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    不規(guī)則抗體陰性受血者直接抗人球蛋白試驗陽性的特征分析及類型鑒別

    2021-03-26 05:15:19朱潔好李伙桂林楚霞葉伙梅廖銀梅陳浩峰梁慧宇
    檢驗醫(yī)學(xué)與臨床 2021年11期
    關(guān)鍵詞:受血者紅細胞凝膠

    朱潔好,李伙桂,林楚霞,葉伙梅,廖銀梅,陳浩峰,梁慧宇

    廣東省云浮市人民醫(yī)院:1.輸血科;2.感染科;質(zhì)控科,廣東云浮 527300

    直接抗人球蛋白試驗(DAT)是一種簡單易行的試驗,用于檢測紅細胞在體內(nèi)是否被免疫球蛋白和(或)補體致敏。在臨床上,DAT主要用于溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病(HDNF)、自身免疫性溶血性貧血(AIHA)以及藥物誘導(dǎo)的溶血反應(yīng)的診斷。DAT結(jié)果陽性可能與免疫介導(dǎo)的溶血反應(yīng)相關(guān)或不相關(guān)[1]。在實際工作中,常常遇到不規(guī)則抗體陰性而交叉配血次側(cè)凝集的現(xiàn)象,此類現(xiàn)象往往與受血者DAT陽性有關(guān)。本研究對此類患者的特征、DAT陽性類型進行了探討,現(xiàn)報道如下。

    1 資料與方法

    1.1一般資料 2019年9月至2020年4月在本院進行不規(guī)則抗體篩查,結(jié)果為陰性的受血者共2 066例。將其中交叉配血次側(cè)凝集的受血者72例納入研究作進一步分析,這72例受血者中男44例、女28例,年齡11個月至89歲,中位年齡為66歲。

    1.2儀器與試劑 微柱凝膠血型卡、微柱凝膠抗人球卡由珠海貝索公司生產(chǎn),ABO標準細胞由上海血液生物醫(yī)藥公司生產(chǎn),抗人球蛋白(抗IgG、抗C3d)檢測卡由江蘇力博醫(yī)藥生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn),以上試劑均在有效期內(nèi)使用。檢測儀器包括血型血清學(xué)離心機(Centrifuge 12 SⅡ)、孵育器(Incubator 37 SI)、CU600型電熱恒溫水箱、北京白洋BY-120A離心機、CU600型電熱恒溫水浴箱。

    1.3方法

    1.3.1DAT 對交叉配血次側(cè)凝集受血者行DAT。將EDTA抗凝血標本以3 500 r/min離心1 min后取10 μL壓積紅細胞,加入1 mL生理鹽水配制成1%的紅細胞懸液,取50 μL加至抗人球蛋白檢測卡(微柱凝膠法)中,37 ℃孵育15 min,血型血清學(xué)離心機離心10 min,肉眼觀察結(jié)果。如結(jié)果為陽性,作DAT分型檢測,在DAT分型卡IgG、C3d及對照(Ctrl)孔3孔中分別加入50 μL的1%紅細胞懸液,37 ℃孵育15 min,血型血清學(xué)離心機離心10 min,肉眼觀察結(jié)果。結(jié)果判斷:如果紅細胞全部分布在凝膠上端,凝膠下端清澈透明,表示陽性4+;如果紅細胞大部分分布在凝膠中上段,凝膠下端有清晰透明液體,則表示陽性3+;如果紅細胞大部分分布在中上段,下端也有部分紅色液體,則表示陽性2+;如果紅細胞大部分分布在凝膠下端,只有少量分布在上端,則表示陽性1+。

    1.3.2熱放散試驗 對DAT陽性標本進行熱放散試驗,將EDTA抗凝血標本以3 500 r/min離心1 min,移除全部血漿,剩下的壓積紅細胞用鹽水洗滌5~6次,末次洗滌時去掉上清液后加與壓積紅細胞等量的鹽水,然后置于45 ℃水浴箱放散10~15 min,期間輕輕振搖。放散后取出離心,用上清液進行抗體篩查。

    1.3.3輸血療效的評估 紅細胞輸注療效分為輸注有效、輸注部分有效、輸注無效?;颊咻斪⒓t細胞后24 h內(nèi)檢測血紅蛋白(Hb),輸注每單位紅細胞后Hb增量不低于5 g/L×60/患者體質(zhì)量(kg)為輸注有效;輸注后Hb不高于輸注前水平為輸注無效;輸注后Hb高于輸注前水平,但其增量低于5 g/L×60/患者體質(zhì)量(kg)為輸注部分有效[2]。

    1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS26.0軟件進行統(tǒng)計分析,計數(shù)資料以百分率或頻數(shù)表示,組間比較采用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    72例不規(guī)則抗體篩查陰性交叉配血次側(cè)凝集的受血者均為DAT陽性,在不同Hb水平區(qū)間的分布:Hb<40 g/L,占5.56%(4/72);Hb 40~50 g/L,占9.72%(7/72);Hb>50~60 g/L,占40.28%(29/72),所占比例最高(P<0.05);Hb>60~70 g/L占27.78(20/72);Hb>70~80 g,占16.67%(12/72)。上述72例受血者既往輸血次數(shù)的分布:輸血次數(shù)≥3次,占37.50%(27/72),所占比例最高(P<0.05);輸血次數(shù)1~<3次,占33.33%(24/72);輸血次數(shù)為0,占29.17%(21/72)。輸血療效的分布:輸注有效占79.17%(57/72),輸注部分有效的占15.28%(11/72),輸注無效的占5.56%(4/72)。DAT陽性類型的分布:單純IgG型占91.67%(66/72),IgG+C3d型占2.78%(2/72),分型未果占5.56%(4/72)。

    將上述72例受血者的DAT陽性標本行熱放散試驗后再進行抗體篩查,結(jié)果為全陰性的占79.17%(57/72),全陽性的占15.28%(11/72),抗體篩查有反應(yīng)格局的占5.56%(4/72)。

    3 討 論

    Coombs試驗又稱為DAT,是目前診斷貧血的主要方式,也是診斷AIHA最直接的證據(jù)之一。但是,在一些腎病、肝病、腫瘤患者行輸血前相容性檢測時,常常出現(xiàn)DAT陽性的現(xiàn)象。有資料表明,住院患者DAT陽性率高達8%,而健康人群的陽性率為0.1%[3]。本研究的2 066例不規(guī)則抗體陰性的受血者中,交叉配血次側(cè)凝集的標本有72例,均為DAT陽性,DAT陽性率為3.48%,這與梅城等[3]的研究結(jié)果相近。本研究的72例受血者在不同Hb水平區(qū)間的分布有明顯不同,其中Hb>50~60 g/L所占比例最高,與文獻[4-5]的報道一致;有多次輸血史者所占比例明顯高于無輸血史者,這可能與患者反復(fù)輸血產(chǎn)生意外抗體或免疫功能受損有關(guān)。

    導(dǎo)致DAT陽性的主要原因有紅細胞固有抗原自身抗體、溶血性輸血反應(yīng)、胎兒及新生兒溶血性疾病、藥物誘導(dǎo)的抗體、被動獲得的同種抗體、非特異性吸附的蛋白、過客淋巴細胞產(chǎn)生的抗體以及由于細菌感染、自身抗體或同種抗體引起的補體激活[1]。盡管本研究中大部分的DAT陽性受血者輸血有效,但輸血部分有效及輸血無效分別占了15.28%及5.56%,可見DAT陽性對臨床輸血治療效果有一定的影響,應(yīng)注意去除造成DAT陽性的因素,以保障貧血患者的有效輸血[5]。

    本研究中,DAT陽性分型以單純IgG型為主(占91.67%),這比文獻[3-6]的報道稍高,分析原因:(1)血清中IgG水平較高且與自身抗原的親和力強;(2)本研究中的血液病患者不多;(3)本研究中采用的抗人球蛋白卡僅能檢測IgG和C3d,不能檢測IgA、IgM。分型中未見單純C3d型,因為單純C3d型主要見于IgM性質(zhì)的冷凝集素綜合征,冷凝集素綜合征常常影響抗體篩查結(jié)果[7];而本研究納入的人群主要是抗體篩查陰性而DAT陽性的患者。2例分型呈IgG+C3d型,均為反復(fù)輸血的血液病患者。筆者分析,微柱凝膠法DAT快速而敏感,但也容易受免疫球蛋白等因素影響而致假陽性的出現(xiàn),也可能與標本紅細胞檢測前未進行洗滌有關(guān)[8]。

    本課題組對DAT陽性的標本進行熱放散試驗,發(fā)現(xiàn)79.17%的標本熱放散試驗呈陰性,說明這類受血者大多數(shù)為非AIHA患者。非AIHA患者的DAT陽性通常與血清球蛋白增高有關(guān),常見于長期低清蛋白血癥的患者。此類患者用微柱凝膠法配血時通常須結(jié)合聚凝胺法配血、DAT試驗及抗體熱放散試驗結(jié)果,輸注普通懸浮紅細胞是安全有效的[9]。研究中有15.28%的標本熱放散試驗呈抗體篩查全陽性,這種現(xiàn)象最常見于自身抗體陽性的患者。自身抗體是由于機體免疫調(diào)節(jié)功能紊亂而產(chǎn)生的,此類患者配血時微柱凝膠法及聚凝胺法均會出現(xiàn)次側(cè)凝集,但凝集強度均弱于DAT的凝集強度。DAT分型及熱放散試驗有助于分析DAT陽性的原因,若放散液只檢出自身抗體,并且患者近期沒有輸血,就沒有必要做深入的血清學(xué)檢查[1]。但須重視此類自身抗體導(dǎo)致DAT陽性的原因,及時查找并去除病因,才能讓輸血治療更有效。有研究中有5.56%的受血者放散液抗體篩查有反應(yīng)格局,盡管由于放散液太少未能進行抗體鑒定,但卻證明了同種抗體存在的可能性。放散液抗體篩查有格局的4例患者中,有3例為反復(fù)輸血的血液病患者,他們的不規(guī)則抗體篩查一直呈陰性,DAT卻從原來的陰性轉(zhuǎn)變成陽性。當(dāng)受血者體內(nèi)產(chǎn)生的免疫性抗體數(shù)量較少,就可能都被吸附到受血者的紅細胞上,導(dǎo)致血清中無法檢測到,但能通過熱放散試驗檢測到。也就是說,DAT陽性標本通過熱放散試驗可以發(fā)現(xiàn)血清中沒有的抗體,在給此類患者輸注紅細胞制品時,應(yīng)當(dāng)避開這些抗體相應(yīng)的抗原,否則輸血可使患者溶血反應(yīng)加重[10]。

    綜上所述,對于不規(guī)則抗體陰性而DAT陽性的受血者,尤其是一些有反復(fù)輸血史的、DAT由陰性轉(zhuǎn)為陽性的患者,最好能進行DAT陽性類型鑒別,并結(jié)合患者的臨床情況進行全面分析,從而為臨床輸血治療方案提供依據(jù),提高輸血的安全性及有效性。

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