)別不同配體并發(fā)揮免疫抑制或免疫激活作用［1-2］。ILT4，也稱為L(zhǎng)ILRB2，淋巴細(xì)胞免疫球蛋白樣受體2（lymphocyte immunoglobulin-like receptor，LIR2），單核/巨噬細(xì)胞免疫球蛋白樣受體10（monocyte/mac?rophage immunoglobulin-like receptor 10，MIR-10）或CD85d，屬于ILT超家族中的抑制性受體，主要表達(dá)于髓系細(xì)胞，包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DC）和粒細(xì)胞［1］。ILT4的配體包括HLAⅠ類分子、MHC樣分子（CD1d）、一些補(bǔ)體成分（C4d、C3d、C4b、C3b和iC3b）、血管生成素樣蛋白（angiopoietin-like protein，ANGPTL）、β-淀粉樣蛋白、髓鞘衍生抑制劑以及最新發(fā)現(xiàn)的信號(hào)素4A（sema?phorin 4A，Sema4A）蛋白，ILT4與其配體結(jié)合通過ITIM傳導(dǎo)抑制信號(hào)，發(fā)揮免疫抑制作用［1，3-7］。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)ILT4在免疫調(diào)節(jié)、腫瘤免疫、移植免疫以及自身免疫性疾病中均發(fā)揮重要作用［5，8-10］。進(jìn)一步了解ILT4的免疫調(diào)節(jié)功能及其在疾病中的作用有望為以ILT4為靶點(diǎn)的免疫治療提供新思路。因此，本文就ILT4的結(jié)構(gòu)與配體、免疫調(diào)節(jié)功能以及在腫瘤、自身免疫性疾病、移植免疫中作用的最新研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 ILT4的結(jié)構(gòu)與配體

ILT4是一種典型的Ⅰ型跨膜蛋白，具有4個(gè)胞外串聯(lián)Ig樣結(jié)構(gòu)域，1個(gè)由23個(gè)氨基酸組成的跨膜區(qū)和1個(gè)含有3個(gè)ITIM的細(xì)胞質(zhì)尾部［11］。ILT4主要表達(dá)于固有免疫細(xì)胞，如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、DC和粒細(xì)胞，除此之外還表達(dá)于造血干細(xì)胞（hemopoietic stem cells，HSCs）、破骨細(xì)胞前體細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)元，通過與其配體結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)作用［1］。ILT4有多種類型的配體，近年來(lái)備受關(guān)注的配體分子有HLAⅠ類分子人白細(xì)胞抗原-G（human leukocyte antigen-G，HLA-G）、ANGPTL、補(bǔ)體成分C4d和新發(fā)現(xiàn)的Sema4A，ILT4與其配體結(jié)合通過免疫細(xì)胞內(nèi)ITIM轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)，導(dǎo)致免疫細(xì)胞活化的負(fù)調(diào)節(jié)，從而發(fā)揮免疫抑制作用［1］。

HLA-G是一類具有較強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)活性的非經(jīng)典的MHCⅠ類分子，是ILT4的重要配體，在大多數(shù)健康組織中不表達(dá)。然而，研究證實(shí)在移植后的同種異體移植物中以及在自身免疫性疾病、腫瘤、炎癥或病毒感染等多種病理?xiàng)l件下均可檢測(cè)到HLA-G表達(dá)［12］。HLA-G與其受體結(jié)合能夠通過阻斷免疫效應(yīng)細(xì)胞的功能直接發(fā)揮免疫抑制作用或者通過誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cells，Tregs）、髓源性抑制細(xì)胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSCs）的產(chǎn)生間接發(fā)揮免疫抑制功能［12］。近年來(lái)研究表明，HLA-G與其受體ILT4相互作用能夠引起抗腫瘤免疫應(yīng)答受損導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸，并且HLA-G高表達(dá)與疾病進(jìn)展、臨床分期以及不良預(yù)后相關(guān)。除此之外，研究還證實(shí)HLA-G能夠控制自身免疫性疾病以及炎癥性疾病的發(fā)生與進(jìn)展，并且與疾病療效反應(yīng)相關(guān)［13］。但是，目前關(guān)于HLA-G與其受體ILT4在自身免疫性疾病中作用的研究仍然較為匱乏，仍需要進(jìn)一步研究明確其作用及機(jī)制。

ANGPTL是一類分泌型糖蛋白，在脂質(zhì)代謝、血管生成和炎癥過程中發(fā)揮重要作用。最近研究發(fā)現(xiàn)LILRB2（ILT4）及其小鼠直系同源配對(duì)的Ig樣受體B（paired immunoglobulin receptor B，PIRB）是ANGPTL的 受 體，LILRB2和PIRB分 別 表 達(dá) 于 人HSCs和小鼠HSCs上，并且ANGPTL與其受體LIL?RB2和PIRB結(jié)合能夠促進(jìn)HSC的體外擴(kuò)增和白血病的進(jìn)展［8］。隨后研究證實(shí)，ILT4與其配體ANG?PTL2相互作用還能夠促進(jìn)肺癌細(xì)胞的自我更新并且抑制其分化［8］。以上研究表明ILT4/ANGPTL2信號(hào)對(duì)正常干細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞的干性維持和遷移能力具有重要影響，抑制ILT4/ANGPTL2信號(hào)通路有望成為腫瘤免疫治療的新途徑。

補(bǔ)體片段C4d是補(bǔ)體經(jīng)典活化途徑中C4裂解后的產(chǎn)物，是調(diào)控體液免疫應(yīng)答的重要分子，可作為自身免疫性疾病或抗體介導(dǎo)的移植排斥反應(yīng)疾病活動(dòng)的標(biāo)志物［14］。研究發(fā)現(xiàn)ILT4可作為可溶性補(bǔ)體片段C4d受體，細(xì)胞表面的ILT4與可溶性單體C4d相互作用能夠引起C4d的內(nèi)吞作用［4］。此外，C4d在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中也發(fā)揮重要作用，研究認(rèn)為補(bǔ)體片段C4d可作為腫瘤早期診斷與預(yù)后判斷的生物學(xué)指標(biāo)［14］。那么，補(bǔ)體片段C4d在腫瘤中的作用是否與其細(xì)胞受體ILT4有關(guān)目前仍不清楚，值得進(jìn)一步研究證實(shí)。

Sema4A屬于Sema家族的成員之一，主要表達(dá)在DC、巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞。最新研究發(fā)現(xiàn)表達(dá)于DC上的Sema4A是CD4+T細(xì)胞上ILT4的重要配體分子，Sema4A與其受體ILT-4結(jié)合可以促進(jìn)Th2細(xì)胞分化以及IL-4、IL-5和IL-13的產(chǎn)生，抑制Th1細(xì)胞分化和IFN-γ的產(chǎn)生，從而發(fā)揮了強(qiáng)大的免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用［7］。這提示ILT-4/Sema4A軸對(duì)免疫系統(tǒng)的負(fù)調(diào)節(jié)作用有可能參與了機(jī)體的病理生理過程。Sema4A與其受體ILT-4在腫瘤或免疫性疾病中所發(fā)揮的作用是未來(lái)非常值得研究的方向，并且有望為以ILT-4/Sema4A軸為靶點(diǎn)的治療提供科學(xué)理論依據(jù)。

2 ILT4的免疫調(diào)節(jié)功能

2.1 ILT4與DC DC的成熟和激活在適應(yīng)性免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。ILT4與HLA-G相互作用能夠抑制DC成熟，降低其抗原遞呈能力，從而影響了T細(xì)胞免疫應(yīng)答的啟動(dòng)［15-16］。初始T淋巴細(xì)胞活化需要抗原提呈細(xì)胞（antigen presenting cell，APC）提供信號(hào)，而高表達(dá)ILT4的DC可抑制T淋巴細(xì)胞活化所需的相應(yīng)信號(hào)，進(jìn)而抑制T淋巴細(xì)胞的增殖與活化，誘導(dǎo)Th細(xì)胞無(wú)反應(yīng)性［15］。DC-10是近來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種耐受型DC細(xì)胞亞群，分泌大量IL-10，同時(shí)表達(dá)HLA-G分子及其受體ILT4，DC-10能夠通過IL-10及HLA-G/ILT4信號(hào)傳導(dǎo)過程，誘導(dǎo)產(chǎn)生1型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（type 1 regulatory T cell，Tr1），抑制免疫反應(yīng)，在自身免疫性疾病或?qū)φT導(dǎo)和維持移植耐受具有重要作用［15-17］。

2.2 ILT4與效應(yīng)T細(xì)胞已報(bào)道表達(dá)于DC上的ILT4與HLA-G結(jié)合，能夠抑制DC成熟，從而促進(jìn)無(wú)能性CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生［15］。隨后研究表明CD14+DC表達(dá)的ILT4能夠抑制初始CD8+T向細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）分化，而促進(jìn)Th2細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-13，同時(shí)研究表明外源性添加ILT4蛋白能夠抑制CTL啟動(dòng)，而阻斷ILT4可以促進(jìn)CTL產(chǎn)生［18］。然而另外研究發(fā)現(xiàn)，在體外實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過Poly I∶C刺激后，ILT4+BDCA-3+DC細(xì)胞產(chǎn)生IL-12β、TNF-α及趨化因子CCL3，趨化因子CCL3已被證明可促進(jìn)CD8+T細(xì)胞的分化、遷移，IL-12β與Th1或Th17的生成有關(guān)［19］。因此，ILT4對(duì)效應(yīng)T細(xì)胞的影響仍存在爭(zhēng)議，需要進(jìn)一步研究證實(shí)。2.3 ILT4與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞ILT4作為一種主要在DC中表達(dá)的免疫抑制受體，參與誘導(dǎo)不同Tregs的產(chǎn)生，包括CD4+CD25+Treg，CD8+CD28-抑制T細(xì)胞和Tr1細(xì)胞［15，20］。在腎移植受者中，用雷帕霉素治療后DC上ILT4的表達(dá)增加，且與CD4+CD25+Treg細(xì)胞和CD8+CD28-抑制T細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)，這表明mTOR抑制劑能夠促進(jìn)免疫抑制受體ILT4以及免疫抑制細(xì)胞Tregs和MDSCs的產(chǎn)生，然而ILT4、Tregs以及MDSCs三者之間相互作用的機(jī)制尚不清楚［20］。Tr1是初始CD4+T細(xì)胞分化而來(lái)的誘導(dǎo)型Tregs，其特點(diǎn)是能生成具有免疫抑制功能的IL-10，最近的一項(xiàng)研究表明，DC-10上的ILT4通過ILT4/HLA-G依賴方式誘導(dǎo)Tr1分化［15］。體外實(shí)驗(yàn)證明，阻斷ILT4可減弱或消除對(duì)Tr1的誘導(dǎo)作用，這表明ILT4參與了誘導(dǎo)Tr1產(chǎn)生的機(jī)制［15，21］。

2.4 ILT4與髓源性抑制細(xì)胞MDSCs是骨髓來(lái)源的一群異質(zhì)性細(xì)胞，具有顯著抑制免疫細(xì)胞應(yīng)答的能力。最近的研究表明ILT4在孕婦的粒細(xì)胞樣的MDSCs中表達(dá)上調(diào)，ILT4與HLA-G的結(jié)合可顯著增加MDSC的比例和抑制活性，而阻斷ILT4可消除以上作用，表明ILT4對(duì)于MDSC介導(dǎo)的免疫耐受至關(guān)重要［22］。另外研究發(fā)現(xiàn)，阻斷ILT4可以減少Tregs和MDSCs產(chǎn)生，增強(qiáng)抗腫瘤反應(yīng)［23］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，PIRB信號(hào)對(duì)于MDSC介導(dǎo)的免疫抑制至關(guān)重要，抑制PIRB信號(hào)通路可促進(jìn)MDSC向M1巨噬細(xì)胞分化，從而起到殺傷腫瘤作用［24］?？偟膩?lái)說，ILT4介導(dǎo)MDSC的成熟和功能的調(diào)節(jié)，促進(jìn)了腫瘤免疫逃逸。

3 ILT4與疾病

3.1 ILT4與腫瘤

3.1.1 ILT4與血液腫瘤研究發(fā)現(xiàn)ILT4影響腫瘤的發(fā)展并調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的功能［25］。在血液腫瘤中，ILT4和PIRB可能參與了白血病的發(fā)生與發(fā)展［5，26-27］。早期已有研究發(fā)現(xiàn)ILT4在慢性淋巴細(xì)胞白血病患者的B淋巴細(xì)胞上表達(dá)，但在正常人的B淋巴細(xì)胞上不表達(dá)，提示ILT4可能參與B細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化［26］。隨后在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）研究中發(fā)現(xiàn)，急性單核細(xì)胞白血病的腫瘤細(xì)胞中ILT4表達(dá)較高，ILT4 mRNA的水平在急性單核細(xì)胞白血病患者外周血中比在其他亞型AML表達(dá)至少高4倍，并且發(fā)現(xiàn)人類臍帶血HSC上也表達(dá)LILRB2，LILRB2與ANGPTL結(jié)合能夠促進(jìn)HSCs體外擴(kuò)增［5］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，在小鼠AML模型中，ANGPTL與PIRB的結(jié)合能夠激活HSC和腫瘤細(xì)胞中的Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶4（calcium/calmodulin-dependent protein kinase 4，CAMK4），從而導(dǎo)致HSC的重新聚集和白血病的發(fā)展［5，27］。最新進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，CAMKs能夠促進(jìn)AML的發(fā)展，CAMKs的高表達(dá)與患者的總體存活率降低相關(guān)，并且發(fā)現(xiàn)CAMKs活性受PIRB信號(hào)傳導(dǎo)的調(diào)節(jié)，這提示由PIRB信號(hào)調(diào)節(jié)的CAMK激酶活性對(duì)AML的發(fā)生與發(fā)展至關(guān)重要［27］。然而，ILT4在各種血液腫瘤的研究相對(duì)匱乏，其在血液腫瘤中扮演的角色仍需要大量的研究證實(shí)。

3.1.2 ILT4與實(shí)體腫瘤研究發(fā)現(xiàn)ILT4在腫瘤細(xì)胞中過度表達(dá)與腫瘤患者的淋巴浸潤(rùn)、分化程度、腫瘤轉(zhuǎn)移和生存期密切相關(guān)，如胰腺癌、非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、肝癌、結(jié)直腸癌和食管癌［8，28-35］。近年來(lái)關(guān)注較多的是肺癌，研究表明自分泌的ANGPTL2可以與NSCLC腫瘤細(xì)胞上的ILT4結(jié)合，激活下游的SHP2-CAMK1-CREB信號(hào)通路，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，以及抑制腫瘤細(xì)胞凋亡和分化［8］。另一研究發(fā)現(xiàn)ILT4通過細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）信號(hào)通路上調(diào)NSCLC中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移［29］。隨后研究發(fā)現(xiàn)在NSCLC細(xì)胞中，ILT4能夠上調(diào)HLA-G的表達(dá)，HLA-G與ILT4結(jié)合，能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移。更重要的是，自分泌的HLA-G可以反過來(lái)上調(diào)腫瘤細(xì)胞中ILT4的表達(dá)，形成正反饋以促進(jìn)腫瘤進(jìn)展［30］。進(jìn)一步研究表明ILT4與HLA-G結(jié)合促進(jìn)NSCLC的遷移和侵襲是由于介導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞中ERK信號(hào)通路的激活和磷酸化增強(qiáng)［30］。在結(jié)直腸癌研究中，2019年CAI等［34］研究表明人類結(jié)直腸癌組織中ILT4和HLA-G共表達(dá)，并且與不良預(yù)后因素有關(guān)。在體外實(shí)驗(yàn)中，HLA-G融合蛋白處理也以劑量依賴性方式增加了ILT4表達(dá)，從而激活蛋白質(zhì)絲氨酸蘇氨酸激酶（protein-serinethreonine kinase，AKT）和ERK信號(hào)傳導(dǎo)，并促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖，遷移和侵襲。另外，阻斷ILT4能夠抑制由HLA-G誘導(dǎo)的AKT和ERK活化以及結(jié)直腸癌細(xì)胞的惡性特征［34］。因此，以上研究提示了ILT4有可能成為腫瘤預(yù)后判斷的生物學(xué)指標(biāo)及治療腫瘤的新靶標(biāo)。

3.2 ILT4與自身免疫性疾病研究發(fā)現(xiàn)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）患者外周血中漿細(xì)胞樣DC和髓樣DC上ILT4的表達(dá)均較健康人顯著降低；且體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在SLE患者中ILT4能夠抑制DC的免疫功能，而在健康人中ILT4對(duì)DC的成熟或免疫功能無(wú)影響［36］。在銀屑病關(guān)節(jié)炎研究中發(fā)現(xiàn)，患者單核細(xì)胞上的ILT4的表達(dá)減低，且與疾病活動(dòng)呈負(fù)相關(guān)，經(jīng)治療后患者單核細(xì)胞上的ILT4顯著增加［37］。最近在免疫性血小板減少癥（immune thrombocytopenia，ITP）患者中發(fā)現(xiàn)CD8+CD28-抑制性T細(xì)胞（suppressor T cells，Ts）數(shù)量和免疫抑制功能降低，進(jìn)而體外研究發(fā)現(xiàn)健康人的Ts細(xì)胞能夠上調(diào)單核細(xì)胞上的ILT4表達(dá)，而ITP患者的Ts細(xì)胞不能上調(diào)單核細(xì)胞上ILT4的表達(dá)，且不能誘導(dǎo)APC耐受，這提示ILT4異常表達(dá)和Ts細(xì)胞免疫抑制功能降低有關(guān)，這可能參與了ITP的發(fā)?。?］。以上結(jié)果表明ILT4在自身免疫疾病的發(fā)病中扮演了重要作用，有望作為疾病活動(dòng)和療效判斷的免疫學(xué)標(biāo)記。

3.3 ILT4與移植免疫早期研究發(fā)現(xiàn)ILT4在非專職性APC內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá)增加，通過提高APC的耐受性，從而抑制了CD4+T細(xì)胞的激活，可以預(yù)防同種異體移植排斥反應(yīng)［38］。在腎移植研究中發(fā)現(xiàn)，與接受麥考酚酸酯和糖皮質(zhì)激素的移植受者相比，接受雷帕霉素治療的受者隨訪至2年時(shí)DC上ILT4表達(dá)上調(diào)，并且伴隨Tregs和CD8+CD28-T細(xì)胞的數(shù)量和血清HLA-G水平增加［20］。在肝移植研究中發(fā)現(xiàn)，由他克莫司轉(zhuǎn)換為西羅莫司（雷帕霉素）治療后，移植受者DC上ILT4表達(dá)以及Tregs的數(shù)量均增加［39］。以上結(jié)果提示ILT4可能是mTOR抑制劑發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的新途徑，并且有望成為治療移植排斥反應(yīng)的新靶點(diǎn)。異基因造血干細(xì)胞移植最常見的并發(fā)癥是移植物抗宿主反應(yīng)（graft-versus-host disease，GVHD），BIEDRON等［10］研究發(fā)現(xiàn)移植后0~Ⅰ級(jí)GVHD患者單核細(xì)胞、NK細(xì)胞上ILT4受體的表達(dá)水平均高于Ⅱ~Ⅳ級(jí)GVHD患者，這提示ILT4表達(dá)與GVHD的強(qiáng)度有關(guān)，有望作為移植后GVHD發(fā)生和嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)指標(biāo)。目前ILT4在移植免疫中的研究較少，其在移植免疫中的作用以及作用機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步研究闡明。

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，ILT4通過與不同配體結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)作用，并且參與調(diào)節(jié)DC、效應(yīng)T細(xì)胞、Tregs以及MDSCs等免疫細(xì)胞的功能。最近研究表明ILT4參與了腫瘤、自身免疫性疾病與移植免疫的發(fā)生、發(fā)展，但是目前ILT4在這些疾病中扮演的作用及其機(jī)制尚不明確。因此，進(jìn)一步研究ILT4的生物學(xué)功能及其在腫瘤、自身免疫性疾病、移植免疫中的作用機(jī)制，有望為以ILT4為靶點(diǎn)的免疫治療提供理論依據(jù)。