特應(yīng)性皮炎患兒血清半乳糖凝集素-10和特異性IgE的關(guān)系

張 力，湯建萍

特應(yīng)性皮炎（atopic dermatitis，AD)也稱為特應(yīng)性濕疹，是一種常見的慢性和復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病[1-4]。根據(jù)世界衛(wèi)生組織全球疾病負擔倡議的數(shù)據(jù)，據(jù)估計AD影響全球至少2.3億人，是皮膚病中非致命疾病負擔的主要原因[2,5]。AD通常在兒童時期發(fā)展，并且具有廣泛的癥狀和體征，導(dǎo)致嚴重的功能障礙，限制了日常生活的能力和活動，并引起社會心理困擾[2,6]。此病病因與發(fā)病機制目前還不是很清楚。半乳糖凝集素-10（galectin-10）在哮喘，過敏性鼻炎和其他嗜酸粒細胞相關(guān)疾病的作用目前越來越受到關(guān)注。AD是常見的變態(tài)反應(yīng)性疾病，但很少有人研究galectin-10在AD中的意義。本研究主要探討galectin-10與AD及其與食物過敏之間的關(guān)系。

1 對象和方法

1.1 研究對象

患兒均來自2014年12月—2015年3月湖南省兒童醫(yī)院門診及住院的12歲以內(nèi)AD患兒137例，年齡8 d～12.67歲，年齡均值為（6.29±0.18）歲，其中男81例，女56例。所有患兒均符合Hanifin-Rajka AD診斷標準?；純杭凹议L自愿參加研究并簽署知情同意書。排除標準：10 d內(nèi)系統(tǒng)使用過糖皮質(zhì)激素或抗組胺類藥物，有寄生蟲感染史，有其他過敏性疾病和自身免疫性疾病等。

25例來自湖南省兒童醫(yī)院2014年12月—2015年3月及112例來自長沙市中心醫(yī)院2019年1月—2019年12月的12歲以內(nèi)的健康體檢兒童，年齡為8 d～12歲，平均年齡（7.45±0.16）歲，其中男80例，女57例。近期無感染、濕疹及變應(yīng)性疾病家族史，無呼吸系統(tǒng)疾病及免疫性疾病等，未使用過糖皮質(zhì)激素和免疫調(diào)節(jié)劑。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 患兒就診時接診醫(yī)師需進行仔細的體格檢查，并詳細記錄患兒的癥狀和體征?；純杭议L需認真填寫問卷調(diào)查，包括基本情況、出生情況、喂養(yǎng)方式、伴隨癥狀、個人史及家族過敏史、變態(tài)反應(yīng)性疾病史。

1.2.2 標本采集方法 抽靜脈血4 ml，其中1 ml檢測外周血嗜酸粒細胞，另3 ml置于一次性真空無促凝劑采血管內(nèi)，在37℃下凝血60 min，1 000 r/min離心機離心10 min分離血清，將血清分成4份，-20℃凍存。

1.2.3 AD病情評分 AD病情嚴重度分值標準參照歐洲AD特別工作組確定的濕疹面積及嚴重程度指數(shù)（EASI），觀察其主要癥狀（包括瘙癢、睡眠、皮損面積、皮損嚴重程度），記錄EASI評分。

1.2.4 分組 AD組根據(jù)牛奶或雞蛋sIgE升高與否，且排除塵螨sIgE升高者，分為食物sIgE升高組（n=38），食物sIgE正常組（n=81）。AD組根據(jù)塵螨sIgE升高與否，且排除牛奶或雞蛋sIgE升高者，分為塵螨sIgE升高組（n=17），塵螨sIgE正常組（n=82）。AD組根據(jù)不同年齡段分4組：＜1歲（n=55），1～3歲（n=33），3～7歲（n=35），＞7歲（n=14）。

1.2.5 檢測方法 ①血清sIgE檢測及結(jié)果判定：檢測試劑為德國Laboratorien GmbH生產(chǎn)FOOKEsIgE（免疫捕獲法）試劑盒。參考sIgE抗體檢測試劑盒說明書，通過Exl800酶標分析儀于450 nm波長處讀取吸光度（A）值，按照標準曲線讀取記錄樣本中血清sIgE抗體的濃度并進行分級。血清sIgE檢測結(jié)果的判斷見表1。②galectin-10檢測及結(jié)果判定：檢測試劑為美國Raybiotech生產(chǎn)人galectin-10酶聯(lián)免疫分析試劑盒，參考人galectin-10試劑盒說明書，在Exl800酶標分析儀建立標準曲線，讀數(shù)后根據(jù)樣品的A值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。③總IgE檢測及結(jié)果判定：檢測試劑為美國Biocheck公司生產(chǎn)的IgE檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法），參考IgE試劑盒說明書，在Exl800酶標分析儀建立標準曲線，讀數(shù)后根據(jù)樣品的A值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

表1 血清sIgE濃度分級標準

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS18.0軟件包對數(shù)據(jù)進行分析。計數(shù)資料用率、構(gòu)成比描述，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示描述，組間比較方差不齊性采用多個獨立樣本的秩和檢驗或行×列表卡方檢驗，組間兩兩比較采用兩個獨立樣本的秩和檢驗或四個表卡方檢驗。計量資料之間的相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)進行相關(guān)性分析，P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 AD患兒與健康體檢兒童血清galectin-10、外周血嗜酸粒細胞和總IgE的水平

AD組（137例）血清galectin-10、總IgE、外周血嗜酸粒細胞明顯高于健康對照組（137例），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001，P＜0.001，P＜0.05），（表2）。

表2 AD患兒與健康體檢兒童血清 galectin-10、總IgE和外周血嗜酸粒細胞水平比較 （ˉx ±s）

2.2 通過ROC曲線分析判斷血清galectin-10升高的標準

判斷血清galectin-10升高可以選擇靈敏度與特異度之和的最大截點對應(yīng)的界值作為判斷標準。采用SPSS18.0進行ROC曲線分析，結(jié)果顯示血清galectin-10 ROC曲線下的面積為0.778，標準誤為0.038，其95%的近似參考置信區(qū)間為（0.702，0.853）。按照《醫(yī)學統(tǒng)計學》（3版）教材上給出的判斷準則，其判斷血清galectin-10升高的正確度為中等水平。從ROC曲線分析可以得出當血清galectin-10的濃度值＞10 pg/ml時，有100%機會為AD患兒，當血清galectin-10的濃度值＜3 pg/ml時，僅有10%的機會為AD患兒，因此判斷血清galectin-10升高的標準為4～10 pg/ml（圖1）。

圖1 血清galectin-10的ROC曲線圖

采用SPSS18.0對數(shù)據(jù)進行ROC曲線分析，在galectin-10 4～10 pg/ml，綜合靈敏度和特異度，選擇兩者之和最大的截點作為界值，即血清galectin-10的結(jié)果為10 pg/ml，當血清galectin-10的值≥10 pg/ml被判斷為血清galectin-10升高，血清galectin-10＜10 pg/ml被判斷為血清galectin-10正常（表3）。

表3 分析判斷血清galectin-10升高的標準

2.3 AD食物sIgE升高組與AD食物sIgE正常組外周血嗜酸粒細胞和血清galectin-10水平

AD食 物sIgE升 高 組 血 清galectin-10陽 性 率（79%）高 于 食 物sIgE正 常 組（58%）（χ2=4.958，P=0.026，P＜0.05）。AD食物sIgE升高組外周血嗜酸粒細胞計數(shù)升高的陽性率（68%）高于食物sIgE正常組（47%）（χ2=4.813，P=0.028，P＜0.05）（表4）。

表4 AD食物sIgE升高組和正常組患兒血清galectin-10水平和外周血嗜酸粒細胞計數(shù)比較 [例（%）]

2.4 AD塵螨sIgE升高組與AD塵螨sIgE正常組外周血嗜酸粒細胞和血清galectin-10水平

AD塵螨sIgE升高組血清galectin-10陽性率（41%）與正常組（50%）間無差異（χ2=0.447，P=0.504，P＞0.05）。AD塵螨sIgE升高組外周血嗜酸性粒細胞陽性率（41%）和正常組（44%）無差異（χ2=0.043，P＞0.05）（表5）。

表5 AD塵螨sIgE升高組和正常組患兒Galectin-10水平、外周血嗜酸粒細胞計數(shù)比較 [例(%)]

2.5 不同年齡組AD患兒血清galectin-10水平

血清galectin-10的陽性率隨著患兒年齡增長逐漸下降（χ2=16.703，P=0.001，P＜0.05），見表6。

表6 不同年齡組AD兒童血清galectin-10水平 [例(%)]

2.6 AD患兒血清galectin-10水平、外周血嗜酸粒細胞計數(shù)與EASI評分的關(guān)系。

本研究參照歐洲AD特別工作組確定的EASI系統(tǒng)對137例AD患兒進行疾病活動評分，評分均值為（16.785±7.523）分（1.40～30.80分）。因為本研究數(shù)據(jù)方差不齊且非正態(tài)分布，故采用SPSS18.0中的Spearman秩相關(guān)進行AD患兒血清galectin-10、外周血嗜酸粒細胞與EASI的相關(guān)性分析。結(jié)果血清galectin-10水平與EASI評分兩者之間呈正相關(guān)（r=0.216，P＜0.05），隨著EASI評分的增高，血清galectin-10水平相應(yīng)升高。同時將AD外周血嗜酸粒細胞計數(shù)與EASI評分進行相關(guān)性分析，也發(fā)現(xiàn)兩組之間呈正相關(guān)（r=0.385，P＜0.05），隨著EASI評分的增高，外周血嗜酸粒細胞計數(shù)相應(yīng)升高。

2.7 AD患兒血清galectin-10水平與外周血嗜酸粒細胞計數(shù)、雞蛋和牛奶sIgE的關(guān)系。

因為本研究數(shù)據(jù)方差不齊且非正態(tài)分布，故采用SPSS18.0中的Spearman秩相關(guān)對galectin-10水平，雞蛋、牛奶sIgE以及外周血嗜酸粒細胞計數(shù)進行相關(guān)性分析。AD患兒血清galectin-10與外周血嗜酸粒細胞兩者之間呈正相關(guān)（r=0.207，P＜0.05），隨著外周血嗜酸粒細胞計數(shù)的升高，血清galectin-10水平的值相應(yīng)升高。AD患兒血清galectin-10水平與雞蛋sIgE兩者之間呈正相關(guān)（r=0.222，P＜0.05），隨著雞蛋sIgE值的升高，血清galectin-10水平相應(yīng)升高。AD患兒血清galectin-10水平與牛奶sIgE兩者之間呈正相關(guān)（r=0.218，P＜0.05），隨著牛奶sIgE值的升高，血清galectin-10水平相應(yīng)升高。

3 討論

galectin-10作為嗜酸粒細胞疾病的生物標志物，甚至是潛在的藥物靶標[7]越來越受到高度重視。例如嗜酸性食管炎[8]；AD[9]；過敏性鼻炎[10]；哮喘[11]。

本研究發(fā)現(xiàn)血清galectin-10 AD組為（29.736±18.385）pg/ml，明顯高于健康對照組（8.057±3.328 pg/ml），P＜0.001，與EASI評 分 之 間 呈 正 相 關(guān)（r=0.216，P＜0.05），隨著EASI評分的增高，血清galectin-10水平相應(yīng)升高。這與Noh[9]的研究是一致的。后者的研究表明，與健康對照組相比AD患兒的galectin-10血清水平升高，并且其水平與AD嚴重程度呈正相關(guān)，這一發(fā)現(xiàn)提供了galectin-10作為疾病生物標志物的可能性。另Noh的研究表示在免疫組化染色中，galectin-10在AD皮膚中高表達，而在正常皮膚中幾乎檢測不到，有趣的是在存在galectin-10的真皮區(qū)域附近也觀察到了明顯的棘皮癥，而表皮棘皮病是慢性AD病變的標志[9]。Rossana等[12]在過敏患者的活檢中觀察到的galectin-10，進一步證實galectin-10與AD有關(guān)。血清galectin-10可作為AD疾病活動性的參考指標之一。

AD經(jīng)常與食物過敏有關(guān)。本研究結(jié)果示AD組患兒血清總IgE明顯高于健康對照組，且與AD嚴重程度呈正相關(guān)。正如Kiiski 等[13]報道總血清 IgE 水平和特異性 IgE與AD嚴重程度顯著相關(guān)；Somani[14]報道 88%的AD患者血清 IgE 水平升高；薛如君等[15]報道AD 血清 IgE 水平和嗜酸粒細胞計數(shù)有不同程度的升高，血清 IgE 對評 估 AD 的嚴重程度及治療有重要的價值，但不是診斷 AD 所必需。食物過敏涉及 IgE 和非 IgE 介導(dǎo)途徑的激活，幾種細胞類型參與其中，包括嗜酸粒細胞，CD4+T淋巴細胞和肥大細胞有助于過敏反應(yīng)，特別是嗜酸粒細胞的數(shù)量明顯增加，嗜酸粒細胞聚積在過敏反應(yīng)的病灶中，并且其顆粒含有促發(fā)過敏反應(yīng)的廣譜促炎遞質(zhì)[16]。一項韓國的研究顯示，外周血嗜酸粒細胞的增高可以作為一項預(yù)測指標，評估由食物引起的AD；研究表明牛奶引起的AD患兒避免食用牛奶后，嗜酸粒細胞明顯下降[17]。

本研究外周血嗜酸粒細胞AD組高于健康對照組，與AD病情活動有關(guān)，且與食物過敏有關(guān)，這些均進一步證實嗜酸粒細胞參與了食物過敏。galectin-10是來自健康供體的嗜酸粒細胞中最豐富的蛋白質(zhì)之一[18]，免疫熒光染色顯示 galectin-10 集中在嗜酸粒細胞外圍細胞質(zhì)區(qū)域，距質(zhì)膜寬 250 nm[12]。本研究提示嗜酸粒細胞計數(shù)與galectin-10水平呈正相關(guān)，那么galectin-10與食物過敏是否有關(guān)聯(lián)？數(shù)據(jù)分析顯示AD組牛奶、雞蛋sIgE與galectin-10水平呈正相關(guān)。AD食物sIgE升高組galectin-10陽性率高于正常組，AD塵螨sIgE升高、正常AD組galectin-10陽性率無明顯差異，可能是因為：①本研究所示galectin-10陽性率隨著年齡增長逐漸下降，這與食物性過敏原陽性率逐漸降低類似，但與吸入性過敏原陽性率逐漸增高相反[19]。②2018年廣州地區(qū)的一項研究提示戶塵螨及粉塵螨陽性率高峰出現(xiàn)在7～16歲組[20]，而本研究主要研究對象為7歲以內(nèi)患兒，塵螨sIgE陽性例數(shù)不多。因此，本研究提示AD患兒血清galectin-10可能與食物過敏有關(guān)。

綜上所述，血清galectin-10與外周血嗜酸粒細胞一樣，與AD的發(fā)病有關(guān)，與AD的疾病活動評分呈正相關(guān)，提示可作為AD疾病活動性的參考指標之一。同時發(fā)現(xiàn)血清galectin-10與食物sIgE升高有關(guān)，而與塵螨sIgE升高無關(guān)。血清galectin-10隨著年齡增長陽性率逐漸下降，與食物sIgE陽性率隨著年齡增長而下降一致，提示血清galectin-10可能與AD 患者食物過敏有關(guān)。但galectin-10不僅在嗜酸粒細胞上表達，并在嗜堿粒細胞、CD4+CD25+Treg細胞內(nèi)也有表達，galectin-10增加在AD發(fā)病中發(fā)揮作用，但關(guān)于galectin-10來源需要更進一步的研究。