血清miR-145-5p對腦膠質瘤病人化療敏感性的影響及其與預后的相關性

賈海波，嚴肖嘯，袁明智，武俊麗，楊 婕

腦膠質瘤是臨床常見的原發(fā)性顱內(nèi)惡性腫瘤，惡性程度高、治療難度大[1]。目前，外科手術多無法完全切除腦膠質瘤，術后常需輔助放療、化療清除殘余癌細胞[2]。替莫唑胺是臨床治療腦膠質瘤的一線化療藥物，但由于個體差異、耐藥性逐漸形成，病人化療敏感性及預后無法預判[3]。微小RNA(microRNA，miR)屬于非編碼RNA，通過調控非編碼區(qū)癌基因或抑癌基因表達參與腫瘤病程進展。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-145-5p在胰腺癌、乳腺癌等多種腫瘤組織及血清中低表達，具有抗腫瘤作用[4-5]。本研究分析血清miR-145-5p對腦膠質瘤病人化療敏感性的影響及與病人預后的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年4月—2017年3月收治的90例腦膠質瘤病人，其中男52例，女38例；年齡45～77(65.28±7.20)歲；Karnofsky活動狀態(tài)(KPS)評分60～89(74.93±7.55)分；世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)分級[6]：Ⅱ級29例，Ⅲ級35例，Ⅳ級26例；手術類型：全切除44例，次全切除42例，部分切除4例。所有病人均接受同一醫(yī)療團隊治療，本研究獲得醫(yī)院倫理委員會審批。

納入標準：經(jīng)病理學檢查確診為腦膠質瘤；KPS評分≥60分；接受外科手術治療，且術后1個月內(nèi)接受化療。排除標準：合并其他部位惡性腫瘤；合并嚴重肝腎功能障礙；合并嚴重感染性疾病等。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-145-5p水平檢測 采集化療前空腹靜脈血5 mL，Trizol試劑盒(美國Invitrogen公司，貨號15596-018)提取總RNA，定量后反轉錄獲得cDNA；產(chǎn)物鑒定后采用SYBR Green法進行RT-qPCR檢測，miR-145-5p引物序列，正向引物：5′-ATGTCGTAGTGCTGTACGT-3′，反向引物R：5′-TGTCATGTAGCTGTGATGC-3′；U6引物序列，正向引物：5′-GTAGCTGTAGCTGTGACTC-3′，反向引物：5′-ATGCTGATGCTGAGCTGAC-3′，以U6為管家基因，2-△△CT為miR-145-5p基因的相對表達強度。

1.2.2 治療方法及療效評定 術后口服替莫唑胺(江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準字H20060880，規(guī)格：每片100 mg，生產(chǎn)批號20140105)150 mg/(m2·d)，連續(xù)5 d，以4周為1個治療周期，病人能耐受情況治療2～6個周期。療效評定標準[2]：完全緩解：腫瘤病灶完全消失、體征完全消失，連續(xù)觀察4周仍有較好的臨床療效；部分緩解：連續(xù)觀察4周，腫瘤病灶體積縮小≥50%；穩(wěn)定：連續(xù)觀察4周，病情無明顯變化，腫瘤病灶體積縮小>25%或增大<25%；進展：原腫瘤病灶體積增大≥25%或發(fā)現(xiàn)新的腫瘤病灶。所有病人評估時間一致，若出現(xiàn)進展及時更改化療方案，臨床受益(完全緩解、部分緩解或穩(wěn)定)繼續(xù)化療療程，將完全緩解和部分緩解病人納入有效組，其余納入無效組。

1.2.3 觀察指標 收集病人性別、年齡、KPS評分、WHO分級、病灶部位、手術類型、臨床病理資料及血清miR-145-5p水平，將其作為自變量，以化療是否有效(是=0、否=1)作為因變量進行Logistic回歸分析。

1.2.4 隨訪 以門診或電話方式進行隨訪，所有病人自化療開始均隨訪1年，統(tǒng)計病人1年總生存率及無進展生存率，進展生存：復查增強頭顱MRI，測量腫瘤體積，腫瘤體積較治療前增加25%及以上，或發(fā)生新的部位轉移納入進展生存，否則納入無進展生存。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 23.0軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗；等級資料采用秩和檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 療效評價及隨訪結果 90例病人總有效率為34.44%(31/90)，其中完全緩解率為15.56%(14/90)，部分緩解率為18.89%(17/90)，穩(wěn)定率為37.78%(34/90)，進展率為27.78%(25/90)。隨訪1年，病人總生存率為32.22%(29/90)，其中無進展生存率23.33%(21/90)，進展生存率8.89%(8/90)。

2.2 有效組和無效組化療前血清miR-145-5p水平比較 有效組血清miR-145-5p相對表達量高于無效組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。詳見表1。

表1 有效組和無效組化療前血清miR-145-5p水平比較(x±s)

2.3 有效組和無效組臨床資料比較 有效組年齡、KPS評分及WHO分級與無效組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 有效組和無效組臨床資料比較

2.4 Logistic回歸分析影響化療敏感性的因素 Logistic回歸分析結果顯示，年齡、KPS評分、WHO分級、血清miR-145-5p水平均是影響化療敏感性的因素(P<0.05)。詳見表3、表4。

表3 影響因素賦值表

表4 Logistic回歸分析影響化療敏感性的因素

2.5 血清miR-145-5p預測腦膠質瘤病人預后的效能分析 血清miR-145-5p相對表達量對腦膠質瘤病人1年死亡預測最佳截斷點為6.02，預測靈敏度、特異度、準確度及AUC分別為75.86%、88.52%、84.44%、0.780。詳見圖1。

圖1 血清miR-145-5p預測腦膠質瘤病人預后的ROC曲線圖

3 討 論

腦膠質瘤屬于高度惡性腫瘤，發(fā)病原因多樣，包括家族遺傳、接觸環(huán)境致癌物等[7-8]。替莫唑胺屬于烷化劑類藥物，臨床應用廣泛，其缺點是耐藥性普遍，療效個體差異較大[9]。烷化劑耐藥的基本機制是癌細胞中存在多種修復細胞損傷因子，如泛素系統(tǒng)酶、甲基鳥嘌呤甲基轉移酶等，可降低細胞對烷化劑的敏感性[10-11]。因此，尋找可調節(jié)修復因子活性標志物對評估化療敏感性及預后至關重要。

小分子miRNA通過與靶基因miRNA 3′端非編碼區(qū)結合，從而調控靶基因轉錄或翻譯過程[12-13]。miR-145在多種惡性腫瘤中表達具有特異性，且可調控腫瘤細胞化療敏感性，參與腫瘤發(fā)生及進展[14-15]。Zhuang等[16]研究發(fā)現(xiàn)，通過抑制miR145基因表達，膀胱癌細胞干性隨之增強，繼而導致耐藥性增強。癌細胞存在的損傷修復因子是耐藥的重要機制。Chen等[17]研究發(fā)現(xiàn)，miR-145-5p可作用于DNA損傷關鍵容忍蛋白RAD18基因，從而抑制RAD18表達，而RAD18已證實具有降低D組范可尼貧血偶聯(lián)因子、抑制細胞凋亡作用，RAD18表達降低則化療敏感性增加。本研究結果證實，血清miR-145-5p相對表達量是影響化療敏感性的因素，提示miR-145-5p與腦膠質瘤化療敏感性關系密切，高水平miR-145-5p可增強化療敏感性，分析可能機制是調控癌細胞損傷修復因子表達而增強化療敏感性。

癌細胞侵襲、轉移是導致疾病復發(fā)及預后不良的主要原因。Zhang等[18]發(fā)現(xiàn)，胃癌組織miR-145-5p表達水平低于癌旁組織，且與淋巴結轉移、分期關系密切，miR-145-5p高表達的病人預后總生存時間長于低表達的病人，與本研究結果相似。Liu等[19]通過分析50例結直腸癌病人血清miR-145表達水平發(fā)現(xiàn)，血清低表達水平與結直腸癌分化程度、臨床分期、轉移等關系密切，可作為預測結直腸癌預后預測的參考指標，與劉妍[20]的研究結果一致。本研究結果發(fā)現(xiàn)，血清miR-145-5p相對表達量預測腦膠質瘤病人1年死亡靈敏度、特異度、準確度及AUC均較高，提示血清miR-145-5p與腦膠質瘤預后關系密切，進一步提示血清miR-145-5p水平可作為預測化療預后的可靠指標。本研究不足之處在于納入的研究對象均為本院病人，且樣本量有限，可能導致結果產(chǎn)生一定偏倚，今后需進一步擴樣本量，開展多中心研究，以證實研究結果的準確性。

綜上所述，血清miR-145-5p與腦膠質瘤病人化療敏感性及預后關系密切，高水平miR-145-5p可增強化療敏感性，并作為預測化療預后的可靠指標，為提高腦膠質瘤術后化療療效及預測預后提供參考，并及時調整治療策略，為病人爭取更多生存機會。