急性冠脈綜合征病人血清miR-204、miR-9表達水平及臨床意義

邢 磊，焦穎華

急性冠脈綜合征是一種以冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂繼而引起完全性或非完全性血栓為特點的綜合征，包括不穩(wěn)定型心絞痛、急性ST段抬高型心肌梗死、急性非ST段抬高型心肌梗死，常見于老年人，危險因素包括年齡、血脂、血壓、吸煙等，以胸痛為主要臨床表現(xiàn)，其中冠狀動脈造影為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，主要治療方法包括經(jīng)皮冠狀動脈介入(percutaneous coronary intervention，PCI)、溶栓等[1]。相關(guān)研究表明，急性冠脈綜合征病人死亡率高，發(fā)病年齡趨于年輕化，因此，早期診斷急性冠脈綜合征具有重要的臨床意義[2]。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，分子診斷技術(shù)在臨床中的應(yīng)用越來越廣泛。miR-204是miRNA家族中的一員，有研究顯示，miR-204通過調(diào)控細胞凋亡等機制發(fā)揮保護心肌的作用[3]，避免心肌細胞損傷[4]。另有研究表明，miR-9與冠狀動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生密切相關(guān)[5]。但miR-204和miR-9與急性冠脈綜合征的發(fā)生發(fā)展是否相關(guān)，尚缺乏充分證據(jù)。本研究通過測定miR-204與miR-9相對表達量，探討miR-204和miR-9在急性冠脈綜合征病人血清的表達及臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月—2018年12月因胸痛于我院心內(nèi)科就診的急性冠脈綜合征病人63例作為觀察組，年齡40～65歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：于心內(nèi)科行冠狀動脈造影明確診斷為急性冠脈綜合征；向病人說明研究目的及相關(guān)風(fēng)險后，簽署知情同意書，本研究通過醫(yī)院倫理委員會審查。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有肝腎功能障礙、惡性腫瘤、凝血功能障礙、感染性疾病、免疫系統(tǒng)疾病等；先天性心血管系統(tǒng)疾病、心源性休克、嚴(yán)重性心力衰竭等；血壓≥180/110 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，未按時服用降壓藥。同時選取同期于我院體檢的70名健康者作為對照組，年齡和性別與觀察組匹配。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 抽取所有研究對象空腹靜脈血10 mL，采集完畢后將標(biāo)本送至實驗室，三酰甘油L-20型高速離心機進行離心，以10 000 r/min，離心結(jié)束后取上清液于低溫下保存，溫度-80～-70 ℃。

1.2.2 miR-204、miR-9相對表達量測定 采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)測定所有研究對象miR-204與miR-9相對表達量，具體操作：提取5 μL的RNA、1 μL反轉(zhuǎn)錄酶及2 μL引物，miR-204與miR-9的TaqMan引物及TaqMan反轉(zhuǎn)錄酶均由康為世紀(jì)公司生產(chǎn)，將混合好的反應(yīng)體系置于美國ABI公司生產(chǎn)的9700 PCR 擴增儀進行擴增，反應(yīng)條件：16 ℃15 min，42 ℃ 10 min，85 ℃ 3 min，再提取2.5 μL反應(yīng)產(chǎn)物與引物混合，通過實驗數(shù)據(jù)顯示，記錄miR-204和miR-9相對表達量[6]。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄并比較兩組研究對象臨床資料，包括年齡、性別、是否吸煙、有無高血壓、收縮壓、舒張壓、總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、空腹血糖；測定兩組研究對象血清miR-204和miR-9相對表達量，并分析觀察組血清miR-204和miR-9相關(guān)性及診斷急性冠脈綜合征的臨床價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗；采用Pearson方法分析相關(guān)性，采用受試者工作特征曲線(ROC)分析檢驗診斷價值。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床資料比較 觀察組總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；觀察組高密度脂蛋白膽固醇低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。詳見表1。

表1 兩組臨床資料比較

2.2 兩組血清miR-204和miR-9相對表達量比較 觀察組血清miR-204和miR-9相對表達量低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。詳見表2。

表2 兩組血清miR-204和miR-9相對表達量比較(x±s)

2.3 急性冠脈綜合征病人血清miR-204與miR-9的相關(guān)性分析 結(jié)果顯示：急性冠脈綜合征病人血清miR-204與miR-9呈正相關(guān)(r=0.483，P<0.05)。詳見圖1。

圖1 急性冠脈綜合征病人血清miR-204與miR-9相關(guān)性分析的散點圖

2.4 miR-204和miR-9預(yù)測急性冠脈綜合征的ROC曲線 miR-204的ROC曲線下面積(AUC)為0.749，取最佳臨界值時特異度為65.7%，靈敏度為74.6%；miR-9的AUC為0.751，取最佳臨界值時特異度為60.0%，靈敏度為82.5%，二者對急性冠脈綜合征具有一定的診斷價值。二者聯(lián)合檢測的AUC為0.818，取最佳臨界值時特異度為69.6%，靈敏度為90.5%，聯(lián)合預(yù)測急性冠脈綜合征的臨床價值、特異度及靈敏度均優(yōu)于單一指標(biāo)檢測。詳見圖2、表3、表4。

圖2 miR-204和miR-9預(yù)測急性冠脈綜合征的ROC曲線圖

表3 miR-204、miR-9和聯(lián)合檢測的臨床價值

表4 miR-204、miR-9和聯(lián)合檢測的特異度和靈敏度

3 討 論

急性冠脈綜合征是一種心內(nèi)科常見疾病，起病急，常威脅病人生命，臨床主要的治療方法為手術(shù)，通過改善心肌缺血狀態(tài)從而緩解病情[7-8]。因此，急性冠脈綜合征的早期診治尤為重要。miRNA是真核生物體內(nèi)不編碼的短序列RNA，性質(zhì)穩(wěn)定，對溫度、pH等環(huán)境改變不敏感[9-10]。miRNA家族種類豐富，對疾病發(fā)生發(fā)展具有重要作用，同時對疾病診斷具有臨床意義[11]。有研究表明，miRNA參與心肌細胞凋亡與重構(gòu)的過程，而miR-204和miR-9是miRNA中兩種重要的成員[12]。相關(guān)研究表明，miR-204通過調(diào)控心肌細胞自噬功能，參與心肌細胞缺氧后保護機制，避免心肌細胞受到損傷，而miR-9與心血管系統(tǒng)功能密切相關(guān)[13-14]。有研究表明，miR-9可抑制脂肪酰輔酶A表達，從而參與調(diào)節(jié)膽固醇，而膽固醇是冠狀動脈粥樣硬化的重要危險因素；miR-9通過激活磷酸腺苷蛋白激酶途徑促進血管生成[15-16]。因此，本研究通過測定血清miR-204和miR-9相對表達量探討miR-204和miR-9在急性冠脈綜合征病人診斷中的臨床意義。

本研究結(jié)果顯示，觀察組總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；觀察組高密度脂蛋白膽固醇低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。兩組年齡、性別、是否吸煙、有無高血壓、收縮壓、舒張壓、空腹血糖比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。觀察組血清miR-204和miR-9相對表達量低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。miR-204和miR-9相對表達量降低，減弱了心肌保護能力，血管生成能力降低，心肌易受到損傷，從而引起急性冠脈綜合征[17-18]。急性冠脈綜合征病人血清miR-204與miR-9呈正相關(guān)(r=0.483，P<0.05)；急性冠脈綜合征病人miR-204和miR-9相對表達量均降低，且二者呈正相關(guān)，表明二者同時作用于急性冠脈綜合征的發(fā)生[19]。miR-204的AUC為0.749，取最佳臨界值時特異度為65.7%，靈敏度為74.6%；miR-9的AUC為0.751，取最佳臨界值時特異度為60.0%，靈敏度為82.5%，二者預(yù)測急性冠脈綜合征具有一定的診斷價值；二者聯(lián)合檢測的AUC為0.818，取最佳臨界值時特異度為69.6%，靈敏度為90.5%，聯(lián)合預(yù)測急性冠脈綜合征的臨床價值、特異度及靈敏度均優(yōu)于單一項目檢測。臨床早期測定血清miR-204和miR-9相對表達量，可預(yù)測急性冠脈綜合征發(fā)生，進行早期治療，降低病死率[20]。

綜上所述，通過測定病人血清miR-204和miR-9的相對表達量，從而早期診斷急性冠脈綜合征，對急性冠脈綜合征的診治具有重要意義，后期研究進一步探討其在急性冠脈綜合征的診斷價值，具有較好的應(yīng)用前景。