新型鵝星狀病毒致雛鵝痛風(fēng)及其綜合防控

◆作者：侯展鵬 高智均 江丹莉 潘建秋 黃運(yùn)茂 付新亮

◆單位：1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院；2.廣東省水禽健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

雛鵝痛風(fēng)是由新型鵝星狀病毒（Goose Avastrovirus,GoAstV）引起的一種以雛鵝的心包、腎臟、肝臟等內(nèi)臟及關(guān)節(jié)出現(xiàn)大量尿酸沉積為主要特征的急性傳染性疾病。該病主要發(fā)生于5～20日齡雛鵝，感染的雛鵝精神沉郁、食欲減退、消瘦、四肢癱瘓等，嚴(yán)重者死亡，死亡率高達(dá)30%。研究表明，在不同品種、不同飼養(yǎng)方式的種鵝群中均有發(fā)生。由于該病的致病機(jī)制尚不明確，導(dǎo)致AstV在鵝群中迅速傳播，給水禽養(yǎng)殖業(yè)帶來了嚴(yán)重的損失。目前對于鵝新型痛風(fēng)并無有效的治療方案，為此應(yīng)加強(qiáng)生物安全和綜合防控措施，以保障我國養(yǎng)鵝業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。

1 病原學(xué)

星 狀 病 毒（Avastrovirus，AstV）屬于星狀病毒科星狀病毒屬，為單股正鏈RNA病毒，直徑約為28-30nm。該病毒粒子無囊膜結(jié)構(gòu)，核衣殼呈二十面體球形對稱結(jié)構(gòu)，在電鏡觀察到該病毒呈五角或六角星狀，因此命名為星狀病毒。該病毒基因組具有三個(gè)開放閱讀框(ORF1a、ORF1b和orf2b)，5'和3'的非編碼區(qū)以及poly-A組成。在ORF 1a和ORF 1b(AAAAAC)的重疊區(qū)都有保守的滑序列，在ORF 1a和ORF 1b指導(dǎo)ORF 1ab融合蛋白的合成，間隔區(qū)存在于絕大多數(shù)鳥類星狀病毒的開放閱讀框1b的終止密碼子和開放閱讀框2的起始密碼子之間，而重疊在少數(shù)的開放閱讀框中ORF 1a和ORF 1b編碼非結(jié)構(gòu)蛋白，其對基因組復(fù)制有反應(yīng)，ORF2編碼病毒體形成所需的病毒衣殼蛋白。根據(jù)星狀病毒感染動(dòng)物類型的不同可劃分為：哺乳類星狀病毒（Mamastrovirus，MAstV）和禽星狀病毒（Avastroviruses，AAstV）兩個(gè)屬，其中AAstV，由33個(gè)不同的病毒基因型所構(gòu)成；MAstV包含7種基因型。禽星狀病毒的宿主包括：火雞、雞、鴨、鴿等鳥類，主要引起的胃腸道疾病，并導(dǎo)致雞、鴿腎炎以及鴨病毒性肝炎的發(fā)生。GoAstV與其他種屬星狀病毒同源性均小于70%，遺傳距離較遠(yuǎn)，根據(jù)基因組序列的差異，可能存在的致病性有顯著差異。由于星狀病毒在自然環(huán)境下非常穩(wěn)定，對酚類、季銨鹽類等大多數(shù)常用消毒藥物不敏感，對熱和酸等條件比較耐受，但能被0.3 %甲醛、0.1 %的β-丙內(nèi)酯、90 %甲醇等消毒劑徹底滅活。

2 流行病學(xué)

GoAstV具有廣泛的組織噬性，病死雛鵝的腎臟、心臟、大腦、肝臟等均可分離出病毒。其傳播途徑主要是經(jīng)過消化道感染，即糞-口途徑傳播，其中被星狀病毒污染的水源、食物均可成為傳染源，為其他物種的潛在感染和病毒的跨宿主傳播提供有利條件。雛鵝痛風(fēng)的發(fā)生無明顯季節(jié)性，由于空氣溫度、濕度偏高，同時(shí)雛鵝抵抗力低下，飼養(yǎng)環(huán)境差、飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)?，給病毒的傳播提供了非常有利的條件。但雛鵝痛風(fēng)在其他月份某些地區(qū)均能繼續(xù)流行，表明GoAstV還存在其他傳播方式，通過大量研究數(shù)據(jù)表明，AstV除了通過糞-口途徑傳播以外，還可以通過直接接觸傳播和間接接觸傳播。

3 臨床癥狀與病理變化

3.1 臨床癥狀

雛鵝感染GoAstV后，病雛會出現(xiàn)精神不振、羽毛松亂，行動(dòng)遲緩、食欲相對正常，消瘦、排灰白色水樣糞便，并污染肛門附近的羽毛，發(fā)病后期食欲減退漸至廢絕，關(guān)節(jié)腫脹、跛行、臥地不起、不愿走動(dòng)，部分病鵝會出現(xiàn)單腳站立或呈現(xiàn)蹲姿，喙部尿酸鹽沉積、蹼蒼白最終衰竭死亡,病程大概持續(xù)3-7d。

3.2 病理變化

GoAstV具有廣泛組織嗜性，導(dǎo)致機(jī)體可引起病雛體內(nèi)多組織器官病變，剖檢可見心臟和肝臟表面被大量白色的尿酸鹽滲出物所覆蓋，肝臟腫大、淤血，心包、氣囊上有豆腐渣樣尿酸鹽沉著，腎臟腫大，色澤變淡，在表面沉積白色斑點(diǎn)狀尿酸鹽；輸尿管集聚過多的尿酸鹽而發(fā)生阻塞，明顯腫脹變粗。部分病死鵝脾臟、肝臟、腎臟、腸系膜等表面覆蓋一層白色薄膜；頸部皮下、腿部肌肉及腿部關(guān)節(jié)腔中出現(xiàn)點(diǎn)狀或者片狀尿酸鹽沉積。

4 診斷

根據(jù)病因、病史、特征性癥狀和剖檢變化可作出初步診斷為雛鵝痛風(fēng)，雛鵝痛風(fēng)雖然難以根據(jù)流行病學(xué)，臨床癥狀、病理變化確定其病因，但引起雛鵝痛風(fēng)的因素大多是飼養(yǎng)管理?xiàng)l件差，鈣磷比例失衡，維生素A缺乏、病毒感染、寄生蟲感染。若需確定雛鵝痛風(fēng)的病因，還需要通過實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行進(jìn)一步的診斷，目前實(shí)驗(yàn)室的診斷方法包括電鏡法、病毒分離鑒定和血清學(xué)試驗(yàn)、分子生物學(xué)診斷等。

4.1 電鏡法

電鏡法是最原始用于檢測星狀病毒的方法，通過電鏡直接觀察病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)和病毒大小的特點(diǎn)進(jìn)行直接判斷，若從樣品中觀察到呈五角或六角的星狀帶纖突、直徑約為29 nm的病毒顆粒，基本可以確定為星狀病毒（AAstV），此方法較為直觀，但靈敏度與特異性不強(qiáng)。

4.2 病毒分離鑒定

采集患病病鵝肝、腎、脾等內(nèi)臟器官進(jìn)行PBS進(jìn)行勻漿處理，接種到9～13日齡鵝胚的尿囊腔或卵黃囊中，一般傳代培養(yǎng)到第三代時(shí)，鵝胚出現(xiàn)死亡，可見死亡鵝出現(xiàn)胚尿囊膜增厚，胚體出血明顯的現(xiàn)象。組織病理學(xué)檢查可見腎臟上皮細(xì)胞出現(xiàn)變圓、聚團(tuán)、脫落等明顯的病變。

4.3 血清學(xué)檢測法

由于目前尚無GoAstV的疫苗應(yīng)用，若血清中檢測出GoAstV的抗體，則一定存在GoAstV的感染。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）與血清中和實(shí)驗(yàn)（NT）是檢測星狀病毒最常用的血清學(xué)檢測方法，其中ELISA具有快速、簡便、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。Zhao等建立了一套用于檢測鴨星狀病毒血清抗體的間接ELISA檢測技術(shù)，如今已有市面上已有檢測禽星狀病毒的ELISA試劑盒，為快速診斷禽星狀病毒提供了更為便捷的方式。

4.4 分子生物學(xué)方法

邱思語等，建立了GoAstV的qPCR檢測方法，SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR與普通PCR相比，SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，其靈敏度是普通PCR的100倍，且該檢測方法對鵝其他病毒性疾病的病原如副粘病毒、細(xì)小病毒檢測均無反應(yīng)，是檢測GoAstV的有效手段。

5 疫苗研究進(jìn)展

目前，市面上尚無可以有效預(yù)防GoAstV的疫苗，且常規(guī)抗菌、抗病治療方法無明顯效果，由于GoAstV不容易培養(yǎng)，成本相對較高以及病毒毒價(jià)不高，導(dǎo)致GoAstV疫苗產(chǎn)品質(zhì)量高低不一；根據(jù)奚雨萌等，研究表明，對患有GoAstV的病雛及時(shí)接種相應(yīng)抗體以及使用抗生素可以有效的防控態(tài)勢，減少經(jīng)濟(jì)損失；張清水，將GoAstV通過連續(xù)傳代培養(yǎng)后，成功選育出弱毒株，免疫接種實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，免疫后的雛鵝產(chǎn)生較高的抗體水平，且保護(hù)率為100%。Xu等，構(gòu)建了以新城疫病毒為載體表達(dá)GoAstV Cap蛋白的載體疫苗，該疫苗能較好的表達(dá)GoAstV Cap蛋白，在其免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果表明，該疫苗對易感雛鵝可產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)，這為后續(xù)疫苗的研發(fā)提供了新的思路。

6 綜合防控措施

6.1 強(qiáng)化生物安全，切斷傳播途經(jīng)

由于該病暫無疫苗和特效藥物進(jìn)行治療，防控GoAstV主要依靠及早發(fā)現(xiàn)、及早撲滅，堅(jiān)持以預(yù)防為主的措施。各養(yǎng)殖場應(yīng)采取封閉式的管理模式，加強(qiáng)完善防疫流程，實(shí)施全進(jìn)全出制度。由于GoAstV主要通過消化道、生殖道進(jìn)行傳播，因此我們應(yīng)保證飼養(yǎng)環(huán)境干凈衛(wèi)生，定期消毒及時(shí)對糞便進(jìn)行清理，同時(shí)加強(qiáng)精細(xì)化管理，養(yǎng)鵝場需要定期通風(fēng)換氣加速空氣流動(dòng)，防止氨氣、硫化氫等有害氣體累積，降低雛鵝抵抗力，導(dǎo)致GoAstV容易通過呼吸道進(jìn)行傳播。鵝場進(jìn)出道口要有消毒設(shè)施，對進(jìn)出的外來車輛必須進(jìn)行消毒，對外來人員需進(jìn)行消毒隔離方可進(jìn)入養(yǎng)殖場，避免外界的病原體進(jìn)入養(yǎng)殖場，從源頭上切斷傳染源。

6.2 提高雛鵝抗病能力

根據(jù)鵝生長各階段營養(yǎng)需求合理調(diào)整飼料搭配，確保飼料營養(yǎng)全面，為防止雛鵝痛風(fēng)的發(fā)生，不隨意提高飼料中蛋白質(zhì)和鈣的含量，確保雛鵝能及時(shí)排出尿酸等蛋白代謝產(chǎn)物，避免其在體內(nèi)的積累，控制好礦物質(zhì)和維生素水平，同時(shí)確保飲用水充足、不飼喂霉變飼料，盡可能增加青綠飼料在飼喂料中的占比；合理的飼養(yǎng)密度，保證雛鵝有一定的活動(dòng)空間，合理加強(qiáng)雛鵝運(yùn)動(dòng)，保證雛鵝每天有充足的運(yùn)動(dòng)量，以增強(qiáng)雛鵝體質(zhì)，提高雛鵝對疾病的抵抗力；這些措施可以有效降低營養(yǎng)代謝型痛風(fēng)降低營養(yǎng)代謝型痛風(fēng)的發(fā)。

6.3 制定隔離措施，降低疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)

若發(fā)現(xiàn)疑似病例，及時(shí)進(jìn)行嚴(yán)格消毒隔離，防止該病向外傳播擴(kuò)散，并限制人員的進(jìn)出鵝舍，對鵝場的墻壁、地面、料線、水線等設(shè)備設(shè)施進(jìn)行消毒，所有的垃圾和糞便都應(yīng)無害化處理，做到從根源上切斷傳播途經(jīng)，并對發(fā)病雛鵝采取對癥治療的方案，在飼料和水中添加小蘇打和電解多維，進(jìn)一步加速體內(nèi)尿酸鹽的代謝和排出，同時(shí)可使用保肝護(hù)腎的藥物進(jìn)行調(diào)理。