亞健康狀態(tài)動(dòng)物模型的構(gòu)建與評(píng)價(jià)研究進(jìn)展

袁 群,毛 欣,王 能,胡海林,曹 淼,何清湖,2*

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué),長(zhǎng)沙 410208;2.湖南醫(yī)藥學(xué)院,湖南 懷化 418000)

“亞健康”這一概念最早由前蘇聯(lián)學(xué)者布赫曼(N.Berhman)提出,是指介于健康與疾病之間的一種低質(zhì)狀態(tài)。 隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、生活水平的提高以及各種壓力的增加,亞健康已經(jīng)成為困惱全球的一個(gè)社會(huì)問(wèn)題[1]。 據(jù)世界衛(wèi)生組織最新一項(xiàng)調(diào)查結(jié)果表明全球75%人處于亞健康狀態(tài),健康人群僅占5%[2]。 其實(shí)早在兩千多年前,《黃帝內(nèi)經(jīng)》一書(shū)中就有提到“圣人不治已病治未病”,雖然中醫(yī)學(xué)中的“未病”不等同亞健康,但是其包括現(xiàn)代醫(yī)學(xué)所提出的“亞健康狀態(tài)”[3],且有大量的研究采用中醫(yī)“治未病”的理論來(lái)指導(dǎo)亞健康的中醫(yī)干預(yù),并取得較好的效果。 隨著對(duì)亞健康研究的深入,由于臨床研究的局限性和倫理學(xué)的限制,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)為亞健康本質(zhì)的研究開(kāi)辟了新方向,但目前對(duì)于亞健康動(dòng)物模型的構(gòu)建尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)或推廣模型。

1 亞健康狀態(tài)動(dòng)物模型構(gòu)建的理論依據(jù)

大量的研究證實(shí)亞健康的發(fā)生發(fā)展與不良的生活習(xí)慣、心理因素刺激、精神緊張、環(huán)境污染、個(gè)性特征和遺傳因素等有關(guān)。 因此,目前亞健康動(dòng)物模型構(gòu)建的理論依據(jù)多建立在其發(fā)生發(fā)展的軀體、心理和環(huán)境等因素上。

中醫(yī)學(xué)對(duì)亞健康的認(rèn)識(shí)也是不斷在完善。 有學(xué)者認(rèn)為亞健康的易感因素主要是外感和內(nèi)傷兩種,其主要病因是臟腑陰陽(yáng)氣血失調(diào)、七情內(nèi)傷、氣機(jī)紊亂,其次是飲食不節(jié)、勞逸損傷所致[4-5]。 但也有學(xué)者對(duì)當(dāng)今亞健康的成因歸納為①與中醫(yī)體質(zhì)密切相關(guān),先天不足與后天過(guò)用;②情志內(nèi)傷、肝失疏泄;③飲食不節(jié)、損傷脾胃④氣虛、氣郁。 總之離不開(kāi)中醫(yī)傳統(tǒng)的“三因?qū)W說(shuō)”[6]。 有研究結(jié)果表明亞健康患者體質(zhì)以氣虛質(zhì)、陽(yáng)虛質(zhì)、濕熱質(zhì)多見(jiàn)[7]。疲勞、失眠、記憶力減退和情緒問(wèn)題是亞健康主癥,因此有研究者認(rèn)為亞健康狀態(tài)與心、肝兩臟關(guān)系最為密切。 “心主神明,主血脈”,各種因素所致心血耗傷均可使得血液不能充盈于心,心神失養(yǎng),從而出現(xiàn)記憶力減退、失眠、心悸等不良癥狀;而“肝主筋”,為“罷極之本”,說(shuō)明疲勞的產(chǎn)生是以肝為核心;另“肝主藏血”,而睡眠的質(zhì)量取決于陰血的盈虧,因此失眠也與肝相關(guān);“肝主疏泄”,具備調(diào)暢情志的作用,各種精神情志癥狀也與肝密切相關(guān)。

以上述中醫(yī)理論為依據(jù),目前中醫(yī)多從體質(zhì)、五臟(尤以心、肝)入手進(jìn)行亞健康動(dòng)物模型的研制。

2 亞健康狀態(tài)動(dòng)物模型類型

目前,亞健康狀態(tài)的主癥變化多樣,且其分類方法也未統(tǒng)一,因此亞健康的動(dòng)物模型也多種多樣。 有根據(jù)常見(jiàn)主癥模擬軀體疲勞、心理焦慮、抑郁來(lái)建立軀體亞健康、心理亞健康動(dòng)物模型,也有根據(jù)應(yīng)激源的來(lái)源建立心理性、疲勞性及睡眠性亞健康動(dòng)物模型,但以疲勞和心理亞健康動(dòng)物模型最為常見(jiàn)。 在中醫(yī)學(xué)中則多見(jiàn)根據(jù)中醫(yī)證型來(lái)進(jìn)行亞健康的分類。 黃風(fēng)等[8]的調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)亞健康患者中醫(yī)證型以肝郁氣滯、心脾兩虛、肝腎陰虛、肝郁脾虛、脾腎陽(yáng)虛、肺腎氣虛等證型多見(jiàn),張建峰等[9]的調(diào)查發(fā)現(xiàn)亞健康證型以氣虛型、痰濕型、肝郁型居多。 因此在中醫(yī)亞健康動(dòng)物模型的構(gòu)建中常見(jiàn)根據(jù)中醫(yī)證型來(lái)建立亞健康動(dòng)物模型,其中以腎陽(yáng)虛[10-11]、脾氣虛[12]、肝郁證[13-14]、濕困脾胃等[15]證型多見(jiàn)。

3 亞健康狀態(tài)模型建立的動(dòng)物選擇

目前,在亞健康動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,研究者們多選用大鼠、小鼠來(lái)構(gòu)建動(dòng)物模型。 一方面是因?yàn)槭箢惻c人的機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)和疾病特點(diǎn)相似,尤其是大鼠的神經(jīng)系統(tǒng)與人類相似,另一方面是低等哺乳動(dòng)物如嚙齒類動(dòng)物易繁殖、易飼養(yǎng),麻醉及手術(shù)操作簡(jiǎn)單,維護(hù)費(fèi)用較低。

4 亞健康狀態(tài)造模方法

亞健康狀態(tài)的產(chǎn)生與長(zhǎng)期反復(fù)的社會(huì)、心理應(yīng)激密切相關(guān),因此在亞健康動(dòng)物模型構(gòu)建中,應(yīng)激源多是模擬人類生活中的各種不良生活方式、行為習(xí)慣、社會(huì)精神壓力等,有單獨(dú)采用軀體、心理應(yīng)激源造模,也有采用軀體心理復(fù)合應(yīng)激源造模。

4.1 心理應(yīng)激造模

4.1.1 單因素刺激

束縛應(yīng)激(wrap restraint stress, WRS)方法在心理亞健康及疲勞型亞健康模型構(gòu)建中多見(jiàn),可單獨(dú)也可與其他方法聯(lián)合使用。 研究人員[16-19]通過(guò)使用WRS 限制大鼠活動(dòng)用以模擬人類存在的心理上的限制性因素,也有通過(guò)WRS 后聯(lián)合懸尾實(shí)驗(yàn)觀察大鼠為克服不正常體位而進(jìn)行掙扎的狀況,來(lái)探討應(yīng)激對(duì)大鼠記憶能力、學(xué)習(xí)能力等的影響,造模方法中多采用每天1 次的干預(yù)頻次,連續(xù)造模21 d。

4.1.2 非軀體復(fù)合因素

是目前心理亞健康動(dòng)物模型常用造模方法,通過(guò)模擬人類生活中存在的各種不良心理應(yīng)激,如孤獨(dú)、晝夜節(jié)律失調(diào)、飲食不節(jié)、工作生活事件的不確定感等,在造模中常采用孤養(yǎng)、空瓶應(yīng)激、晝夜紊亂、飲食不節(jié)、旁觀電擊應(yīng)激等多種形式,且全部造模刺激采用隨機(jī)表來(lái)安排,以使其與人類生活中所遇到的各種不良應(yīng)激環(huán)境更貼近,造出的模型更具有代表性[20-21]。

4.2 軀體應(yīng)激造模

4.2.1 過(guò)度運(yùn)動(dòng)

構(gòu)建疲勞亞健康模型時(shí)多采用此方法,且常采取無(wú)負(fù)重強(qiáng)制游泳[22]、跑臺(tái)訓(xùn)練、強(qiáng)迫水中站立[23]等方法。 但在造模過(guò)程中運(yùn)動(dòng)量和運(yùn)動(dòng)時(shí)間尚無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)或計(jì)算公式,有研究采用每日同一運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度、運(yùn)動(dòng)時(shí)間的方式,也有采取逐漸增大運(yùn)動(dòng)量或延長(zhǎng)運(yùn)動(dòng)時(shí)間的方式來(lái)造模[24]。 造模時(shí)間也不統(tǒng)一,有連續(xù)造模2 周,也有先采用無(wú)負(fù)重游泳2周,再采取遞增負(fù)荷游泳4 周的方式。 尚未見(jiàn)到不同造模時(shí)間或不同運(yùn)動(dòng)方式造出的疲勞亞健康模型是否存在差異或優(yōu)劣性的報(bào)道。

4.2.2 睡眠剝奪(sleep deprivation, SD)

該方法多見(jiàn)于睡眠障礙或疲勞型亞健康動(dòng)物模型構(gòu)建,用以模擬人類在社會(huì)中因長(zhǎng)期的睡眠不足所致亞健康狀態(tài)。 多采用持續(xù)照明和或改良水平臺(tái)的方式[25-27],采用水平臺(tái)的原理在于,動(dòng)物發(fā)生睡眠時(shí)其由于肌肉張力松弛機(jī)體處于失平衡狀態(tài)則易掉入水中,大鼠只能爬上平臺(tái),這樣反復(fù)多次從而達(dá)到SD 的效果。 大部分研究采取造模時(shí)間為2 周,于造模結(jié)束后對(duì)大鼠采用鼠尾懸掛實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠疲勞程度與體力狀態(tài),通過(guò)大鼠“絕望”時(shí)間、掙扎次數(shù)與靜止時(shí)間等對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。

4.2.3 飲食不節(jié)

飲食不節(jié)也是現(xiàn)在亞健康人群常常面臨的一個(gè)問(wèn)題,主要包括飲食不適度、飲食不合時(shí)宜、飲食無(wú)節(jié)律和飲食過(guò)雜。 在亞健康動(dòng)物模型構(gòu)建中多模擬人類飲食時(shí)間的不規(guī)律、饑飽無(wú)常、高脂飲食等不良飲食習(xí)慣。 王輝[28]通過(guò)采取飲食不節(jié)的方法建立大鼠亞健康狀態(tài),實(shí)驗(yàn)通過(guò)給予不同類型飼料(全家顆粒飼料、普通飼料和高脂飼料)結(jié)合限時(shí)給食的方法,連續(xù)6 d 完成造模,并對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。

4.2.4 軀體復(fù)合因素刺激

在亞健康造模中常采取復(fù)合造模的方法,有研究者運(yùn)用睡眠剝奪聯(lián)合負(fù)重力竭游泳的方法來(lái)建立疲勞型亞健康模型,通過(guò)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)與評(píng)價(jià)最終確定每日睡眠剝奪20 h 復(fù)合負(fù)重其體重5%力竭游泳的作用因素,連續(xù)4 d 即造模成功[29]。 張玥莉等[30]模擬現(xiàn)代人“起居無(wú)常、飲食失節(jié)”致生物鐘紊亂現(xiàn)象,采用打破大鼠正常生活節(jié)律,給予大鼠長(zhǎng)期24 h/24 h 間歇SD 聯(lián)合飲食失節(jié)的方法造成亞健康狀態(tài),持續(xù)10 周,進(jìn)行亞健康動(dòng)物模型的構(gòu)建通過(guò)比較正常組與模型組大鼠行為學(xué)指標(biāo)、血液學(xué)指標(biāo)、心電學(xué)差異,并觀察模型可逆性來(lái)判斷造模成功與否。 杜旭等[31]采取 WRS 結(jié)合游泳運(yùn)動(dòng)21 d 來(lái)制備亞健康狀態(tài)模型。 復(fù)合因素刺激方式與現(xiàn)代人生活特點(diǎn)更為貼近,能更好的模擬人類的生存環(huán)境,用該類方法所研制出的動(dòng)物模型更具代表性與說(shuō)服力。

4.3 軀體兼心理復(fù)合因素

單因素造模法由于涉及因素單一而常出現(xiàn)模型癥狀不明顯、效果不穩(wěn)定、維持時(shí)間短等情況,具有一定的局限性。 為了能更好的模擬人類亞健康的成因和癥狀,目前多采用軀體和心理應(yīng)激源刺激相結(jié)合的復(fù)合造模法,且在中醫(yī)證候相結(jié)合亞健康狀態(tài)中常見(jiàn)。 有選擇性的結(jié)合強(qiáng)迫游泳、SD、夾尾刺激、限制活動(dòng)、飲食不節(jié)等軀體、心理壓力的復(fù)合刺激來(lái)進(jìn)行造模[32-34],但對(duì)于每一種刺激給與方式、強(qiáng)度、持續(xù)時(shí)間、評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)等尚未統(tǒng)一。 這也說(shuō)明亞健康動(dòng)物模型標(biāo)準(zhǔn)化任重而道遠(yuǎn)。

4.4 中醫(yī)分型

關(guān)于亞健康的研究中,中醫(yī)多數(shù)采取分型來(lái)進(jìn)行辯證治療。 現(xiàn)有針對(duì)亞健康中醫(yī)證型進(jìn)行造模,如腎陽(yáng)虛、陰虛、脾氣虛、心腎不交、肝郁證、濕困脾胃等,都體現(xiàn)中醫(yī)辨證論治的特點(diǎn),并且在具體的實(shí)驗(yàn)當(dāng)中也充分運(yùn)用了中醫(yī)辨證治療理念。

4.4.1 腎陽(yáng)虛亞健康狀態(tài)模型

付蕓升[11]通過(guò)給予大鼠灌服腺嘌呤(20 mL/(kg·d),濃度1%),連續(xù)10 d 來(lái)研制腎陽(yáng)虛夜尿癥大鼠模型,周海亮等[35]通過(guò)給予雄性大鼠灌胃腺嘌呤(200 mg/(kg·d)),連續(xù)21 d 來(lái)建立腎陽(yáng)虛證不育模型。

4.4.2 陰虛亞健康狀態(tài)模型

有研究通過(guò)給大鼠灌胃性味辛、熱的附子(制烏頭)、甘姜(根莖姜)和肉桂(肉桂)中藥湯劑構(gòu)建陰虛證亞健康狀態(tài)[36],吳柳花等[37]根據(jù)“過(guò)勞傷陰”原理采用負(fù)荷遞增游泳的方法建立陰虛內(nèi)熱模型,每天1 次,每周5 d,連續(xù)造模8 周,游泳時(shí)間由每日10 min 逐日增加至第8 周的每日180 min,水深60 cm,水溫30℃來(lái)制備腎陰虛模型。

4.4.3 脾氣虛與濕困脾胃亞健康狀態(tài)模型

劉文俊等[38]采取飲食不節(jié)加力竭游泳的方法構(gòu)建大鼠脾氣虛證模型,具體方法是3 d 為一循環(huán),先飽食1 d,再禁食2 d,自由飲水,每在28℃~32℃水溫中游泳至力竭,連續(xù)15 d。 馮玉華等[12]通過(guò)采取措施使大鼠饑飽失常、飲食不節(jié)、負(fù)重游泳等法式使其疲勞過(guò)度聯(lián)合夾尾刺激方法激惹大鼠造成情志失調(diào)復(fù)合因素的方法構(gòu)建脾氣虛慢性疲勞型亞健康大鼠模型。 劉瑤等[15]采用軀體聯(lián)合心理的復(fù)合刺激進(jìn)行亞健康濕困脾胃病證結(jié)合動(dòng)物模型的構(gòu)造,具體采取水中站立、飲食調(diào)控、被迫游泳與改造環(huán)境等方式模擬“情志不遂、飲食不節(jié)、饑飽失常、過(guò)勞耗氣與久居濕地、外濕過(guò)盛”等具體措施。

4.4.4 心腎不交亞健康狀態(tài)模型

趙鑫等[39]采用4℃冰水游泳、45℃熱水游泳、潮濕墊料24 h、無(wú)墊料、晝夜顛倒、夾尾、震動(dòng)鼠籠、禁食和禁水,每天隨機(jī)安排1~2 種刺激,持續(xù)14 d,避免大鼠對(duì)外界刺激產(chǎn)生適應(yīng)性,之后采取大鼠腹腔注射濃度為對(duì)氯苯丙氨酸(PCPA)混懸液(濃度45 g/L,450 mg/kg),每日 1 次,連續(xù) 3 d,黃運(yùn)芳等[40]直接采取對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射PCPA 混懸液(400 mg/(kg·d)),連續(xù)2 d 來(lái)進(jìn)行模型心腎不交失眠模型的構(gòu)建。

4.4.5 肝郁證亞健康狀態(tài)模型

吳天浪等[41]采用自治頸部枷鎖套在大鼠脖子上,同時(shí)加用自制的腳鐐束縛其雙后足,以限制大鼠活動(dòng),連續(xù)21 d,建成亞健康狀態(tài)(肝郁證)模型;馬作峰等[42]早在2008 年就提出亞健康從肝治的觀念,并且采取運(yùn)動(dòng)、睡眠剝奪、應(yīng)激等符合因素進(jìn)行亞健康狀態(tài)模型建立,并對(duì)其進(jìn)行了評(píng)價(jià)。

5 亞健康動(dòng)物模型評(píng)價(jià)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中,科學(xué)合理的評(píng)價(jià)是動(dòng)物模型具有可重復(fù)性的基礎(chǔ)。 目前對(duì)于亞健康的定義、診斷和分類等尚未形成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),那該如何來(lái)評(píng)價(jià)亞健康狀態(tài)動(dòng)物模型的優(yōu)劣? 根據(jù)亞健康產(chǎn)生與各種應(yīng)激密不可分,慢性應(yīng)激時(shí),機(jī)體內(nèi)穩(wěn)態(tài)處于失衡狀態(tài),可以引起動(dòng)物行為學(xué)的改變,也可通過(guò)應(yīng)激引起一系列的神經(jīng)生化改變,進(jìn)而影響到情緒變化,機(jī)體免疫力下降等。 因此,對(duì)于亞健康動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)雖無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),但大多通過(guò)行為學(xué)、免疫學(xué)、神經(jīng)遞質(zhì)等方面來(lái)進(jìn)行研究與判斷。

5.1 亞健康動(dòng)物模型行為學(xué)改變

現(xiàn)有的亞健康動(dòng)物模型中大多從行為學(xué)方面對(duì)模型動(dòng)物進(jìn)行了評(píng)價(jià),包括動(dòng)物毛發(fā)、體重、食欲,大便形態(tài)、活動(dòng)量,也有通過(guò)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)、穿梭主動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)等考察動(dòng)物模型學(xué)習(xí)記憶能力和活動(dòng)時(shí)間,通過(guò)懸尾實(shí)驗(yàn)、游泳耐力實(shí)驗(yàn)等判斷模型大鼠的絕望時(shí)間、活動(dòng)耐力、情緒變化等[32,27]。 囤秀秀[22]建立心理亞健康大鼠模型后通過(guò)糖水偏愛(ài)、高架十字迷宮、明暗箱、曠場(chǎng)等行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)合模型大鼠體質(zhì)量和臟器指數(shù)未發(fā)生明顯變化進(jìn)行模型評(píng)價(jià)。

5.2 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)及腦中神經(jīng)遞質(zhì)的變化

5.2.1 血液生化及肝腎功能相關(guān)指標(biāo)的變化

目前對(duì)于亞健康狀態(tài)的診斷和評(píng)估方法有許多種,量化診斷法是其中一種常規(guī)的檢查方式,即體液微觀篩查技術(shù),就是對(duì)血液代謝性指標(biāo)、心肌酶譜等生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè),由于亞健康狀態(tài)的誘因眾多,如疲勞、不良生活方式、工作壓力等不同因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的亞健康狀態(tài)的臨床癥狀與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)均有所不同。

王德軍等[43]探討多因素、熱水游泳、睡眠不足和WRS 所致亞健康大鼠模型結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同因素誘導(dǎo)的亞健康狀態(tài)大鼠的血液生化、血?dú)怆娊赓|(zhì)指標(biāo)均出現(xiàn)了不同程度上的改變,因此判定血液生化和血?dú)怆娊赓|(zhì)指標(biāo)能有效評(píng)估亞健康狀態(tài)機(jī)體血液微環(huán)境的改變。 睡眠剝奪亞健康大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)水平明顯升高,而超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平則明顯降低,同時(shí)血液pH 值降低,出現(xiàn)酸中毒表現(xiàn),動(dòng)脈血氧分壓(arterial oxygen partial pressure,PaO2)和氧飽和度(oxygen saturation,SaO2%)均明顯低于正常組[27];強(qiáng)制游泳建立的小鼠疲勞型亞健康模型檢測(cè)發(fā)現(xiàn)血漿中總 SOD 和乳酸脫氫酶( lactate dehydrogenase,LD)活性降低,代謝積累物MDA 及BUN 含量增加,保持同等運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度一周后,小鼠疲勞狀態(tài)未得到恢復(fù),證明2 周的強(qiáng)制游泳時(shí)間可以建立較為穩(wěn)定的疲勞模型[22]。 Sachdeva 等[44]通過(guò)強(qiáng)迫游泳28 d 建立的疲勞性亞健康大鼠模型中發(fā)現(xiàn)模型組大鼠除行為上有明顯改變外,氧化亞硝化應(yīng)激和促炎性細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子(TNF-a)都有所增強(qiáng)。 WRS 所致大鼠亞健康狀態(tài)模型中氧自由基方面模型大鼠血清中SOD、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性明顯降低,MDA、LD 含量明顯升高,提示亞健康狀態(tài)下抗氧化能力下降[13]。

5.2.2 免疫功能相關(guān)指標(biāo)的變化

臨床調(diào)查結(jié)果顯示,亞健康患者多以脾、腎虛弱者多見(jiàn),脾細(xì)胞抗體形成能力下降,白細(xì)胞移動(dòng)抑制指數(shù)升高,體液和細(xì)胞免疫功能下降。 徐孝平等[45]采用不同應(yīng)激源構(gòu)建大鼠亞健康模型,大鼠下丘腦-垂 體-腎 上 腺 (hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA) 軸反應(yīng)性失衡,因皮質(zhì)醇過(guò)度釋放,從而導(dǎo)致內(nèi)分泌的紊亂,降低淋巴細(xì)胞的功能從而出現(xiàn)明顯的機(jī)體免疫抑制現(xiàn)象。 但不同的應(yīng)激源所致的相關(guān)指標(biāo)變化不一致,艾秀峰等[16]從免疫功能方面對(duì)WRS 所致亞健康大鼠模型進(jìn)行了評(píng)價(jià),結(jié)果顯示與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠T 淋巴細(xì)胞增殖能力、自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK)細(xì)胞活性,白 介 素-2 (Interleukin-2, IL-2) 和 干擾 素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)含量及胸腺指數(shù)均顯著下降,提示束縛應(yīng)激致亞健康狀態(tài)大鼠模型的免疫功能下降;何清湖等[46]研究發(fā)現(xiàn)腎陽(yáng)虛雄性亞健康大鼠血清IgG、IgA、IgM、大鼠脾、胸腺重量指數(shù)較正常對(duì)照組均有明顯降低。 在評(píng)價(jià)過(guò)程中生化指標(biāo)存在一定的變化,尚未達(dá)到疾病診斷標(biāo)準(zhǔn),符合亞健康定義。 還有研究通過(guò)自制應(yīng)激、強(qiáng)迫運(yùn)動(dòng)和擁擠嘈雜的環(huán)境持續(xù)4 周建立亞健康大鼠模型,也是除采取行為實(shí)驗(yàn)外并對(duì)其尿代謝產(chǎn)物進(jìn)行了檢測(cè)與分析,結(jié)果顯示亞健康模型大鼠除一些能力物質(zhì)的代謝紊亂外,還檢測(cè)到類固醇技術(shù)生物合成和鞘脂代謝的改變過(guò),其中鞘氨醇和21-羥基孕烯醇酮可能是疲勞性亞健康大鼠的關(guān)鍵生物標(biāo)志物,表明亞健康狀態(tài)下大鼠存在免疫功能低下和HPA 軸低活性等特點(diǎn)[47]。

5.2.3 腦中神經(jīng)遞質(zhì)的變化

亞健康狀態(tài)的實(shí)質(zhì)是心身問(wèn)題,目前普遍認(rèn)為亞健康的主要原因?yàn)樯鐣?huì)心理因素導(dǎo)致的心理應(yīng)激,而中樞神經(jīng)系統(tǒng)在心理應(yīng)激過(guò)程中又起著非常重要的作用。 有研究表明束縛應(yīng)激所致亞健康狀態(tài)模型大鼠腦組織中乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase,TChE) 活性和 5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量明顯升高[17]。 馮玉華等[12]發(fā)現(xiàn)亞健康大鼠模型多巴胺(dopamine,DA)、5-HT 出現(xiàn)先下降后升高的趨勢(shì)。 郝文麗等[32]采用復(fù)合因素建立的亞健康小鼠模型下丘腦多巴胺含量及海馬區(qū)谷氨酸受體NR2A mRNA 表達(dá)水平均顯著低于對(duì)照組,而5-HT 含量明顯高于對(duì)照組。 王秀云等[25]的研究亞健康狀態(tài)下大鼠海馬結(jié)構(gòu)的一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性和神經(jīng)元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)蛋白表達(dá)減少,損害學(xué)習(xí)記憶等腦認(rèn)知能力。賈臨超等[48]也進(jìn)一步證實(shí)亞健康狀態(tài)大鼠大腦皮質(zhì)誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表達(dá)的陽(yáng)性面積和總光密度與正常對(duì)照組比較顯著增加,平均光密度值顯著減少,且病理表達(dá)圖顯示模型對(duì)照組大鼠大腦皮質(zhì)的iNOS陽(yáng)性表達(dá)量明顯增加,大量的皮層細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色陽(yáng)性表達(dá)。 孟彥等[20]研究發(fā)現(xiàn)亞健康狀態(tài)大鼠出現(xiàn)明顯的疲勞狀態(tài),海馬CA3 區(qū)椎體細(xì)胞數(shù)量減少,且形態(tài)不規(guī)則,包膜不完整,核膜不清,細(xì)胞核變形固縮,原位末端標(biāo)記法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)觀測(cè)海馬細(xì)胞凋亡情況,陽(yáng)性細(xì)胞散布于整個(gè)海馬組織。 從上述眾多的研究發(fā)現(xiàn),亞健康大鼠或小鼠模型其行為上的一些表現(xiàn)與其神經(jīng)遞質(zhì)的變化密不可分,也進(jìn)一步證實(shí)亞健康狀態(tài)不僅對(duì)行為學(xué)上有改變,而且對(duì)與機(jī)體的免疫力、認(rèn)知水平、抗氧化能力等都有影響,使機(jī)體處于一種低質(zhì)狀態(tài)。 Yasui 等[49]采取持慢性持續(xù)應(yīng)力載荷刺激,將大鼠孤養(yǎng)在裝滿水的籠子里(水深1.5 cm),連續(xù)6 d,來(lái)建立疲勞狀態(tài)大鼠模型,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在造模第2 天就觀察到模型組大鼠腰椎背側(cè)根神經(jīng)節(jié)(DRG)神經(jīng)元出現(xiàn)超過(guò)50%的ATF3 陽(yáng)性神經(jīng)元,再后來(lái)在模型大鼠背角內(nèi)側(cè)可見(jiàn)大量小膠質(zhì)聚集,且模型組大鼠比目魚(yú)的肌電活動(dòng)比對(duì)照組高2~3 倍,這些結(jié)果都表明慢性本體感受器激活誘導(dǎo)神經(jīng)元,沿序激活脊髓反射弧,神經(jīng)元的激活進(jìn)一步激活沿弧形的小膠質(zhì)細(xì)胞,表明本體感受器誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活可能使啟動(dòng)關(guān)鍵因素,以及疲勞型患者異常疼痛的維持原因。

6 小結(jié)

目前亞健康動(dòng)物模型的構(gòu)建大多集中在中醫(yī)證型相結(jié)合亞健康、疲勞型亞健康和心理亞健康模型,已有多個(gè)團(tuán)隊(duì)進(jìn)行了亞健康造模的探討,也得到了一定的認(rèn)可,但仍為形成一個(gè)較為理想、成熟、公認(rèn)的動(dòng)物模型,造模應(yīng)激源多種多樣,造模時(shí)間長(zhǎng)短不一,評(píng)價(jià)指標(biāo)不統(tǒng)一、不典型,其實(shí)質(zhì)在于人體本身是一個(gè)復(fù)雜的機(jī)體,且引起亞健康的原因又復(fù)雜多樣,該從哪些方面去著手構(gòu)建動(dòng)物模型仍需不斷研究探索。 同時(shí)也需進(jìn)一步挖掘與完善亞健康動(dòng)物模型構(gòu)建的理論依據(jù)。