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    慢性輸卵管炎動物模型建立方法的研究進展

    2021-03-26 19:07:21朱博玉黃葉芳
    當代醫(yī)藥論叢 2021年17期
    關鍵詞:輸卵管炎衣原體動物模型

    朱博玉,黃葉芳,劉 柔,曹 雪,王 妍

    (成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院,四川 成都 610075)

    慢性輸卵管炎多由急性輸卵管炎遷延不愈所致。輸卵管若長時間地受到炎癥反應的刺激,可發(fā)生粘連及阻塞,導致輸卵管炎性不孕(tubal inflammatory infertility,TII)。通過進行動物實驗研究慢性輸卵管炎的發(fā)生發(fā)展規(guī)律,可為臨床上治療該病提供豐富的理論依據(jù)及思路。建立動物模型是進行動物實驗的基礎。目前,臨床上用于建立慢性輸卵管炎動物模型的方法可分為化學性方法和生物性方法兩種類型。其中,化學性方法以苯酚膠漿法為代表,生物性方法則是通過為實驗動物接種衣原體、支原體、大腸桿菌及金黃色葡萄球菌等病原微生物來進行造模。本文就慢性輸卵管炎動物模型建立方法的研究進展綜述如下。

    1 用化學性方法建模

    建立慢性輸卵管炎動物模型的化學性方法以苯酚膠漿造模法為代表。苯酚具有腐蝕性,能化學燒傷正常的組織結構,引發(fā)局部炎癥反應。在上個世紀70年代,臨床上將苯酚作為黏堵劑阻塞輸卵管,以達到絕育的目的。目前,臨床上仍沿用該思路用苯酚制作慢性輸卵管炎的動物模型。在不同的研究中,用于制作苯酚膠劑的藥物及其配比不完全相同,但大都是由苯酚加各種賦形劑制作而成的。申旭霽等[1]將大鼠麻醉后,向其雙側的輸卵管中各注射 0.05 mL濃度為25%的苯酚膠漿。術后,大鼠輸卵管的管腔明顯阻塞,留存大量的液體,其輸卵管的管壁變薄,并與周圍的組織發(fā)生粘連。對大鼠的輸卵管進行組織病理學檢查的結果可見,其輸卵管黏膜的上皮細胞發(fā)生增生、變性及壞死,其輸卵管黏膜的固有層出現(xiàn)炎性浸潤,其血液流變學指標也發(fā)生顯著的變化。谷風[2]采用苯酚膠漿法制備慢性輸卵管炎大鼠模型。在造模后第22天,模型組大鼠輸卵管組織細胞的胞漿、間質(zhì)細胞中的黃染顆粒明顯多于正常組大鼠。徐昕[3]用苯酚糊劑制備慢性輸卵管炎大鼠模型。造模1個月后,模型組大鼠輸卵管的色澤蒼白、管腔的粗細不均,并與周圍組織發(fā)生不同程度的粘連,提示造模成功。王清等[4]為了對比經(jīng)不同的途經(jīng)用中藥治療慢性輸卵管炎的療效,在對2只新西蘭雌兔進行預實驗時為其注射復方苯酚糊劑。術后4周,對這2只雌兔進行光鏡檢查的結果顯示,在其4條輸卵管中,有3條輸卵管內(nèi)形成異物肉芽腫,并阻塞管腔,有1條輸卵管內(nèi)出現(xiàn)局灶性炎性細胞浸潤。這表明,用苯酚糊劑制備的慢性輸卵管炎動物模型可模擬女性輸卵管發(fā)生炎性改變后出現(xiàn)的管腔阻塞或部分阻塞的病理變化情況。

    由此可見,以苯酚膠劑為致炎劑建立慢性輸卵管炎動物模型操作簡便、容易控制,研究人員無被感染的風險。而且,用該材料建立的動物模型可較好地模擬女性輸卵管炎的病理學變化情況。不過,由于用該材料建立動物模型的機制是利用化學物質(zhì)的刺激作用直接引起炎癥反應,與實際情況中由病原體感染致病的發(fā)病機制有所差別,故其不如生物性方法的使用廣泛。

    2 用生物性方法建模

    2.1 金黃色葡萄球菌建模法

    金黃色葡萄球菌是常見的食源性致病菌,能在各種惡劣的環(huán)境中存活下來。該菌也是導致輸卵管感染發(fā)生的常見菌種。徐桂中等[5]將小鼠開腹后,向其輸卵管(近卵巢方向)緩慢地注入1×109/mL的金黃色葡萄球菌懸液。術后第45 d,造模小鼠輸卵管的通暢率低于對照組小鼠,其輸卵管的肉眼外觀、光鏡結構變化均呈慢性炎癥的表現(xiàn),其受孕率明顯低于對照組小鼠。胡喜姣等[6]將大鼠麻醉后開腹,向其腹中注入4×109/mL的金黃色葡萄球菌懸液,并在注射完的第7 d、第14 d、第21 d、第28 d分別將其處死,然后肉眼觀察其輸卵管的形態(tài)改變情況,并對其輸卵管組織進行金黃色葡萄球菌培養(yǎng)及病理學檢查。研究結果證實,用金黃色葡萄球菌可在7 d制備完成急性輸卵管炎動物模型,在21 d制備完成慢性輸卵管炎動物模型,在28 d制備完成TII動物模型。

    2.2 大腸埃希菌建模法

    大腸桿菌通常寄居在人體的腸道中,并不致病。當該菌進入輸卵管等生殖系統(tǒng)時,可引起炎癥反應[7]。李莉等[8]將小鼠開腹后,向其子宮角近卵巢的部位輸注大腸桿菌懸液。輸注完30 d后,將小鼠處死,在鏡下觀察其輸卵管,可見其輸卵管的管壁增厚、結構被破壞,輸卵管黏膜中的間質(zhì)細胞減少,輸卵管內(nèi)膜及肌層出現(xiàn)大量的炎性細胞浸潤。馮子聰?shù)萚9]對比用單一的大腸埃希菌混懸液和混合菌液(按照2:1:1的比例將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌及鏈球菌混合)經(jīng)陰道、宮腔插管灌注建立慢性輸卵管炎兔模型的效果。結果顯示,兩組實驗兔的輸卵管均呈現(xiàn)典型的慢性炎癥的表現(xiàn)。但用混合菌混懸液制備的兔模型更符合細菌逆行感染輸卵管的實際情況。用單一的大腸埃希菌建模則具有操作簡便、經(jīng)濟實用等優(yōu)點。

    2.3 衣原體和支原體建模法

    慢性輸卵管炎的發(fā)生與患者存在解脲支原體感染、沙眼衣原體感染及解脲支原體聯(lián)合沙眼衣原體感染均具有密切的相關性[10]。利用解脲支原體與沙眼衣原體建立的動物模型也符合慢性輸卵管炎實際的動態(tài)發(fā)展過程。Zhang Yu yang等[11]對發(fā)生沙眼衣原體感染的小鼠進行持續(xù)性的炎癥刺激,以研究子宮輸卵管交界處在預防衣原體上行感染中的作用。劉麗等[12]通過在小鼠的陰道內(nèi)接種沙眼衣原體建立動物模型。在接種完22 d后處死小鼠,對其輸卵管進行光鏡觀察。結果顯示,小鼠輸卵管的纖毛功能受損,并出現(xiàn)結締組織增生、炎癥細胞浸潤等慢性炎癥的表現(xiàn)。

    2.4 混合菌建模法

    混合菌建模法是指用大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌及鏈球菌混合制成感染致炎劑,以達到制備動物模型的目的。該建模法具有造模的成功率高、原料比支原體、衣原體易獲得等優(yōu)點,成為目前常用的造模方法。趙廣興[13]按照2:1:1的比例將大腸埃希菌、金葡菌、鏈球菌用無菌生理鹽水稀釋后,配制成混合菌懸濁液,并將其注入大鼠子宮角近輸卵管部。注射完20 d后,模型組大鼠輸卵管的組織形態(tài)出現(xiàn)慢性炎癥的表現(xiàn),并發(fā)生不孕。該方法成為建立慢性輸卵管炎動物模型的常用方法。周波文[14]考慮到趙廣興打開大鼠腹腔、注入感染液造模的方法操作難度較大,對無菌條件的要求較高,對動物的損傷大,故使用更簡便易行的經(jīng)陰道注菌法進行建模。在注菌后第20 d,即可觀察到炎癥細胞擴散至大鼠的整個輸卵管。

    3 用病證結合的方法建模

    用中醫(yī)藥治療慢性輸卵管炎的優(yōu)勢明顯。隨著現(xiàn)代中醫(yī)學研究的不斷發(fā)展,可反映中醫(yī)特色的病證結合造模法也日漸完善。王婷婷等[15]使用混合菌(按照2:1:1的比例將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌及鏈球菌混合)建立慢性輸卵管炎動物模型后,對實驗動物進行分組,然后分別對其進行光電刺激、夾尾、皮下注射腎上腺素操作,從而模擬氣滯血瘀型輸卵管炎大鼠的證候。鄭悅[16]、鄧天琦[17]使用金黃色葡萄球菌聯(lián)合應激刺激(包括聲、光、電及夾尾刺激)成功建立氣滯血瘀型輸卵管炎大鼠模型。顧仁艷[18]先將大鼠浸入冰水中5 min,制備血瘀型大鼠模型,再聯(lián)合苯酚糊劑建立血瘀型輸卵管炎大鼠模型。

    4 小結與展望

    慢性輸卵管炎可引起不孕。對該病患者的病情進行及時準確的診治對于改善其生活質(zhì)量具有重要的意義。建立有效的動物模型是進一步探討慢性輸卵管炎致病機制、臨床表現(xiàn)及特征的基礎,故相關的研究人員越來越重視對建模方法的研究。成功的慢性輸卵管炎動物模型應盡可能地模擬女性輸卵管炎的發(fā)病過程。因此,單純利用苯酚膠劑等化學物質(zhì)的刺激建立動物炎癥模型的建模方法在臨床上的使用逐漸減少。隨著臨床上對解脲支原體、沙眼衣原體等病原體研究的逐漸深入,病原體感染建模法成為研究的熱點。近年來,病證結合建模法獲得快速發(fā)展,但尚缺乏統(tǒng)一的評價體系。另外,在使用各種生物活性物質(zhì)建立動物模型時,均應嚴格控制病原體的數(shù)量及其流動情況,以保證實驗人員的安全。

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