獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室抗體檢測結(jié)果影響因素分析及注意事項(xiàng)

張伯杰，劉文天，張會(huì)春，王俊強(qiáng)，李煥婷

（天津市寶坻區(qū)農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，天津 301800）

近年來，國家增加了對動(dòng)物疫病的重視，不斷提升基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)水平，并且農(nóng)業(yè)部門也連續(xù)促進(jìn)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室考核工作，提升了全國縣級以上的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備水平?？贵w檢測工作的開展，能夠快速檢測出一些畜禽的疾病，根據(jù)結(jié)果能夠提出相應(yīng)的治療方法，進(jìn)一步提升治療的效果。但是在開展抗體檢測過程中，樣品因素、人為因素等會(huì)造成檢測結(jié)果失真，無法為治療提供有效的依據(jù)。因此，相關(guān)部門要優(yōu)化獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室抗體檢測環(huán)節(jié)，提高檢測準(zhǔn)確性。

1 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室抗體檢測的必要性

隨著生存環(huán)境的不斷惡化，各種疾病的發(fā)生率也越來越高，畜禽業(yè)動(dòng)物疫病類型也變得復(fù)雜，不再是單一感染，混合型感染加繼發(fā)性感染多，很多疾病的臨床表現(xiàn)與剖檢結(jié)果類似，如果不能準(zhǔn)確找出病因，將無法達(dá)到良好的治療效果[1]。實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)利于中獸醫(yī)明確疫病類型，從而采取針對性的治療，不僅能減少治療成本，還能提高治療效果。獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開展抗體檢測工作就是為了將治療的被動(dòng)狀態(tài)變?yōu)橹鲃?dòng)。常見的檢測方法有血清學(xué)檢測、ELISA檢測等，基本原理都是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合酶標(biāo)物，催化檢測樣本，使其發(fā)生反應(yīng)顯色，根據(jù)顯色的深淺判斷結(jié)合酶的多少。其中ELISA 檢測的類型分為間接法、雙抗夾心法以及競爭法，不同的方法適合不同的抗體檢測工作，需要根據(jù)實(shí)際情況選擇。

2 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的現(xiàn)狀

2.1 實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員較少

目前，我國大部分縣區(qū)的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的工作人員都是兼職的身份，具有較強(qiáng)的流動(dòng)性，且缺乏相應(yīng)的專業(yè)知識與技術(shù)，實(shí)驗(yàn)室工作人員較為短缺，部分動(dòng)物抗體檢測工作甚至無法正常開展。部分實(shí)驗(yàn)室中只有2 名工作人員身兼數(shù)職，無法以實(shí)驗(yàn)工作為主，加上多種因素的影響，實(shí)驗(yàn)室的工作人員沒有學(xué)習(xí)與進(jìn)修的機(jī)會(huì)，工作人員的能力不能滿足新時(shí)期獸醫(yī)工作的需求。

2.2 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)費(fèi)不足

很多地方對獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)費(fèi)投資力度不夠，導(dǎo)致部分獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)經(jīng)費(fèi)不足的情況[2]。一些地區(qū)雖然在表面上將動(dòng)物抗體檢測的經(jīng)費(fèi)列入了支持范疇，但是實(shí)際用來建設(shè)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)費(fèi)較少，實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備與儀器不能及時(shí)更新，設(shè)備采購年限較長，在設(shè)計(jì)運(yùn)用中可能會(huì)出現(xiàn)故障與問題，部分實(shí)驗(yàn)室還會(huì)出現(xiàn)缺少試劑的情況，無法保證抗體檢測的準(zhǔn)確性與可行性，阻礙抗體檢測工作的順利開展。

2.3 缺乏嚴(yán)格的管理制度

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的抗體檢測工作屬于專業(yè)性較強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)，只有建立健全相應(yīng)的管理制度才能提高檢測結(jié)果的可信度。這就需要管理人員從實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況出發(fā)，制定合理的管理制度，提高工作人員的責(zé)任心與使命感，進(jìn)一步提升實(shí)驗(yàn)室工作人員的能力。同時(shí)，還要做好培訓(xùn)工作，保證獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室工作的順利開展，提高抗體檢測結(jié)果的準(zhǔn)確率。

3 影響獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室抗體檢測結(jié)果的因素以及注意事項(xiàng)

3.1 免疫因素

3.1.1 實(shí)驗(yàn)物種因素

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室需要以物種綜合情況為依據(jù)對實(shí)驗(yàn)物種進(jìn)行合理選擇，實(shí)際選擇時(shí)不僅要對實(shí)驗(yàn)物種的遺傳疾病進(jìn)行準(zhǔn)確評估，還要對其營養(yǎng)狀況進(jìn)行全面判定，是否受免疫抑制劑的影響也是實(shí)驗(yàn)物種選擇需要關(guān)注的重點(diǎn)。待確定好實(shí)驗(yàn)物種且正式研究前，需要依靠人工方式對其進(jìn)行一定時(shí)間的飼養(yǎng)，對其在實(shí)驗(yàn)過程的正常死亡提供保證，避開其他客觀因素的影響。除上述情況外，若沒對實(shí)驗(yàn)物種的遺傳疾病進(jìn)行判定，在抗原抗體進(jìn)行接種時(shí)其免疫應(yīng)答會(huì)受到不同程度的影響。

3.1.2 實(shí)驗(yàn)疫苗因素

免疫應(yīng)答體現(xiàn)質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)室選取疫苗的使用年限及質(zhì)量有很大關(guān)系。基于此，相關(guān)負(fù)責(zé)人在選購實(shí)驗(yàn)疫苗過程中要確認(rèn)疫苗來源是否合理、生產(chǎn)廠家是否正規(guī)，尤其是所選購生產(chǎn)廠家是否是國家相關(guān)部門檢驗(yàn)并通過審核，這這對免疫應(yīng)答非常重要[3]。假冒偽劣的疫苗品種經(jīng)常流通在相關(guān)市場，這類實(shí)驗(yàn)疫苗具有較低的選購成本，但非常不利于做抗體研究，甚至?xí)o獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)的整體結(jié)果帶來嚴(yán)重影響。除以上需要注意的外，還要保證實(shí)驗(yàn)過程選擇變量的單一性，切忌不能將多種疫苗同時(shí)注入實(shí)驗(yàn)物種中，這種錯(cuò)誤的行為不僅影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.2 樣品因素

3.2.1 樣品采集時(shí)間

研究人員給實(shí)驗(yàn)物種注射一定時(shí)間的疫苗后，要借助數(shù)據(jù)測量結(jié)果對疫苗作用的最高閾值及最低閾值進(jìn)行確定。如果實(shí)驗(yàn)物種疫苗達(dá)到最高閾值，研究人員應(yīng)將作用時(shí)間及時(shí)記錄，然后結(jié)合其他類型不同的疫苗最高閾值進(jìn)行仔細(xì)比對。通常情況下，疫苗活性和抗體產(chǎn)生速度成正比，活性越高實(shí)驗(yàn)體內(nèi)的抗體產(chǎn)生速度會(huì)越快，若實(shí)驗(yàn)疫苗活性被滅，抗體產(chǎn)生的時(shí)間就會(huì)被拉長。

3.2.2 樣品采集方法

在檢測實(shí)驗(yàn)抗體時(shí)，首先要進(jìn)行血清樣本的采集工作，采集對象需要是已經(jīng)接種疫苗的實(shí)驗(yàn)物種。如果采集針對的實(shí)驗(yàn)物種沒有生命體征，則該血清樣本采集無效。采集樣本的方式不僅要專屬、特定，還要借助專用設(shè)備進(jìn)行物質(zhì)分離，并保證采集全程無菌，還要保證研究人員動(dòng)作的規(guī)范性。

3.2.3 對樣品的處置及保管

由于凝血因子的存在會(huì)導(dǎo)致所采血清樣品極易發(fā)生凝固[4]?；诖?，為了保證采集質(zhì)量，避免發(fā)生變質(zhì)，實(shí)驗(yàn)人員經(jīng)常會(huì)將特殊化學(xué)試劑添加到所采的血清樣本中，并對其進(jìn)行專業(yè)的物理處理。需要注意的是，抗凝劑不能直接添加到樣本中，應(yīng)根據(jù)添加要求規(guī)范操作。待工序全面完成以后，應(yīng)將所采樣品放置在離心管中進(jìn)行低溫或冷凍保存，離心管要提前高溫消毒方可使用。由于實(shí)驗(yàn)樣品的保存期非常有限，需要對其及時(shí)利用。

3.2.4 樣品分裝

獸醫(yī)研究人員在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)需要保持嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度，這也是科學(xué)實(shí)驗(yàn)的重要前提。為了預(yù)防交叉感染問題發(fā)生，分裝血清樣本過程中，務(wù)必使用獨(dú)立且符合應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的試劑滴管進(jìn)行嚴(yán)格操作。離心管及注射器需要和血清樣本一一對應(yīng)，離心管和注射器必須是一次性操作，不能重復(fù)使用。

3.3 實(shí)驗(yàn)室因素

3.3.1 對實(shí)驗(yàn)器械的檢測

實(shí)驗(yàn)器械的使用質(zhì)量及結(jié)構(gòu)直接影響著實(shí)驗(yàn)測量的最終結(jié)果，任何獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)都是如此[5]。如果選用了誤差較大的測量設(shè)備，或者靈敏度較低的儀器，會(huì)給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來不同程度的偏差，尤以抗體檢測最為明顯，如果器械使用質(zhì)量不佳，會(huì)直接干擾最終的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

3.3.2 對實(shí)驗(yàn)試劑的檢測

雖然獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室選購的試劑廠家都是正規(guī)且通過驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)的，但在對實(shí)驗(yàn)試劑進(jìn)行實(shí)際生產(chǎn)時(shí)，每個(gè)廠家會(huì)使用不同的成分元素，因此，實(shí)驗(yàn)試劑最終成品還是會(huì)存在某方面的不同，在具體實(shí)驗(yàn)中，研究人員需依據(jù)自身的實(shí)際需求，合理選擇試劑，以保證實(shí)驗(yàn)開展的順利性。

3.3.3 實(shí)驗(yàn)室溫度

實(shí)驗(yàn)室溫度如何同樣影響著抗體實(shí)驗(yàn)的檢測結(jié)果。因此，在抗體檢測實(shí)驗(yàn)時(shí)，研究人員需要避免溫差較大問題出現(xiàn)。通常實(shí)驗(yàn)溫度要求在25℃左右為最佳，如果抗體實(shí)驗(yàn)中發(fā)生溫差較大現(xiàn)象，勢必會(huì)對抗原抗體的反應(yīng)結(jié)果帶來直接影響，或快或慢都會(huì)降低實(shí)驗(yàn)結(jié)果的嚴(yán)謹(jǐn)性，甚至出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)差異較大的結(jié)果。

3.4 人為操作因素

3.4.1 加樣操作

不同類型的抗體檢測技術(shù)，適用于相應(yīng)的動(dòng)物傳染性疾病抗體檢測。在實(shí)際檢測過程中，加樣環(huán)節(jié)是血清抗體檢測的重要步驟，也會(huì)直接影響試驗(yàn)研究的結(jié)果[6]。因此，在進(jìn)行添加樣品過程中，要保證樣品的均勻性，避免出現(xiàn)氣泡，并且要做到定量加入，一般的劑量控制在50 μl 左右，輕輕地將樣品加入被檢樣品孔。另外，還需要注意樣品檢測前要完全解凍，提前將需要使用的樣品拿出來，在室溫下完成解凍，混合均勻后在檢測。

3.4.2 孵育時(shí)間

采用ELISA 抗體檢測方法時(shí)，被檢樣品完成加樣后需要進(jìn)行孵育，能夠使被檢樣本與所包被抗原或抗體進(jìn)行充分結(jié)合，在此過程中要做好溫度與時(shí)間的控制。不同類型抗體檢測時(shí)，要嚴(yán)格按照說明書的要求進(jìn)行孵育，以此防止抗原或抗體活性喪失后，造成檢驗(yàn)樣品與抗體形成抗原復(fù)合物，影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。

3.4.3 洗板次數(shù)因素

ELISA 檢測相關(guān)抗體時(shí)，完成加樣與孵育后要進(jìn)行洗板，常見的洗板方法有兩種，即手工洗板與機(jī)器洗板。在進(jìn)行洗板過程中，洗滌的次數(shù)要在一定標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)，洗滌次數(shù)過多會(huì)將反應(yīng)結(jié)合的復(fù)合物清洗掉，洗滌次數(shù)較少會(huì)出現(xiàn)洗滌不干凈的現(xiàn)象，造成二抗稀釋液的殘留，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。另外，在進(jìn)行洗滌后還要注意拍板，將多余的洗滌液甩出去，保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

3.4.4 結(jié)果判定

在進(jìn)行抗體檢測實(shí)驗(yàn)過程中，完成顯色反應(yīng)后要停止加入終止液，將酶標(biāo)板放在酶標(biāo)儀上，限定15 min 內(nèi)讀取結(jié)果，保證設(shè)定的波長和試劑說明書一致。另外，需要注意的是，酶標(biāo)板在使用前需要預(yù)熱15～30 min，空白版自檢2次后才能檢測樣品。

4 提高獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開展抗體檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的策略

4.1 加強(qiáng)對實(shí)驗(yàn)室工作人員的技術(shù)培訓(xùn)

在進(jìn)行抗體檢測過程中，為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性與有效性，需要對獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的工作人員進(jìn)行培訓(xùn)[7]。為此，獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的管理人員要建立完善的培訓(xùn)制度，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體情況，制定合理的技術(shù)培訓(xùn)計(jì)劃，幫助工作人員掌握先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)方法與操作要點(diǎn)，規(guī)范工作人員的操作流程，進(jìn)一步提升工作人員的素養(yǎng)與綜合能力。同時(shí)做好實(shí)驗(yàn)人員的思想工作，使其樹立嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度，提高工作的責(zé)任心，高質(zhì)高量的完成抗體檢測工作，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。另外，還要制定完善的考核標(biāo)準(zhǔn)，保證實(shí)驗(yàn)人員持證上崗，提升實(shí)驗(yàn)室的檢測水平。

4.2 制定完善的監(jiān)督管理制度

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開展抗體檢測工作中，要根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型挑選準(zhǔn)確率高、操作簡單的方法，嚴(yán)格按照相關(guān)流程進(jìn)行檢測，保證器材使用的規(guī)范性，按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)添加試劑，并且要嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境，及時(shí)處理實(shí)驗(yàn)肥料，減少出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)誤差的概率，保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。同時(shí)，建立健全完善的監(jiān)督管理制度，有利于保證獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室抗體檢測工作的規(guī)范性[8]。在現(xiàn)有制度的基礎(chǔ)上進(jìn)行完善與創(chuàng)新，嚴(yán)格按照管理制度規(guī)范與落實(shí)各項(xiàng)工作，還可以將實(shí)驗(yàn)室監(jiān)督管理納入實(shí)驗(yàn)室人員績效考核中，在加強(qiáng)監(jiān)督力度的基礎(chǔ)上，促進(jìn)實(shí)驗(yàn)室檢測水平的提升。

4.3 加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室的硬件設(shè)備

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室在實(shí)際運(yùn)行過程中，需要有一定的硬件設(shè)施作為支撐，才能提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。這就需要相關(guān)政府部門的支持，加大對獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的資金支撐，為檢測工作的開展奠定基礎(chǔ)。政府部門要結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的具體情況進(jìn)行規(guī)劃，明確科室人員的職責(zé)，實(shí)現(xiàn)精細(xì)化分工，保證檢測工作高效進(jìn)行，并且要更新實(shí)驗(yàn)室的硬件設(shè)置，注重日常維修與管理，保證設(shè)備正常運(yùn)行，達(dá)到更高的檢測效率與質(zhì)量。

4.4 加大對實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)的控制

首先，在進(jìn)行抗體檢測過程中，樣本是檢測的基礎(chǔ)，實(shí)驗(yàn)室需保證樣本的準(zhǔn)確性與有效性。在采樣過程中，使用專業(yè)化水平較高的設(shè)備，按照一定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行采樣，實(shí)現(xiàn)快速采樣與存儲，為實(shí)驗(yàn)室檢測提供便利。

其次，選擇合適的實(shí)現(xiàn)試劑。不同的檢測項(xiàng)目，適合的檢測試劑不同，選擇便于存儲并且具有較高穩(wěn)定性的試劑，確保試劑的有效性。

最后，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)環(huán)境。只有將實(shí)驗(yàn)溫度與濕度控制在一定范圍內(nèi)才能達(dá)到最佳的實(shí)驗(yàn)檢測效果。

5 結(jié)束語

在獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開展抗體檢測過程中，影響檢測結(jié)果的因素較多，如免疫因素、樣品因素、實(shí)驗(yàn)因素以及人為因素等。針對不同的因素可采取相應(yīng)的應(yīng)對措施，重點(diǎn)是做好樣品收集與存儲工作，不斷提升工作人員的素質(zhì)，使其形成嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度，并做好實(shí)驗(yàn)室儀器維修與保養(yǎng)工作，減少不良因素的影響，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，推動(dòng)畜禽養(yǎng)殖業(yè)的長遠(yuǎn)發(fā)展。