水蔥新害蟲(chóng)
——黑粒脈蠟蟬形態(tài)及DNA條形碼研究

呂莎莎，陳祥盛*

(1.貴州大學(xué)昆蟲(chóng)研究所，貴陽(yáng)550025； 2.貴州大學(xué)昆蟲(chóng)資源開(kāi)發(fā)利用省級(jí)特色重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽(yáng)550025；3.貴州大學(xué)貴州山地農(nóng)業(yè)病蟲(chóng)害省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽(yáng)550025)

水蔥Schoenoplectustabernaemontani為莎草科Cyperaceae水蔥屬Schoenoplectus植物，在我國(guó)分布較廣泛，是南方濕地常見(jiàn)的優(yōu)勢(shì)水生植物。水蔥具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，其所含樟腦、苯乙烯、龍腦、肉豆寇等藥用成分對(duì)微生物有廣泛和明顯的抑菌作用；地上部分可入藥，主治水腫脹滿，前列腺增生癥，能明顯改善下尿路癥狀，減少殘余尿量，增加尿流率，小便不利(劉鵬巖，傅承光，1992；范錚等，2013；顧懿寧等，2013)；地下塊莖是濕地越冬候鳥(niǎo)的重要食物來(lái)源，也是穩(wěn)定濕地生態(tài)系統(tǒng)的主要物種之一(李鳳山等，1997)；莖稈可做插花的線條材料，也可用做造紙或編織草席的材料。此外，水蔥可通過(guò)根系的吸附作用去除水體中的重金屬，從而達(dá)到凈化水源的作用(楊倩，2009；任珺等，2010，2011)。2017年作者在貴州省威寧縣草海國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)采集調(diào)查時(shí)，發(fā)現(xiàn)1種嚴(yán)重危害草海濕地優(yōu)勢(shì)作物水蔥的蠟蟬，經(jīng)鑒定為黑粒脈蠟蟬NisiafuliginosaYang & Hu，1985，隸屬于半翅目Hemiptera頭喙亞目Auchenorrhyncha蠟蟬總科Fulgoroidea粒脈蠟蟬科Meenoplidae粒脈蠟蟬屬Nisia(楊蓮芳，胡春林，1985)。粒脈蠟蟬屬NisiaMelichar，1903全世界共記錄22個(gè)種，中國(guó)已知5種(胡春林，楊蓮芳，1993；Bourgoin，2020)。粒脈蠟蟬屬種類(lèi)的外部形態(tài)非常相似，主要依據(jù)雄性外生殖器特征進(jìn)行種類(lèi)的準(zhǔn)確鑒定。目前關(guān)于黑粒脈蠟蟬的形態(tài)描述相對(duì)簡(jiǎn)單，除成蟲(chóng)以外的其他蟲(chóng)態(tài)未見(jiàn)詳細(xì)報(bào)道；而有關(guān)粒脈蠟蟬科昆蟲(chóng)的DNA條形碼研究較少。為此，本文對(duì)黑粒脈蠟蟬的卵、若蟲(chóng)及成蟲(chóng)的形態(tài)特征進(jìn)行了詳細(xì)描述，并對(duì)其線粒體COⅠ基因序列進(jìn)行了測(cè)定與分析，同時(shí)對(duì)該害蟲(chóng)的危害狀況進(jìn)行了初步觀察，旨在為該害蟲(chóng)的分類(lèi)鑒定和防控提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

用于研究的形態(tài)學(xué)材料和分子材料均來(lái)自于研究期間所獲標(biāo)本(包括Nisiasp.)(表1)，樣品保存于貴州大學(xué)昆蟲(chóng)研究所(IEGU)。

表1 本研究供試?yán)ハx(chóng)的采集信息Table 1 Collecting information of insects in this study

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 形態(tài)特征觀察卵、若蟲(chóng)及成蟲(chóng)外部形態(tài)特征在Leica MZ 12.5體視顯微鏡下觀察，體軀量度在測(cè)微尺下進(jìn)行測(cè)量，各蟲(chóng)態(tài)整體及部分形態(tài)特征圖像通過(guò)KEYENCE VHX-1000C數(shù)碼成像系統(tǒng)和NIKON SMZ 25數(shù)碼相機(jī)獲得；生殖節(jié)解剖時(shí)，在Leica MZ 12.5體視顯微鏡下將昆蟲(chóng)腹部朝上，用昆蟲(chóng)解剖針或尖頭解剖鑷子插入胸腹結(jié)合處，輕輕撬開(kāi)，將昆蟲(chóng)腹部取下，放入10% NaOH溶液中，室溫下放置3～5 h或煮沸1～3 min(時(shí)間視標(biāo)本的骨化程度而定，煮沸時(shí)要防止標(biāo)本隨溶液沸騰飛濺而出)，清水洗凈后用吸水紙吸去水分，置于放有甘油的單凹玻片上(可在甘油內(nèi)放少量棉絲，便于觀察和固定形態(tài))，在解剖鏡下調(diào)整好各部分姿勢(shì)后，觀察并繪制草圖，草圖繪制好后，利用硫酸紙對(duì)所繪草圖進(jìn)行覆墨，后用CanoScan LiDE100掃描儀掃描，再利用Adobe Photoshop 8.0處理、排版。

1.2.2 基因組DNA提取、PCR擴(kuò)增及測(cè)序取出用75%乙醇浸泡的冷凍(-20 ℃)黑粒脈蠟蟬成蟲(chóng)、若蟲(chóng)及卵，并在解剖鏡下用解剖針去掉成蟲(chóng)腹部，取頭胸部用動(dòng)物基因組DNA提取試劑盒(通用型)(昆明碩擎生物科技有限公司)提取基因組DNA。線粒體COⅠ基因PCR擴(kuò)增引物序列F:5’-GTAAAACGACGGCCAGTTCWACWAAYCAYAARGAYAT YGG-3’，R:5’-CAGGAAACAGCTATGACGWARAA TWARAATRTAWACYTCDGG-3’。以總DNA為模板，通用引物參考GenBank上已發(fā)表的粒脈蠟蟬科昆蟲(chóng)的引物序列設(shè)計(jì)，T100TMThermal Cycler型PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行線粒體COⅠ基因片段的擴(kuò)增，反應(yīng)總體積為30 μL:上、下游引物各1 μL，DNA模板3 μL，Taq PCR Master Mix 25 μL；94 ℃ 5 min；94 ℃ 1 min，53 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。PCR樣品經(jīng)檢測(cè)合格后送上海生工生物科技有限公司雙向測(cè)序。

1.2.3COⅠ基因序列處理，遺傳距離的計(jì)算及系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建運(yùn)用DNA Star 5.0對(duì)測(cè)序所得序列進(jìn)行拼接和校對(duì)，利用MEGA 6.0計(jì)算遺傳距離，并運(yùn)用鄰接法(Neighbor-Joining，NJ)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(Tamuraetal.，2013；丁永順等，2018)。

1.2.4 危害狀況觀察2017年8月—2019年1月，在貴州省威寧縣草海國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)對(duì)黑粒脈蠟蟬的危害狀況進(jìn)行研究，以晴天觀察為宜，通過(guò)目測(cè)和掃網(wǎng)的方式進(jìn)行，記錄危害狀況并拍照。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)特征

2.1.1 卵(圖1：A)卵長(zhǎng)0.39～0.42 mm，寬0.23～0.29 mm；長(zhǎng)橢圓形，黃色。

2.1.2 若蟲(chóng)(圖1：B～F;表2)

1齡若蟲(chóng)(圖1：B)

體長(zhǎng)：0.45～0.54 mm，體寬：0.28～0.32 mm。

體色：體灰白色，初孵若蟲(chóng)身體偏透明，可見(jiàn)蟲(chóng)體內(nèi)腹部部分器官，大多外形輪廓明顯，胸、腹部可明顯區(qū)分；復(fù)眼較小，卵圓形，血紅色。

頭部：頭頂較小，前、后緣近平直，側(cè)脊上具感覺(jué)窩，中側(cè)脊與基緣相交；額長(zhǎng)大于寬，側(cè)脊具感覺(jué)窩13～14個(gè)；唇基三角形，喙長(zhǎng)，末端超過(guò)腹中部或到達(dá)腹部末端。觸角短，第1節(jié)寬大于長(zhǎng)，其上具多個(gè)感覺(jué)器官，鞭節(jié)最后1節(jié)筆尖狀，較其他節(jié)寬大。

胸部：前胸背板具有明顯的輪廓，前胸背板呈“八”字形位于兩側(cè)，側(cè)脊較模糊，每側(cè)具11個(gè)感覺(jué)窩，其中內(nèi)緣內(nèi)側(cè)各具1個(gè)，后側(cè)角各具3個(gè)，前緣3個(gè)，后緣4個(gè)；中胸背板較小，沒(méi)有側(cè)脊，后緣較平直，沒(méi)有明顯的翅芽，兩側(cè)各具4個(gè)感覺(jué)窩，1個(gè)距離內(nèi)緣較近，2個(gè)位于中部，相距較遠(yuǎn)，1個(gè)靠近外緣；后胸背板較中胸背板寬大，兩側(cè)分別具3個(gè)感覺(jué)窩，彼此相距較遠(yuǎn)，后足刺式為4-3-1。

腹部：具9個(gè)腹節(jié)，第4腹節(jié)最寬，依次向兩側(cè)變窄，第1～3、9腹節(jié)不具感覺(jué)窩，第4～8腹節(jié)兩側(cè)各具2個(gè)感覺(jué)窩。

2齡若蟲(chóng)(圖1：C)

體長(zhǎng)：0.56～0.76 mm，體寬：0.35～0.41 mm。

體色：體灰黃色，復(fù)眼紫紅色。

額側(cè)脊具15～16個(gè)感覺(jué)窩；觸角比1齡若蟲(chóng)稍長(zhǎng)；前胸背板具14個(gè)感覺(jué)窩，后側(cè)角各具4個(gè)，前緣5個(gè)，側(cè)脊明顯存在；中胸背板具7個(gè)感覺(jué)窩，2個(gè)距離內(nèi)緣較近，4個(gè)感覺(jué)窩分別以2個(gè)相距較近的形式位于中部，側(cè)脊較明顯；后胸背板具4個(gè)感覺(jué)窩，且彼此間都相距較遠(yuǎn)，側(cè)脊較模糊；后足刺式為4-3-2；第4～7腹節(jié)兩側(cè)各具3個(gè)感覺(jué)窩，第8腹節(jié)具2個(gè)感覺(jué)窩。

3齡若蟲(chóng)(圖1：D)

體長(zhǎng)：0.92～1.03 mm，體寬：0.51～0.60 mm。

表2 黑粒脈蠟蟬各齡期形態(tài)特征比較Table 2 Comparison of morphological characteristics of Nisia fuliginosa at different stages

體色：體棕黃色，復(fù)眼紫紅色。

側(cè)脊具17～18個(gè)感覺(jué)窩；觸角每節(jié)都比2齡若蟲(chóng)稍寬稍長(zhǎng)；前胸背板具17個(gè)感覺(jué)窩，后側(cè)角各具6個(gè)，前緣6個(gè)；中胸背板具13個(gè)感覺(jué)窩，3個(gè)距離內(nèi)緣較近，3個(gè)感覺(jué)窩靠近側(cè)脊，前側(cè)角分布3個(gè)，后側(cè)角分布2個(gè)，中下部具2個(gè)，側(cè)脊明顯存在；后胸背板具5個(gè)感覺(jué)窩，側(cè)脊外側(cè)具2個(gè)，側(cè)脊不明顯；前、后翅翅芽開(kāi)始形成；后足刺式為5-4-3；第4～7腹節(jié)兩側(cè)各具5個(gè)感覺(jué)窩，第8腹節(jié)具 4個(gè)感覺(jué)窩。

4齡若蟲(chóng)(圖1：E)。

體長(zhǎng)：1.02～1.47 mm，體寬：0.64～0.87 mm。

體色：體黑棕色，復(fù)眼紫紅色。

側(cè)脊具19～20個(gè)感覺(jué)窩；觸角每節(jié)都比3齡若蟲(chóng)稍寬稍長(zhǎng)；前胸背板具20個(gè)感覺(jué)窩，后側(cè)角各具8個(gè)，前緣7個(gè)；中胸背板具16個(gè)感覺(jué)窩，4個(gè)距離內(nèi)緣較近，4個(gè)靠近側(cè)脊，前側(cè)角分布3個(gè)，后側(cè)角分布3個(gè)，中下部具2個(gè)；后胸背板具6個(gè)感覺(jué)窩，側(cè)脊外側(cè)具3個(gè)，側(cè)脊明顯存在；前翅翅芽比3齡若蟲(chóng)長(zhǎng)1.16倍，后翅翅芽比3齡若蟲(chóng)長(zhǎng) 1.08倍；后足刺式為8-6-5；第4～7腹節(jié)兩側(cè)各具7個(gè)感覺(jué)窩，第8腹節(jié)具4個(gè)感覺(jué)窩。

5齡若蟲(chóng)(圖1：F)。

體長(zhǎng)：1.55～2.03 mm，體寬：0.93～1.26 mm。

體色：體黑棕紫色，復(fù)眼內(nèi)層紫色，外層銀白色。

側(cè)脊具19～20個(gè)感覺(jué)窩；觸角每節(jié)都比4齡若蟲(chóng)稍寬稍長(zhǎng)；前胸背板具22個(gè)感覺(jué)窩，后側(cè)角各具9個(gè)，前緣8個(gè)；中胸背板具19個(gè)感覺(jué)窩，5個(gè)距離內(nèi)緣較近，5個(gè)靠近側(cè)脊，前側(cè)角分布3個(gè)，后側(cè)角分布3個(gè)，中上部具3個(gè)；后胸背板具7個(gè)感覺(jué)窩，側(cè)脊外側(cè)具4個(gè)，側(cè)脊明顯存在；前翅翅芽比3齡若蟲(chóng)長(zhǎng)1.31倍，后翅翅芽比3齡若蟲(chóng)長(zhǎng) 1.59倍；后足刺式為10-7-6；第4～7腹節(jié)兩側(cè)各具7個(gè)感覺(jué)窩，第8腹節(jié)具4個(gè)感覺(jué)窩。

2.1.2 成蟲(chóng)(圖2：A～E,圖3：A～G,圖4：A～F)體長(zhǎng)(頭頂端部至前翅末端)：♂3.1～4.95 mm(n=21)，♀ 3.6～5.12 mm(n=12)。

體色：體黑褐色(活體狀態(tài)偏藍(lán)紫色)，被有稀薄白色蠟粉。頭頂、額、唇基黑褐色；復(fù)眼邊緣部分黃色，中部黑褐色；單眼棕黃色；前翅栗褐色，翅脈黑褐色；后翅污白色，翅脈褐色；足棕褐色；腹部黑色，側(cè)膜黃色。

頭、胸部：頭部(圖2：A，D)明顯窄于前胸背板，頭頂基寬約為中長(zhǎng)的2倍，端緣深凹呈“U”字形，側(cè)脊高度隆起，兩側(cè)分離，其上密布感覺(jué)窩，中側(cè)脊與基緣會(huì)合于中部，形成2個(gè)小三角室。額(圖2：C)長(zhǎng)約為基寬的2倍，側(cè)脊高聳，具大量感覺(jué)窩，無(wú)中脊，中單眼位于近端部中央，側(cè)單眼(圖2：E)位于觸角偏右上方；唇基三角形，無(wú)側(cè)脊，中脊明顯，到達(dá)端部，基部寬；喙長(zhǎng)，末端伸達(dá)或超過(guò)腹部中部，端節(jié)長(zhǎng)大于寬。觸角第1節(jié)較寬短，圓柱形，寬約為長(zhǎng)的2倍，第2節(jié)長(zhǎng)為寬的1.2倍，約為第1節(jié)的3.5倍。前胸背板(圖2：D)寬為長(zhǎng)的4.8倍，前緣至近中部略拱，后緣凹入，中脊較模糊，側(cè)脊較中脊長(zhǎng)且呈粗隆起。中胸背板長(zhǎng)為前胸背板的3.2倍，中脊明顯，側(cè)脊消失或較模糊。前翅(圖3：A)長(zhǎng)條形，前緣弧形，長(zhǎng)為寬的2.2倍，Sc+R脈下部具約20個(gè)顆粒，爪脈兩側(cè)分別排列12～15個(gè)顆粒，翅面見(jiàn)缺脈現(xiàn)象。后翅(圖3：C)翅脈較簡(jiǎn)單，A2沒(méi)有伸達(dá)翅緣；后足刺式為10-8-6。

雄性外生殖器：尾節(jié)側(cè)面觀(圖3：E)棕黑色，腹緣約為背緣的2.3倍，前緣向后凹成弧形，后緣中部具一圓弧形突起，該突起下部顏色較上部深，上部具大量感覺(jué)窩，且具些許剛毛；肛節(jié)側(cè)面觀(圖3：E)端部向下形成2個(gè)齒狀突起，肛刺突細(xì)長(zhǎng)，端部較基部稍寬；背面觀(圖3：B)兩側(cè)緣近乎平行，兩側(cè)基部具大量感覺(jué)窩和剛毛，彎成勺狀并相互連接，連接處肛刺突形成一舌狀突起。生殖刺突腹面觀(圖3：F，G)粗大，外緣1/4處開(kāi)始膨大，端部外緣骨化，內(nèi)緣1/4處彎成鈍角狀，約2/3處有一指狀突起，后向外緣彎曲，透明狀，但輪廓較清楚，具許多感覺(jué)窩和些許剛毛。陽(yáng)莖(圖3：D)黃褐色，中部由一長(zhǎng)條結(jié)構(gòu)圍成圓圈狀，上部由2個(gè)片狀結(jié)構(gòu)組成，外側(cè)結(jié)構(gòu)外緣1/4處有一刺狀突起，3/4處突然向前彎曲，彎曲處有3、4個(gè)小刺狀突起，背側(cè)結(jié)構(gòu)中部顏色深，腹側(cè)透明狀；下部具 3個(gè)連接結(jié)構(gòu)，第2個(gè)連接結(jié)構(gòu)頂端具一管狀結(jié)構(gòu)，第3個(gè)連接結(jié)構(gòu)較其他2個(gè)結(jié)構(gòu)都長(zhǎng)，且末端具一膜狀結(jié)構(gòu)。

雌性生殖器：生殖節(jié)側(cè)面觀(圖4：A)棕黑色，內(nèi)外緣彎曲；生殖節(jié)后面觀(圖4：B)上面部分呈三角形，下部分兩側(cè)緣分別向內(nèi)彎成弧形，第一產(chǎn)卵瓣被第三產(chǎn)卵瓣包裹住，頂端具一鉤狀突起，第二產(chǎn)卵瓣和肛刺突位于近中部。肛節(jié)背面觀(圖4：F)端部較基部窄，肛刺突端部較粗；第三產(chǎn)卵瓣(圖4：A，E)不規(guī)則葉狀，基部向內(nèi)彎曲形成一個(gè)鈍角狀突起，其上具大量感覺(jué)窩和剛毛；第一產(chǎn)卵瓣(圖4：A，D)扇形，末端具一小鉤突起，其上具大量感覺(jué)窩和剛毛；第二產(chǎn)卵瓣(圖4：B，C)結(jié)構(gòu)較復(fù)雜，后面觀可見(jiàn)下部分近中部凹入，端部向外彎成鉤狀；上部分端部形成3個(gè)突起，中部較寬大，鈍圓形，外側(cè)形成2個(gè)細(xì)指狀突起，基部向下形成2個(gè)指狀突起。

檢視標(biāo)本：共計(jì)296頭黑粒脈蠟蟬成蟲(chóng)標(biāo)本，若蟲(chóng)標(biāo)本82頭。23♂♂37♀♀，貴州威寧草海，2016-Ⅵ-20，姚亞林，李洪星采；43♂♂45♀♀，貴州威寧草海，2017-Ⅷ-1～2，陳祥盛，王英鑒采；1♂3♀♀，貴州威寧草海，2017-Ⅸ-4～5，趙正學(xué)，黃秀東采；32♂♂44♀♀，貴州威寧草海，2018-Ⅷ-13～17，隋永金，李洪星采；26♂♂42♀♀，若蟲(chóng)22頭，貴州威寧草海，2018-Ⅸ-21，呂莎莎，汪潔采；若蟲(chóng)37頭，貴州威寧草海，2018-Ⅹ-20，呂莎莎，鄧敏采；若蟲(chóng)23頭，貴州威寧草海，2019-Ⅰ-19，呂莎莎，周治成采(地理坐標(biāo)：104°10′16″～104°20′40″E，26°47′32″～26°52′52″N)。12頭Nisiasp.成蟲(chóng)標(biāo)本，5♂♂7♀♀，貴州荔波茂蘭，2018-Ⅹ-20，陳祥盛，周治成采(地理坐標(biāo)：107°37′～108°18′E，25°7′～25°9′N(xiāo))。

2.2 COⅠ序列分析結(jié)果

2.2.1 堿基組成分析利用MEGA 6.0對(duì)本研究所獲COⅠ基因序列及NCBI中下載序列(KF227255)共8條COⅠ基因序列的堿基組成進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，該COⅠ基因序列長(zhǎng)度為587 bp，共檢測(cè)到保守位點(diǎn)(C) 456個(gè)、變異位點(diǎn)(V)131個(gè)、簡(jiǎn)約信息點(diǎn)(PI)33個(gè)、自裔位點(diǎn)(S)98個(gè)，保守位點(diǎn)約占總序列的77.68%，變異位點(diǎn)約占總序列的22.32%；其中，A、T、G、C堿基平均含量分別為34.4%、35.1%、11.9%、18.6%，A+T含量約為G+C含量的2.3倍，表現(xiàn)出明顯的A+T堿基偏倚，且A與T含量大致相當(dāng)，堿基組成符合昆蟲(chóng)線粒體COⅠ基因的特征(Liu & Beckenbach，1992)。

2.2.2 遺傳距離利用MEGA 6.0對(duì)黑粒脈蠟蟬卵、若蟲(chóng)及成蟲(chóng)和其他2種粒脈蠟蟬昆蟲(chóng)共8個(gè)序列進(jìn)行遺傳距離分析，結(jié)果顯示(表3)，黑粒脈蠟蟬種內(nèi)遺傳距離為0，3種粒脈蠟蟬科昆蟲(chóng)種間遺傳距離為0.166 8～0.236 1，種間平均遺傳距離為0.201 5，種間遺傳距離顯著大于種內(nèi)遺傳距離且相互間不存在重疊現(xiàn)象。

2.2.3 系統(tǒng)發(fā)育分析根據(jù)測(cè)序結(jié)果及NCBI中下載序列(KF227255)，以Nisiasp.和Phaconeurasp.為外群，運(yùn)用NJ法構(gòu)建分子系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。結(jié)果顯示，黑粒脈蠟蟬卵、若蟲(chóng)和成蟲(chóng)6個(gè)樣品的COⅠ序列能較好地聚為一支，而后與Nisiasp.相聚，Phaconeurasp.位于樹(shù)的基部。從系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)中可以看出，黑粒脈蠟蟬不同齡期COⅠ基因序列差異較小，驗(yàn)證了黑粒脈蠟蟬各蟲(chóng)態(tài)的對(duì)應(yīng)關(guān)系，且可以較好地與其他種類(lèi)區(qū)分(圖5)。

表3 3種粒脈蠟蟬科昆蟲(chóng)COⅠ基因序列的遺傳距離Table 3 Genetic distances of the COⅠ gene of 3 meenoplid species

2.3 危害狀況

黑粒脈蠟蟬在水蔥所有生長(zhǎng)發(fā)育期都能造成危害，主要是成蟲(chóng)及若蟲(chóng)群集在水蔥莖稈中下部刺吸汁液(圖6：A)，掠奪植株?duì)I養(yǎng)，使植株缺失養(yǎng)分，且表面留下傷痕；雌成蟲(chóng)(圖6：B)用產(chǎn)卵器刺破植物組織在其內(nèi)產(chǎn)卵，并分泌蠟絲將卵包裹起來(lái)，外觀只見(jiàn)蠟絲；成蟲(chóng)和若蟲(chóng)會(huì)分泌大量蜜露(圖6：C)和蠟絲(圖6：D)，嚴(yán)重阻礙植株光合作用，影響植株長(zhǎng)勢(shì)，致使植株黃化，甚至引起植株的死亡，并為真菌和細(xì)菌的大量繁殖提供了有利條件。

3 討論

粒脈蠟蟬科昆蟲(chóng)除了取食多種雜草外，還危害多種經(jīng)濟(jì)作物。四合木Tetraenamongolica是國(guó)家Ⅱ級(jí)重點(diǎn)保護(hù)植物且為單屬種，粒脈蠟蟬被報(bào)道是其葉片上的重要吸食類(lèi)害蟲(chóng)(趙偉，劉強(qiáng)，2010，2011)；粉白粒脈蠟蟬N.atrovenosaLethierry是雜草地生境中危害水稻Oryzasativa的優(yōu)勢(shì)種害蟲(chóng)(李志勝，2002)；澳洲粒脈蠟蟬N.australiensisWoodward危害香附子Cyperusrotundus和竹節(jié)花Dianthuschinensis，加羅林粒脈蠟蟬N.carolinensisFennah危害香附子和水稻(胡春林，楊蓮芳，1993)。本文報(bào)道的黑粒脈蠟蟬在其模式標(biāo)本產(chǎn)地云南思茅地區(qū)主要在雜草上取食，而本研究調(diào)查發(fā)現(xiàn)黑粒脈蠟蟬在貴州威寧草海地區(qū)只在水蔥上危害，成蟲(chóng)喜在近水面潮濕的水蔥中下部危害，若蟲(chóng)聚集在近根部危害，一般較難被發(fā)現(xiàn)，當(dāng)受到驚嚇時(shí)，會(huì)跳離水蔥植株，停留在水面些許時(shí)間。成、若蟲(chóng)都能分泌蠟絲和蜜露，雌成蟲(chóng)在莖稈上產(chǎn)卵后會(huì)分泌蠟絲將卵包裹在其中，以保護(hù)卵不受到外界環(huán)境影響。

比較形態(tài)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，采自貴州威寧草海的黑粒脈蠟蟬，其雄性生殖器結(jié)構(gòu)陽(yáng)莖外側(cè)外緣彎曲處有2～4個(gè)小刺狀突起，而采自云南思茅地區(qū)的黑粒脈蠟蟬則沒(méi)有該刺狀突起，其余形態(tài)結(jié)構(gòu)無(wú)明顯區(qū)別。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前粒脈蠟蟬屬全世界共記錄22種，中國(guó)記錄5種，其中，粉白粒脈蠟蟬分布于陜西、貴州、云南、四川、浙江、福建、湖南等多地，澳洲粒脈蠟蟬和加羅林粒脈蠟蟬目前僅臺(tái)灣有記錄，黑粒脈蠟蟬目前只在云南、貴州有分布記錄，條紋小粒脈蠟蟬N.striataYang & Hu目前只在云南有記錄。由此判斷，通過(guò)深入的調(diào)查采集，應(yīng)該還有新種待發(fā)現(xiàn)和描記。

本研究中，黑粒脈蠟蟬的卵、若蟲(chóng)及成蟲(chóng)基于線粒體COⅠ基因序列的種內(nèi)遺傳距離為0，遠(yuǎn)小于3種粒脈蠟蟬科昆蟲(chóng)種間遺傳距離0.201 5，驗(yàn)證了卵、若蟲(chóng)與成蟲(chóng)三者之間的一一對(duì)應(yīng)關(guān)系?；贑OⅠ條形碼序列系統(tǒng)發(fā)育分析，可明顯看到黑粒脈蠟蟬6個(gè)樣品很好地聚為一支，后與Nisiasp.相遇，Phaconeurasp.位于樹(shù)的根部。證實(shí)線粒體COⅠ基因片段可作為黑粒脈蠟蟬及其近緣類(lèi)群物種的DNA條形碼，能較好地實(shí)現(xiàn)對(duì)水蔥害蟲(chóng)黑粒脈蠟蟬各蟲(chóng)態(tài)(尤其是卵和若蟲(chóng))準(zhǔn)確、快捷的分子鑒定。