結核感染T細胞及結核抗體檢測在女性生殖器結核診斷中應用研究

孫秀利 李妘

(1.陜西省結核病防治院(陜西省第五人民醫(yī)院)，陜西 西安 710100；2.漢中市中心醫(yī)院婦科，陜西 漢中 723000)

女性生殖器結核的臨床診斷，主要依賴于細菌學檢驗[1]。傳統(tǒng)檢驗方式診斷敏感性難令人滿意，診斷結果方面難以區(qū)分非結核分歧桿菌、活菌與死菌[2]?，F有研究表明，結核抗體檢測(TB-Ab)與結核感染T細胞斑點實驗(T-SPOT.TB)均可運用于結核病的臨床診斷中，提供較佳的診斷效能[3]。本文淺析在女性生殖器結核診斷中采用結核抗體檢測(TB-Ab)與結核感染T細胞斑點實驗(T-SPOT.TB)的診斷價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2018年01月至2019年12月我院收治疑似生殖器結核的62例女性患者臨床病案資料作研究樣本，年齡19～41，平均年齡(27.62±4.16)歲；其中無生育史38例，有生育史24例；發(fā)熱、咳嗽等癥狀出現至就診時間7 d～20 d，平均就診時間(13.43±3.82)d；其中結核病史8例，接觸史3例，甲亢史1例，腎積水史1例。研究已上報本單位倫理委員會并獲得批準，納入標準：所有患者經痰涂片、結核菌素試驗、影像學檢查、實驗室檢查、子宮內膜診刮病檢或盆腔手術切除標本病檢結果支持，最終評估疾病有無，作為金標準[4]；于本院接受檢查及后續(xù)治療，臨床病案資料保存完整；患者知情同意。排除標準：未接受TB-Ab+T-SPOT.TB檢查者；合并其他部位結核者；嚴重全身性感染者；禁忌癥人群。以上基線資料對比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1TB-Ab 經結核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測試劑盒(北京健乃喜生物技術有限公司)，采用基因工程制備的結核抗原和膠體金免疫層析技術，嚴格依照說明書進行操作。取患者血清50μl加入檢測卡上的樣本孔內，樣本中的結核抗體可與膠體金標記的抗原形成結核抗體-金標抗原復合物，因層析作用該復合物沿著試紙條向前移動，經T1檢測線時IgM抗體-金標抗原復合物與膜上包被的小鼠抗人IgM結合顯色，經T2檢測線時IgG抗體-金標抗原復合物與膜上包被的結核抗原結合顯色。膠體金標記的新西蘭白兔IgG在質控線處與膜上包被的山羊抗兔IgG結合而顯色，陰性樣本僅在質控線處顯色。

1.2.2T-SPOT.TB 使用結核分枝桿菌特異性細胞免疫反應檢測試劑盒(酶聯免疫吸附法)(?？诰S瑅璦生物研究院)，基于γ-干擾素(IFN-γ)釋放分析(IGRA)原理，判斷是否存在針對結核分枝桿菌的特異性T細胞反應。采集患者5 mL血液，肝素鈉抗凝，分裝到陰性對照N、陽性對照P與檢測T三種含有刺激抗原(通過基因工程技術修飾后表達成為刺激抗原的結核分枝桿菌特異性抗原ESAT-6和CFP-10)的培養(yǎng)管中，混合并孵育后經酶聯免疫法檢測特異性釋放的IFN-γ水平。當N<0.5時，若T-N/P-N≥0.16判為陽性，否則為陰性；當0.5≤N<2.5時，T-N≥1.5判為陽性，否則為陰性；當N≥2.5時，判為無法確定，建議復查。

1.3觀察指標 (1)陰/陽性：①真陰性：金標準與檢驗結果均提示陰性；②真陽性：金標準與檢驗結果均提示陽性；③假陰性：金標準提示陽性，但檢驗結果提示陰性；④假陽性：金標準提示陰性，但檢驗結果提示陽性。(2)準確率=(真陽性+真陰性)÷總例數×100%。(3)特異度=真陰性÷(假陽性+真陰性)×100%。(4)敏感度=真陽性÷(真陽性+假陰性)×100%。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SPSS 21.0軟件處理所得數據，計數資料以n(%)表示，行χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1TB-Ab診斷陰/陽性分布情況 62例受檢者中，陽性分布率85.48%(53/62)，陰性分布率14.52%(9/62)。本組真陽性41例，真陰性3例，假陽性6例，假陰性12例。

2.2T-SPOT.TB診斷陰/陽性分布情況 62例受檢者中，真陽性46例，真陰性5例，假陽性4例，假陰性7例。

2.3TB-Ab+T-SPOT.TB聯合診斷陰/陽性分布情況 62例受檢者中，真陽性51例，真陰性8例，假陽性1例，假陰性2例。

2.4不同檢測方案的準確率、特異度與敏感度比較 準確率、特異度與敏感度方面，均示TB-Ab+T-SPOT.TB高于T-SPOT.TB，T-SPOT.TB高于TB-Ab，且TB-Ab+T-SPOT.TB與其他兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

3 討 論

回顧以往結核病診斷，主要在于對痰液的細菌學檢測及相關影像學檢查[5-6]。痰涂片檢驗被視作金標準，但其弊端同樣存在，即送檢時間長，操作較繁瑣，不符合臨床救治原則[7]。加之結核往往起病隱匿，患者難以自知，因此一定程度加大臨床誤診率。

T-SPOT.TB能夠在病早期或以往存在感染的患者樣本中測得效應T細胞，具備較好的檢測敏感度，檢測效率高，一般24 h內可出結果。ESAT-6與CFP-10為結核分支桿菌復合群基因RD1區(qū)域rv3874與rv3875編碼的結核特異性蛋白抗原，只在少部分的致病性分支桿菌及結核分支桿菌復合群基因組中出現，在卡介苗菌株、多數非致病性分支桿菌基因組中缺失，故基于ESAT-6與CFP-10基礎之上設計而來的T-SPOT.TB檢測技術，其ESAT-6、CFP-10可視為結核分支桿菌特異性抗原，通過體外定量測定全血細胞被結核分支桿菌特異性抗原刺激后釋放的γ-干擾素水平，定性判斷其是否具有針對結核分支桿菌的特異性T細胞反應?；谏鲜鰴z測原理，該技術能夠有效降低卡介苗與多種環(huán)境結核分枝桿菌的交叉反應，故而該檢測技術的特異性更佳。兩種抗原的多肽制備聯用，進一步提升檢測的敏感度[8-9]。故該技術在女性生殖器結核疾病的檢測中價值高，值得應用。

TB-ab檢出效果不及T-SPOT.TB的原因主要是由于IgG抗體多在女性生殖器結核中晚期出現，早期診斷可能會存在漏診情況[10]，亦不排除與人體對致病菌的免疫應答反應有關。部分患者由于自身免疫功能出現異常，進而致其體內特異性結核抗體表達水平過低，檢測的準確性受其影響?；顒有耘陨称鹘Y核，患者體內結核抗原與特異性結核抗體結合，生成免疫復合物，加之試劑盒檢出效果能夠覆蓋的抗原表位不全，導致檢測效果失準[11]。

考慮到女性生殖器結核病T細胞淋巴因子分型復雜，細胞因子的反應可能受到所處環(huán)境的干預發(fā)生變化，因此T-SPOT.TB技術診斷疾病同樣有其局限性。本次研究結果顯示，TB-Ab+T-SPOT.TB聯合診斷的陰/陽性、準確率、特異度與敏感度均優(yōu)于T-SPOT.TB診斷，T-SPOT.TB診斷的上述指標又佳于TB-Ab診斷，提示女性生殖器結核診斷中，TB-Ab+T-SPOT.TB聯合診斷效能最高，進一步論證上述觀點的正確性。

綜上，TB-Ab+T-SPOT.TB聯合檢測在女性生殖器結核診斷中應用效果更好，其次為T-SPOT.TB診斷，推薦臨床使用聯合檢測。