1例豬流行性腹瀉病毒變異株引起仔豬腹瀉的診斷

韓竹平，王永茂

（貴州省綏陽(yáng)縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州綏陽(yáng) 563301）

在我國(guó)生豬飼養(yǎng)行業(yè)中，容易引起仔豬腹瀉的病毒性病原，是十分復(fù)雜多樣的，其中包含了豬細(xì)小病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬德塔冠狀病毒、豬偽狂犬病病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬輪狀病毒以及豬圓環(huán)病毒等，這些流行性腹瀉病毒感染仔豬后，所造成的病理變化以及臨床癥狀都是十分相似的。同時(shí)，需要注意的是，使用傳統(tǒng)的臨床診斷方法是無(wú)法對(duì)這些變異性病毒進(jìn)行確診的，對(duì)于相關(guān)疾病的預(yù)防也不夠及時(shí)。伴隨著生物技術(shù)的迅速發(fā)展，豬場(chǎng)以及相關(guān)工作人員一定要加強(qiáng)對(duì)于豬流行性腹瀉病毒變異株引起仔豬腹瀉的防控，進(jìn)而減少經(jīng)濟(jì)損失。

2020年10月初，某養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的仔豬爆發(fā)腹瀉疫情，臨床癥狀表現(xiàn)為極度消瘦、持續(xù)性嘔吐、腹瀉。排便呈黃色，后期呈黑色，死亡率極高。依據(jù)仔豬表現(xiàn)出的臨床特征，并對(duì)仔豬的小腸組織樣品進(jìn)行采集實(shí)驗(yàn)診斷后顯示，該疫情的爆發(fā)是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）變異株感染所引起的，關(guān)于該疾病的診斷以及治療過(guò)程筆者將分點(diǎn)來(lái)闡釋。

1 發(fā)病情況及病情介紹

1.1 發(fā)病情況

某養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)存欄母豬50 頭左右，在2020年10月初，部分欄舍仔豬出現(xiàn)了水樣腹瀉、嘔吐、食欲差等臨床癥狀，在當(dāng)時(shí)，養(yǎng)殖戶認(rèn)為是細(xì)菌感染造成的相關(guān)疾病產(chǎn)生，因而使用了恩羅沙星這種抗菌藥物進(jìn)行了治療，但是，起到的效果并不明顯，且在10日齡內(nèi)的仔豬死亡率達(dá)到90%以上[1]。且經(jīng)過(guò)筆者的調(diào)查了解，發(fā)現(xiàn)在該養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)，其他發(fā)育階段的豬群并未表現(xiàn)出相關(guān)的臨床癥狀，這就說(shuō)明在該養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)并不存在繁殖障礙性傳染病，如豬繁殖與呼吸綜合征或豬偽狂犬病等。

1.2 病情介紹

1.2.1 臨床癥狀和病理變化

發(fā)病豬群中，保育豬及仔豬所占比例較大，在發(fā)病時(shí)表現(xiàn)出脫水、腹瀉、畏寒以及消瘦等癥狀，在產(chǎn)床上仔豬的水樣糞便以及嘔吐物也較為常見(jiàn)。而相關(guān)工作人員通過(guò)對(duì)于瀕臨死亡或已經(jīng)死亡的仔豬進(jìn)行病理性解剖發(fā)現(xiàn)，仔豬出現(xiàn)了如腸內(nèi)有未消化的凝乳塊、腸壁變薄等明顯的病理性變化，但是這些變化主要體現(xiàn)在腸道上，其他的臟器并沒(méi)有明顯臨床癥狀的體現(xiàn)。通過(guò)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)豬群的臨床癥狀、病理變化以及發(fā)病特點(diǎn)等進(jìn)行觀察可以初步判定，在該養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)部爆發(fā)的腹瀉病可能由于傳染性胃腸炎病毒、輪狀病毒、流行性腹瀉病毒等導(dǎo)致的[2]。為了進(jìn)一步確認(rèn)養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)暴發(fā)疾病的真正原因，養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的相關(guān)工作人員將腹瀉仔豬送至當(dāng)?shù)啬侈r(nóng)業(yè)大學(xué)的動(dòng)物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了病原性診斷。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)室病原診斷

在該動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，將發(fā)病仔豬進(jìn)行了無(wú)菌解剖，將發(fā)病仔豬的小腸內(nèi)容物放入到無(wú)菌試管中，加入適量的PBS 滅菌溶液進(jìn)行充分混合，在混合均勻后，進(jìn)行反復(fù)3 次的凍融，然后進(jìn)行4℃的高速離心（13 000 r/min）5 min，取上清液，依照試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行DNA 以及RNA 的提取，在經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄入后得到cDNA（互補(bǔ)脫氧核糖核酸）。最后再將RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)）進(jìn)行應(yīng)用，對(duì)樣品進(jìn)行病原檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，檢測(cè)結(jié)果為PEDV（豬流行性腹瀉病毒）陽(yáng)性，而關(guān)于PRoV（豬輪狀病毒）以及TGEV（豬傳染性胃腸炎病毒）的檢測(cè)則呈現(xiàn)陰性。為了進(jìn)一步確認(rèn)養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的PEDV（豬流行性腹瀉病毒）病毒是否是變異毒株，實(shí)驗(yàn)室的工作人員挑選了1 個(gè)樣品，將這個(gè)樣品中的S1 基因高變區(qū)序列進(jìn)行了測(cè)序和擴(kuò)增，同時(shí)，把獲得的序列進(jìn)行了Blast（同源性分析）分析。分析結(jié)果顯示，擴(kuò)增后的PEDV（豬流行性腹瀉病毒）毒株，它的S1 基因部分片段大小為1503 bp。Blast（同源性分析）分析顯示，擴(kuò)增后的PEDV（豬流行性腹瀉病毒）毒株與GenBank 中收錄的變異株，相似度達(dá)到97.2%到99.7%左右，而和PEDV CV777 疫苗株的同源性較低，僅有93%左右，這種結(jié)果的出現(xiàn)正說(shuō)明了該養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)流行的PEDV（豬流行性腹瀉病毒）毒株是變異株，養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的工作人員一定要對(duì)該毒株的防控與治療進(jìn)行及時(shí)的重視，進(jìn)而開(kāi)展相關(guān)的技術(shù)研究工作。

2 治療與防控

2.1 及時(shí)接種疫苗

經(jīng)過(guò)Blast（同源性分析）分析可以得出，在該養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)部的仔豬腹瀉是由于感染了PEDV（豬流行性腹瀉病毒）變異株所引起的，要有針對(duì)性的采取緊急措施進(jìn)行處理，進(jìn)而將豬群的死亡率進(jìn)行進(jìn)一步降低，以減少和挽回養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)損失[3]。疫苗接種的迅速開(kāi)展是十分重要的，在該養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)部給豬群接種的免疫腹瀉疫苗為腹瀉三聯(lián)活疫苗，而PEDV（豬流行性腹瀉病毒）疫苗株的來(lái)源是CV777毒株。但是，需要注意的是，當(dāng)前該養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)部爆發(fā)的是PEDV（豬流行性腹瀉病毒）變異株，這就說(shuō)明CV777 疫苗株對(duì)于變異株的限制以及對(duì)于豬群的保護(hù)是十分有限的。而如果在這個(gè)時(shí)候，豬群繼發(fā)其他類型的免疫抑制性疾病，就會(huì)使相關(guān)疫苗的接種效果較差，甚至?xí)a(chǎn)生豬群在接種CV777 疫苗株后，仍然出現(xiàn)爆發(fā)PED （豬流行性腹瀉）的現(xiàn)象。

因此，針對(duì)這種情況，明顯采用傳統(tǒng)的CV777疫苗株是不可行的，所以，養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)采用了由武漢科前生物股份有限公司研發(fā)生產(chǎn)，專門針對(duì)PEDV（豬流行性腹瀉病毒）變異株的兩種疫苗，即科腹凈（豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉二聯(lián)弱毒疫苗）以及科瀉寧（豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗）。這兩種疫苗經(jīng)過(guò)臨床實(shí)驗(yàn)顯示，對(duì)于PEDV（豬流行性腹瀉病毒）變異株的防治有良好的效果，具體的免疫防控措施，要及時(shí)參考疫苗生產(chǎn)廠家的建議，以便于促進(jìn)后續(xù)工作的進(jìn)行。

2.2 落實(shí)防控措施

養(yǎng)殖場(chǎng)要將相應(yīng)防控措施進(jìn)行貫徹落實(shí)，要及時(shí)對(duì)已經(jīng)無(wú)法挽回和救治的發(fā)病豬群進(jìn)行撲殺，然后進(jìn)行無(wú)害化處理。同時(shí)，要將健康豬群與發(fā)病豬群進(jìn)行隔離處置，并且要及時(shí)進(jìn)行免疫疫苗的注射。隨后要對(duì)整個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行衛(wèi)生與消殺處理，采用不同類型的消毒機(jī)進(jìn)行消毒制劑的拌和，及時(shí)對(duì)養(yǎng)殖器具、豬舍地面墻面、運(yùn)輸車、墊料等定期地進(jìn)行消殺工作的開(kāi)展。此外還要注意及時(shí)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)所有的飲水與飼料進(jìn)行病原檢測(cè)，在確保沒(méi)有PEDV（豬流行性腹瀉病毒）感染后，再進(jìn)行豬群的投飲和飼喂。在進(jìn)行投飲和飼喂的過(guò)程中，可以在飲用水中放入適量的食鹽或者多維，進(jìn)而防治豬群因腹瀉脫水而亡，也能夠促進(jìn)養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)豬群免疫力的進(jìn)一步提升。而在飼料中進(jìn)行適量阿莫西林類抗生素的拌入，也有助于防治繼發(fā)細(xì)菌感染的產(chǎn)生。

該養(yǎng)殖場(chǎng)在將以上的防控治療措施進(jìn)行充分落實(shí)后，回訪發(fā)現(xiàn)該養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的PED （豬流行性腹瀉）的現(xiàn)象明顯出現(xiàn)了改善，豬群中仔豬的感染率、發(fā)病率以及死亡率均呈現(xiàn)大幅下降的趨勢(shì)[4]。1 個(gè)月后，該養(yǎng)殖場(chǎng)的負(fù)責(zé)人表示在養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)，豬群出現(xiàn)腹瀉、嘔吐的情況明顯變少，即便出現(xiàn)腹瀉，一般也是由于細(xì)菌感染造成的，與PEDV（豬流行性腹瀉病毒）并無(wú)關(guān)聯(lián)。

3 結(jié)束語(yǔ)

養(yǎng)殖戶在進(jìn)行生豬養(yǎng)殖的過(guò)程中，仔豬其實(shí)是極易出現(xiàn)發(fā)熱、腹瀉等情況的，這些臨床癥狀在產(chǎn)生時(shí)，如果養(yǎng)殖人員沒(méi)有進(jìn)行及時(shí)的重視、干預(yù)與治療，疾病就會(huì)迅速蔓延至整個(gè)仔豬群中，進(jìn)而造成仔豬死亡率的上升。而導(dǎo)致仔豬產(chǎn)生腹瀉的原因是比較多的，如病毒感染、細(xì)菌感染等都會(huì)誘發(fā)此類癥狀。但是，大部分情況下，都是由于病原性感染所導(dǎo)致的，其中尤以病毒性感染最為常見(jiàn)，而其中能夠?qū)е伦胸i腹瀉的病毒多為PEDV（豬流行性腹瀉病毒）的感染。仔豬腹瀉在我國(guó)的養(yǎng)殖戶中分布是較為廣泛的，危害性也是極強(qiáng)的。我國(guó)在2010年將PEDV（豬流行性腹瀉病毒）變異株從暴發(fā)豬流行性腹瀉的養(yǎng)殖場(chǎng)中進(jìn)行了分離，它的基因序列與傳統(tǒng)的PEDV CV777 疫苗株存在著明顯的不同，使得即使接種了疫苗，養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)部仍然會(huì)爆發(fā)流行性腹瀉，十分不利于養(yǎng)殖行業(yè)的發(fā)展。因此，為有效防治豬流行性腹瀉的產(chǎn)生，養(yǎng)殖場(chǎng)可以選擇專門針對(duì)PEDV 變異株進(jìn)行研發(fā)生產(chǎn)的疫苗進(jìn)行免疫接種，以減少養(yǎng)殖場(chǎng)的損失。