微酸性氧化電位水和低濃度過氧乙酸協(xié)同消毒消化內(nèi)鏡效果評價(jià)

浙江省醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院，浙江省醫(yī)療器械安全性評價(jià)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 （浙江 杭州 310018）

內(nèi)容提要：通過消毒劑菌懸液定量殺菌試驗(yàn)和對消化內(nèi)鏡的現(xiàn)場模擬試驗(yàn)，比較微酸性氧化電位水（Slightly Electrolyzed Oxidizing Water，SEOW）和濃度為0.23%的過氧乙酸溶液（Peroxyacetic Acid，PAA）復(fù)合而成的新型消毒劑和2%戊二醛對消化內(nèi)鏡消毒效果。結(jié)果顯示，當(dāng)消毒時(shí)間為10min時(shí)，兩者殺滅率均大于99.99%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但時(shí)間縮短30%。由此可見，該種新型消毒劑對消化內(nèi)鏡的短時(shí)間消毒能力優(yōu)于2%戊二醛。

據(jù)美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）數(shù)據(jù)，2010年～2015年，全球有41家以上醫(yī)院報(bào)告了與內(nèi)窺鏡相關(guān)的細(xì)菌感染，有300～500名患者因接受污染的內(nèi)窺鏡檢查而感染致命細(xì)菌，在這其中，有80%以上的感染事件原因是內(nèi)窺鏡消毒不充分或消毒劑使用方法不當(dāng)[1-3]。

在我國，戊二醛因其低廉的價(jià)格和較好的消毒效果，在各大醫(yī)院作為內(nèi)鏡消毒劑的使用率高達(dá)70%以上[4]。據(jù)研究表明，若內(nèi)鏡有戊二醛殘留，反復(fù)接觸患者皮膚、黏膜，會(huì)造成皮膚或黏膜損傷，而酸性氧化電位水具有高氧化還原電位、低有效氯濃度等優(yōu)點(diǎn)，有效解決了戊二醛存在的缺陷[5,6]。本研究主要通過比較微酸性氧化電位水（Slightly Electrolyzed Oxidizing Water，SEOW）和濃度為0.23%的過氧乙酸溶液（Peroxyacetic Acid，PAA）按不同比例配置為新型復(fù)合消毒劑的消毒效果，確定兩者復(fù)合消毒劑的最佳比例和最短作用時(shí)間。

1.材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 試驗(yàn)菌株

大腸埃希菌（Escherichia coli）[ATCC8099]、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[ATCC6538]、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[ATCC15442]，白色念珠菌（candida Albicans）[ATCC10231]，枯草桿菌黑色變種芽孢（Bacillus subtilis var.niger）[ATCC 9372]，購買自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.1.2 試劑和培養(yǎng)基

①0.23%過氧乙酸，楷騰公司；②胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA），北京三藥；③沙氏瓊脂培養(yǎng)基（SDA），北京三藥；④胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB），北京三藥；⑤根據(jù)文獻(xiàn)[2-4]選擇用含10g/L硫代硫酸鈉+3g/L卵磷脂+10g/L吐溫80的磷酸緩沖液（PBS）組成的中和劑。

1.1.3 儀器設(shè)備

內(nèi)鏡清洗消毒機(jī)：DSD－201全自動(dòng)內(nèi)鏡洗消機(jī)，美國明泰科公司。

微酸性氧化電位水生成器：HHEOW-1000，山東淄博醫(yī)療器械廠。

恒溫水浴鍋：上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠。

移液器：德國Eppendorf公司。

麥?zhǔn)媳葷醿x：DensiCHEK，法國生物梅里埃公司。

生物安全柜：TYPEA2，LABCONEO，USA。

生物培養(yǎng)箱：KBK400，Binder，Germany。

立式蒸汽壓力滅菌器：MLS-3780，SANYO，Japan。

1.2 方法

1.2.1 新型消毒劑內(nèi)鏡和2%戊二醛消毒效果比較

實(shí)驗(yàn)組：取1mL菌懸液加入至9mL新型復(fù)合消毒劑消毒劑中，混勻，作用10min后，取1mL混合液加入到9mL中和劑中作用10min。取1mL加入相對應(yīng)的培養(yǎng)基中，采用平板傾注計(jì)數(shù)法進(jìn)行菌落總數(shù)測定，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

對照組：取1mL菌懸液加入至9mL 2%戊二醛中，混勻，作用10min后，取1mL混合液加入到9mL中和劑中作用10min。取1mL加入相對應(yīng)的培養(yǎng)基中，采用平板傾注計(jì)數(shù)法進(jìn)行菌落總數(shù)測定，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

陽性對照組：將等量的接種菌接入與實(shí)驗(yàn)組消毒劑相同體積的PBS中，充分混合至接種菌完全分散，取合適的稀釋液，取1mL加入相對應(yīng)的培養(yǎng)基中，采用平板傾注計(jì)數(shù)法進(jìn)行菌落總數(shù)測定，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.2.2 新型消毒劑內(nèi)鏡和2%戊二醛消毒消化內(nèi)鏡消毒效果比較

內(nèi)鏡清洗消毒與檢測方法：參照衛(wèi)生部《內(nèi)鏡清洗消毒機(jī)消毒效果檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)范》的要求進(jìn)行檢測，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

2.結(jié)果

2.1 相同時(shí)間內(nèi)新型消毒劑和2%戊二醛消毒效果比較結(jié)果

新型消毒劑和2%戊二醛對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和白色念珠菌作用10min，其陽性對照組結(jié)果見表1。

表1. 陽性對照組試驗(yàn)

兩種消毒劑對各個(gè)菌株的消毒效果比較見圖1～4。

圖1. 兩種消毒劑對大腸埃希菌的消毒效果

圖2. 兩種消毒劑對銅綠假單胞菌的消毒效果

圖3. 兩種消毒劑對金黃色葡萄球菌的消毒效果

圖4. 兩種消毒劑對白色念珠菌的消毒效果

由圖1可得，該新型消毒劑對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和白色念珠菌作用時(shí)間10min后，兩者殺滅率均大于99.99%，兩種消毒劑對菌株殺菌效果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但新型消毒劑所需時(shí)間明顯比2%戊二醛少。

2.2 最短時(shí)間內(nèi)新型消毒劑和2%戊二醛消毒效果比較結(jié)果

新型消毒劑最佳作用時(shí)間為7min，因此，比較新型消毒劑和2%戊二醛對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和白色念珠菌作用7min的消毒效果，結(jié)果見表2。

表2. 新型消毒劑和2%戊二醛消毒效果比較結(jié)果

由表2可見，當(dāng)消毒時(shí)間為7min時(shí)，該新型消毒劑對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌殺滅后的恢復(fù)生長菌數(shù)對數(shù)減少值均比2%戊二醛大了至少1個(gè)數(shù)量級。

2.3 消毒劑對消化內(nèi)鏡的現(xiàn)場模擬試驗(yàn)

新型消毒劑和2%戊二醛對消化內(nèi)鏡現(xiàn)場模擬試驗(yàn)結(jié)果見圖5，由此可得，該新型消毒劑放入內(nèi)鏡清洗消毒機(jī)中運(yùn)行消毒7min程序?qū)B接于模擬內(nèi)鏡體不同位置模擬管腔內(nèi)芽孢清除恢復(fù)生長菌數(shù)對數(shù)減少值為5.04～5.83，而2%戊二醛進(jìn)行同樣運(yùn)行程序消除恢復(fù)生長菌數(shù)對數(shù)減少值為4.18～4.41。該新型消毒劑對枯草桿菌黑色變種芽孢消毒后的菌液濃度對數(shù)減少值均比2%戊二醛大至少1個(gè)數(shù)量級。由此可見，該種新型消毒劑的短時(shí)間消毒能力優(yōu)于2%戊二醛。

圖5. 新型消毒劑和2%戊二醛對消化內(nèi)鏡現(xiàn)場模擬試驗(yàn)結(jié)果

3.討論

近些年，消化內(nèi)鏡行業(yè)內(nèi)一直在探索快速、有效、安全、環(huán)保的消毒方法和消毒劑[7]。微酸性氧化電位水和新型過氧乙酸溶液是目前國內(nèi)外研究較多的消化內(nèi)鏡消毒劑，但是其安全性和有效性缺乏相關(guān)試驗(yàn)依據(jù)[8]。

但本研究中，對該新型消毒劑對消化內(nèi)鏡的消毒效果只進(jìn)行到模擬現(xiàn)場試驗(yàn)階段，將其應(yīng)用于醫(yī)院臨床的消毒效果研究將是一個(gè)值得關(guān)注和探討的方向。另外，關(guān)于微酸性氧化水和過氧乙酸殺菌機(jī)制的研究非常少，所以關(guān)于兩者協(xié)同作用的殺菌機(jī)制更趨向于零，所以，研究該復(fù)合消毒劑的殺菌機(jī)制也是一個(gè)非常有意義的課題。

目前我國絕大多數(shù)的消化內(nèi)鏡室（中心）仍以戊二醛作為內(nèi)鏡清洗消毒的主要消毒劑之一[9]。從臨床應(yīng)用看，戊二醛存在消毒時(shí)間長、污染環(huán)境、對內(nèi)鏡腐蝕性較強(qiáng)等諸多缺陷，因此，探索快速、有效、安全、環(huán)保的消毒方法和消毒劑還需要更多的突破[10]。