高溫脅迫對(duì)美洲鰣1＋齡魚(yú)種抗氧化與非特異性免疫相關(guān)指標(biāo)的影響

袁新程，蔣飛，施永海，徐嘉波，劉永士，鄧平平

（上海市水產(chǎn)研究所/上海市水產(chǎn)技術(shù)推廣站，上海200433）

溫度作為影響?hù)~(yú)類(lèi)正常生長(zhǎng)、代謝、發(fā)育和繁殖過(guò)程中的重要外界因子，大多數(shù)魚(yú)類(lèi)總是選擇在最適宜的溫度環(huán)境中生存、攝食與生長(zhǎng)。酶作為機(jī)體催化生物反應(yīng)的一種特殊蛋白質(zhì)，在魚(yú)體內(nèi)起著至關(guān)重要的調(diào)節(jié)作用[1]。當(dāng)外界水環(huán)境發(fā)生變化時(shí)，魚(yú)體將產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，主要表現(xiàn)為機(jī)體內(nèi)各種酶活性的變化[2]。諸多研究結(jié)果均顯示，溫度變化可對(duì)魚(yú)類(lèi)的抗氧化能力產(chǎn)生直接影響[2-4]。溫度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致魚(yú)體抗氧化性酶活性下降以及抗氧化物質(zhì)含量降低，從而削弱其清除有害自由基的能力，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化物如丙二醛含量增多，對(duì)魚(yú)體造成直接傷害[5]。溫度也是影響?hù)~(yú)類(lèi)非特異性免疫能力的外界因子之一：當(dāng)外界水溫低于魚(yú)體最適溫度時(shí)，魚(yú)體的免疫反應(yīng)通常會(huì)降低；而外界溫度過(guò)高則會(huì)導(dǎo)致魚(yú)體中參與免疫反應(yīng)的相關(guān)酶活性的喪失，影響?hù)~(yú)類(lèi)正常的免疫應(yīng)答反應(yīng)[6-7]。因此，研究魚(yú)類(lèi)在急性高溫脅迫條件下的抗氧化和非特異性免疫酶活性指標(biāo)變化具有重要意義。

美洲鰣（Alosa sapidissima），又稱(chēng)美洲西鯡，隸屬于鯡形總目（Clupeomorpha）鯡形目（Clupeiformes）鯡科（Clupeidae）西鯡屬（Alosa），為典型的溯河產(chǎn)卵魚(yú)類(lèi)，主要生活于大西洋西海岸（從加拿大魁北克省到美國(guó)佛羅里達(dá)州）和太平洋海岸（從美國(guó)加利福尼亞州圣迭戈市到阿拉斯加州）的海洋和河流中，是北美地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)之一[8-9]。美洲鰣以其肉質(zhì)細(xì)嫩、豐腴肥美而著稱(chēng)[9-10]，被世界各國(guó)廣泛引種。由于我國(guó)長(zhǎng)江鰣（Tenualosa reevesii）資源日益枯竭，而美洲鰣的形態(tài)特征與長(zhǎng)江鰣相似，因此，自20 世紀(jì)90 年代以來(lái)，上海市水產(chǎn)研究所率先將美洲鰣引入我國(guó)進(jìn)行人工繁養(yǎng)；目前，美洲鰣?jiān)谖覈?guó)的繁育及養(yǎng)殖技術(shù)逐漸成熟[11-12]，養(yǎng)殖規(guī)模逐年擴(kuò)大，現(xiàn)已成為長(zhǎng)江鰣的替代品，并成為國(guó)內(nèi)外喜愛(ài)的名貴淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)之一。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)關(guān)于美洲鰣的研究主要集中在繁殖技術(shù)[10]、苗種培育[13]、生長(zhǎng)特性[11,14]、養(yǎng)殖運(yùn)輸[8,15]等方面，而國(guó)外對(duì)美洲鰣的研究主要集中在捕撈、遷徙及遺傳多樣性等方面[16-18]，但至今尚未有關(guān)于美洲鰣對(duì)環(huán)境溫度應(yīng)激性變化的相關(guān)研究報(bào)道。為此，本研究通過(guò)對(duì)1＋齡美洲鰣進(jìn)行96 h的溫度脅迫實(shí)驗(yàn)，測(cè)定其肝和血清中抗氧化及非特異性免疫相關(guān)酶指標(biāo)的變化，以期為美洲鰣的健康養(yǎng)殖和其對(duì)環(huán)境變化適應(yīng)能力的評(píng)價(jià)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)和用水

實(shí)驗(yàn)用魚(yú)為上海市水產(chǎn)研究所奉賢科研基地于2017年5月經(jīng)人工繁育養(yǎng)殖的1＋齡美洲鰣魚(yú)種，平均體質(zhì)量（152.07±25.24）g，平均體長(zhǎng)（21.89±1.28）cm。實(shí)驗(yàn)在上海市水產(chǎn)研究所奉賢科研基地進(jìn)行，選取同一批次卵孵化養(yǎng)成的大小均勻、體質(zhì)健壯、活力較強(qiáng)的個(gè)體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)用水均是經(jīng)過(guò)60目篩絹網(wǎng)過(guò)濾、沉淀和充分曝氣后的當(dāng)?shù)睾涌谒}度為2～3），實(shí)驗(yàn)期間水中溶解氧水平均高于5 mg/L，pH 為7.62±0.21，氨氮和亞硝酸鹽質(zhì)量濃度均低于0.01 mg/L。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)24 ℃（對(duì)照組）、28 ℃和30 ℃3個(gè)溫度水平處理組（在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，由于在32 ℃的溫度水平下，美洲鰣?jiān)诰W(wǎng)箱中狂躁不安，不斷死亡，12 h 后無(wú)存活，故確定最高溫度為30 ℃），每一水平設(shè)3個(gè)平行，每一平行25尾魚(yú)，組間個(gè)體無(wú)顯著差異（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)在網(wǎng)箱（1.0 m×0.6 m×0.4 m）中進(jìn)行，在每個(gè)水泥池（2.5 m×7.5 m×1.5 m）中放置3個(gè)相同的網(wǎng)箱作為重復(fù)組。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將水溫升至24 ℃，作為實(shí)驗(yàn)初始溫度，實(shí)驗(yàn)魚(yú)先暫養(yǎng)于水泥池中（此時(shí)水溫均為24 ℃），穩(wěn)定1周后，移入對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)網(wǎng)箱中，再穩(wěn)定3 d后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，通過(guò)熱水循環(huán)（CWNS0.85-90/70-Y型全自動(dòng)燃油熱水機(jī)）進(jìn)行水溫調(diào)控（±0.2 ℃），并在1 h 內(nèi)從初始溫度（24 ℃）升至28 ℃和30 ℃。當(dāng)溫度達(dá)到各設(shè)定水平后，立即對(duì)各組進(jìn)行取樣（表示調(diào)節(jié)溫度前的情況），記為0 h，然后，分別在3、6、12、24、48、96 h時(shí)取樣，從每個(gè)溫度水平的3個(gè)重復(fù)中各隨機(jī)取3尾，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中共取樣189尾魚(yú)。實(shí)驗(yàn)前一天及實(shí)驗(yàn)期間，各溫度處理下均不投食。

1.3 樣品采集與酶活性測(cè)定

1.3.1 樣品采集

分別對(duì)0、3、6、12、24、48、96 h 采集的189 尾實(shí)驗(yàn)魚(yú)取血清和肝樣品。首先，利用0.5 mg/L 間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（MS-222）對(duì)實(shí)驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行麻醉，然后進(jìn)行尾靜脈取血，將取出的血液移入1.5 mL離心管中，在4 ℃冰箱中靜置2 h后，于4 ℃、3 000 r/min條件下離心10 min，取上清液，保存于-80 ℃冰箱中；接著，將實(shí)驗(yàn)魚(yú)放于冰盤(pán)上，解剖取肝，用事先準(zhǔn)備好的生理鹽水（4 ℃，0.86%）對(duì)肝進(jìn)行沖洗后，按照質(zhì)量濃度比1∶9的比例加入事先預(yù)冷的生理鹽水，在冰浴下使用事先準(zhǔn)備好的玻璃勻漿器進(jìn)行勻漿，制成10%勻漿液，并于4 ℃、3 500 r/min 條件下離心10 min，取上清液，保存在-80 ℃冰箱中。將制備的上清液用于抗氧化酶、非特異性免疫酶活性及總蛋白含量的測(cè)定。

1.3.2 酶活性和總蛋白含量測(cè)定

分別采用南京建成生物工程研究所提供的A001-1 總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase, T-SOD）檢測(cè)盒（羥胺法）、A007-2 過(guò)氧化氫酶（catalase, CAT）檢測(cè)盒（可見(jiàn)光比色法）、A003-1 丙二醛（malondialdehyde,MDA）檢測(cè)盒（硫代巴比妥酸法）、A005 谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）測(cè)定盒（可見(jiàn)光比色法）、A059-1 堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）測(cè)定盒（可見(jiàn)光比色法）、A060-1 酸性磷酸酶（acid phosphatase,ACP）測(cè)試盒（可見(jiàn)光比色法）、C009-1 谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase,ALT）測(cè)試盒（賴(lài)氏法）以及C010-1 谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase,AST）測(cè)試盒（比色法）對(duì)所取實(shí)驗(yàn)魚(yú)肝和血清樣品中抗氧化酶和非特異性免疫酶活性進(jìn)行測(cè)定；使用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定總蛋白含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

利用Excel 2007 整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，所得結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示；利用SPSS 17.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和鄧肯多重比較，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 高溫脅迫對(duì)美洲鰣肝和血清中抗氧化相關(guān)酶指標(biāo)的影響

肝中SOD 活性大小變化如圖1A 所示：對(duì)照組（24 ℃）的活性大小基本穩(wěn)定，變化范圍為182.438～244.819 U/mg，而28 ℃和30 ℃組的SOD 活性呈現(xiàn)隨時(shí)間增長(zhǎng)逐漸增大的趨勢(shì)，在48 和96 h 時(shí)，SOD活性均明顯大于24 ℃組（P＜0.05）；此外，除3 h 的28 ℃組明顯小于24 ℃組外，其他時(shí)間的高溫組與24 ℃組均無(wú)明顯差異（P＞0.05）。血清中SOD活性大小變化如圖1B所示：24 ℃和28 ℃組活性大小均基本穩(wěn)定，并且兩者之間無(wú)明顯差異（P＞0.05），而30 ℃組隨時(shí)間增長(zhǎng)呈逐漸增大趨勢(shì)，并在12、48和96 h時(shí)顯著大于對(duì)照組（P＜0.05）?？傊?，在高溫脅迫下，美洲鰣肝和血清中SOD活性隨時(shí)間增長(zhǎng)逐漸增大，并從48 h開(kāi)始明顯增大。

肝中CAT 活性大小變化如圖2A 所示：24 ℃組CAT活性在實(shí)驗(yàn)期間基本保持穩(wěn)定，大小為4.712～6.292 U/mg，而高溫組美洲鰣CAT 活性受溫度影響明顯，28 ℃和30 ℃組CAT活性在脅迫48和96 h時(shí)均明顯大于24 ℃組（P＜0.05）。血清中CAT活性大小變化如圖2B所示：24 ℃組CAT活性變化不大，基本維持穩(wěn)定；28 ℃組CAT活性隨時(shí)間增長(zhǎng)呈現(xiàn)逐漸增大的變化趨勢(shì)，但與對(duì)照組相比，總體增大不明顯（P＞0.05）；而30 ℃組CAT 活性隨時(shí)間增長(zhǎng)逐漸減小，并從24 h 時(shí)開(kāi)始明顯小于24 ℃和28 ℃組（P＜0.05），說(shuō)明高溫脅迫顯著抑制了血清中CAT活性。

如圖3 所示：高溫脅迫期間，24 ℃組的肝和血清中GSH-Px 活性隨時(shí)間增長(zhǎng)基本保持穩(wěn)定，分別為0.968～1.153和1.603～2.273 U/mg。28 ℃和30 ℃組的肝中GSH-Px 活性總體上隨時(shí)間增長(zhǎng)逐漸增大，其中：在脅迫48 h時(shí)，28 ℃組的GSH-Px活性顯著大于24 ℃組（P＜0.05），與30 ℃組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）；在脅迫96 h 時(shí)，28 ℃組的GSH-Px 活性與24 ℃組間無(wú)顯著差異（P＞0.05），而30 ℃組顯著大于24 ℃（P＜0.05）（圖3A）。28 ℃組的血清中GSH-Px活性也隨時(shí)間增長(zhǎng)呈增大趨勢(shì)，而30 ℃組隨時(shí)間增長(zhǎng)呈減小趨勢(shì)，并從24 h開(kāi)始均顯著小于24 ℃和28 ℃組（P＜0.05）（圖3B）。

圖2 高溫脅迫對(duì)美洲鰣肝和血清中CAT活性的影響Fig.2 Effects of high temperature stress on CAT activities in liver and serum of A.sapidissima

如圖4A所示：24 ℃組肝中MDA含量基本保持穩(wěn)定，為0.357～0.545 nmol/mg，而28 ℃和30 ℃組隨時(shí)間增長(zhǎng)均呈先升高后降低的變化，其中在12 h時(shí)達(dá)到最大后開(kāi)始降低。從6 h開(kāi)始，30 ℃組MDA含量隨時(shí)間增長(zhǎng)均明顯大于24 ℃組（P＜0.05）；28 ℃組在12 h 時(shí)明顯大于24 ℃組，而之后的其他時(shí)間點(diǎn)雖大于24 ℃組，但均不顯著（P＞0.05）。如圖4B所示：血清中24 ℃組的MDA含量基本保持穩(wěn)定，為0.098～0.139 nmol/mg，而28 ℃和30 ℃組隨時(shí)間增長(zhǎng)均呈先升后降再升的變化趨勢(shì)，并均從24 h開(kāi)始MDA含量明顯大于24 ℃組（P＜0.05）。

2.2 高溫脅迫對(duì)美洲鰣肝中AKP 和ACP 活性的影響

從圖5中可看出，實(shí)驗(yàn)期間24 ℃組美洲鰣肝中AKP活性變化基本穩(wěn)定，大小為18.448～21.090 U/g。28 ℃和30 ℃組AKP活性隨時(shí)間增長(zhǎng)具有較明顯的下降趨勢(shì)，從3 h時(shí)開(kāi)始，除12 h外高溫脅迫顯著降低AKP活性，28 ℃和30 ℃組AKP活性均明顯小于24 ℃組（P＜0.05），但除48 h 外，28 ℃和30 ℃組間差異均不顯著（P＞0.05）。圖6中顯示：對(duì)照組24 ℃的ACP活性大小在48和96 h時(shí)略有升高，但變化不大，基本保持穩(wěn)定，大小為28.186～33.293 U/g。在0～24 h范圍內(nèi)，28 ℃和30 ℃組的ACP活性隨時(shí)間增長(zhǎng)基本保持穩(wěn)定，與24 ℃組間均無(wú)顯著差異（P＞0.05），但隨時(shí)間繼續(xù)增長(zhǎng)，在48 和96 h 時(shí)28 ℃和30 ℃組的ACP 活性均顯著低于24 ℃組（P＜0.05），而這2組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

2.3 高溫脅迫對(duì)美洲鰣肝中轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

實(shí)驗(yàn)期間，24 ℃組AST 活性基本保持穩(wěn)定，于12和24 h時(shí)略有升高，但變化不大，大小為76.591～94.589 U/g。而28 ℃和30 ℃組AST 活性隨時(shí)間增長(zhǎng)呈逐漸增大趨勢(shì)，在96 h時(shí)，28 ℃和30 ℃組AST活性均顯著大于24 ℃組（P＜0.05），表明高溫可明顯提高AST活性（P＜0.05），但28 ℃和30 ℃組間差異不明顯（P＞0.05）；脅迫6 h時(shí)，30 ℃組AST活性顯著小于24 ℃和28 ℃組（圖7）。從圖8中可以看出，ALT 活性受高溫脅迫影響較明顯，其中：24 ℃組的ALT 活性基本保持穩(wěn)定，大小為3.730～4.354 U/g；28 ℃組ALT 活性隨時(shí)間增長(zhǎng)呈先升后降的變化趨勢(shì)，在6 和24 h 時(shí)明顯大于24 ℃組（P＜0.05），而在48 和96 h 時(shí)明顯降低，但與24 ℃組無(wú)顯著差異（P＞0.05）；30 ℃組的ALT活性隨時(shí)間增長(zhǎng)呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，受高溫脅迫影響較明顯，其中在48 h時(shí)ALT活性顯著大于24 ℃和28 ℃組，在96 h時(shí)其活性顯著大于28 ℃組（P＜0.05）。

圖3 高溫脅迫對(duì)美洲鰣肝和血清中GSH-Px活性的影響Fig.3 Effects of high temperature stress on GSH-Px activities in liver and serum of A.sapidissima

3 討論

3.1 高溫脅迫對(duì)美洲鰣抗氧化相關(guān)指標(biāo)的影響

溫度作為隨時(shí)間、空間而改變的外界因子，不僅對(duì)水體中諸多理化因子產(chǎn)生影響，而且對(duì)魚(yú)體的正常生理活動(dòng)也產(chǎn)生重要影響[19]。SOD、CAT和GSHPx作為生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，在生物體的自我防護(hù)系統(tǒng)中起著至關(guān)重要的作用，是抗氧化防御過(guò)程中的關(guān)鍵酶[20]。有研究表明，水溫高低可直接對(duì)魚(yú)類(lèi)機(jī)體的抗氧化能力產(chǎn)生影響[21-22]：當(dāng)魚(yú)體受到外界高溫脅迫時(shí)，由于呼吸爆發(fā)和其他免疫過(guò)程而產(chǎn)生過(guò)多有害的活性氧自由基，因而機(jī)體通過(guò)產(chǎn)生更多的抗氧化酶來(lái)清除這些活性氧自由基，從而維持細(xì)胞和機(jī)體的正常生理活動(dòng)。本實(shí)驗(yàn)中，28 ℃和30 ℃組肝及血清中SOD均出現(xiàn)逐漸升高的變化趨勢(shì)，這與謝明媚等[23]研究急性溫度脅迫對(duì)銀鯧（Pampus argenteus）幼魚(yú)抗氧化和免疫指標(biāo)影響的結(jié)果相一致。這表明高溫脅迫使美洲鰣產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，迫使細(xì)胞和組織中自由基迅速增加，以致?lián)p傷細(xì)胞和組織，機(jī)體通過(guò)產(chǎn)生大量SOD來(lái)應(yīng)對(duì)過(guò)量的自由基，所以美洲鰣?bào)w內(nèi)SOD 活性升高。CAT、GSH-Px 活性在肝中均隨時(shí)間增長(zhǎng)逐漸升高，而在血清中表現(xiàn)出先升后降的趨勢(shì)。帶來(lái)這種變化的原因主要是高溫脅迫對(duì)肝造成了一定損傷，肝中過(guò)量自由基未被清除而導(dǎo)致CAT 和GSH-Px 活性逐漸升高，而血液中過(guò)量的自由基逐漸被清除，所以CAT和GSH-Px活性表現(xiàn)出先升后降的變化。相似的研究結(jié)果還出現(xiàn)在中華鱘（Acipenser sinensis）[19]和虹鱒（Oncorhynchus mykiss）[24]中。

圖4 高溫脅迫對(duì)美洲鰣肝和血清中MDA含量的影響Fig.4 Effects of high temperature stress on MDA contents in liver and serum of A.sapidissima

圖5 高溫脅迫對(duì)美洲鰣肝中AKP活性的影響Fig.5 Effects of high temperature stress on AKP activity in liver of A.sapidissima

圖6 高溫脅迫對(duì)美洲鰣肝中ACP活性的影響Fig.6 Effects of high temperature stress on ACP activity in liver of A.sapidissima

圖7 高溫脅迫對(duì)美洲鰣肝中AST活性的影響Fig.7 Effects of high temperature stress on AST activity in liver of A.sapidissima

生物體中MDA作為不飽和脂肪酸被氧化后的最終產(chǎn)物，已被作為一種細(xì)胞膜氧化損傷的指示物，它的產(chǎn)生加劇了膜的損傷[25]。因此，MDA 水平高低間接反映了組織細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，也代表生物機(jī)體抗氧化能力水平的高低[26]。本研究中，28 ℃和30 ℃組肝中MDA含量在高溫脅迫96 h 內(nèi)均隨時(shí)間增長(zhǎng)表現(xiàn)出先升高后降低的變化，而肝中SOD、CAT 和GSH-Px 均隨時(shí)間增長(zhǎng)顯著升高，這表明高溫脅迫對(duì)美洲鰣肝造成了氧化損傷，導(dǎo)致抗氧化酶大量生成以抵抗過(guò)量的自由基。該變化趨勢(shì)與謝明媚等[23]的研究結(jié)果相似，而與王偉等[25]對(duì)太平洋鱈（Gadus macrocephalus）仔稚魚(yú)在急性溫度脅迫下MDA的變化趨勢(shì)不同。這可能是由實(shí)驗(yàn)魚(yú)種、應(yīng)激時(shí)間及實(shí)驗(yàn)溫度等不同而造成的。在美洲鰣血清中，2個(gè)高溫組MDA含量隨時(shí)間增長(zhǎng)均呈先升后降再升的變化趨勢(shì)，但30 ℃組在96 h時(shí)顯著大于其他2 組，這與范耘碩等[27]研究溫度脅迫對(duì)大鱗副泥鰍（Paramisgurnus dabryanus）抗氧化與非特異性免疫指標(biāo)影響的結(jié)果相似。這主要是因?yàn)樵?0 ℃的高溫脅迫下，美洲鰣血清中CAT 和GSH-Px 均隨時(shí)間增長(zhǎng)顯著降低，抗氧化酶活性受到顯著抑制，抗氧化能力減弱，所以導(dǎo)致MDA 在30 ℃高溫脅迫后期迅速升高。

3.2 高溫脅迫對(duì)美洲鰣非特異性免疫相關(guān)指標(biāo)的影響

圖8 高溫脅迫對(duì)美洲鰣肝中ALT活性的影響Fig.8 Effects of high temperature stress on ALT activity in liver of A.sapidissima

AKP是一種磷酸單酯水解酶，在機(jī)體正常情況下特異性低，而受到外部刺激或出現(xiàn)病變時(shí)活性會(huì)增強(qiáng)，主要起到解毒劑的作用，是魚(yú)類(lèi)等生物健康的重要標(biāo)志[28]。有研究表明，溫度脅迫會(huì)對(duì)魚(yú)體中的AKP 產(chǎn)生明顯影響，如：強(qiáng)俊等[29]對(duì)尼羅羅非魚(yú)（Oreochromis niloticus）幼魚(yú)研究發(fā)現(xiàn)，溫度脅迫下實(shí)驗(yàn)魚(yú)的AKP活性呈先上升后下降的變化趨勢(shì)；管標(biāo)等[30]研究發(fā)現(xiàn)，高溫脅迫下虹鱒（O. mykiss）的AKP活性較對(duì)照組明顯降低，表明高溫脅迫對(duì)AKP活性有抑制作用。本研究中，高溫脅迫對(duì)美洲鰣的AKP活性也產(chǎn)生明顯影響，AKP活性隨時(shí)間增長(zhǎng)而降低，并在各時(shí)間點(diǎn)（除12 h 外）時(shí)高溫組（28 ℃和30 ℃）均顯著小于對(duì)照組（24 ℃）。這說(shuō)明高溫抑制了美洲鰣的AKP活性，減弱了魚(yú)體非特異性免疫能力。ACP作為生物體內(nèi)重要的代謝酶，不僅參與磷酸酯和細(xì)胞消化代謝，還與參加自溶過(guò)程和免疫調(diào)節(jié)功能有關(guān)[31]。本實(shí)驗(yàn)中，ACP 活性在24 h 內(nèi)均無(wú)明顯變化，高溫組與對(duì)照組均無(wú)顯著差異；而24 h后，高溫組ACP活性均明顯降低，并均小于24 ℃對(duì)照組。這與大菱鲆[Scophthalmus maximus (L.)]體內(nèi)酸性磷酸酶活性變化趨勢(shì)[32]相似。表明美洲鰣可承受短時(shí)間內(nèi)的高溫壓力，當(dāng)超過(guò)一定時(shí)間后，ACP活性就會(huì)受到抑制而顯著減小。因此，可認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)條件下的高溫脅迫對(duì)美洲鰣肝造成了一定程度的損傷。AST 與ALT 是生物體中2 種重要的轉(zhuǎn)氨酶，正常情況下AST和ALT存在于肝、心、腎、血液等許多器官或組織中，尤其以肝中含量最高[33]。當(dāng)生物機(jī)體受到外界脅迫或發(fā)生病變時(shí)，肝中AST和ALT活性會(huì)顯著升高，糖異生途徑加強(qiáng)，通過(guò)產(chǎn)生葡萄糖來(lái)對(duì)抗不利環(huán)境[34]；因此，測(cè)定肝中AST 和ALT 活性水平的高低，可以反映細(xì)胞膜通透性的變化，并判斷肝等組織是否受到損傷[30]。本研究中，高溫組AST活性隨時(shí)間增長(zhǎng)逐漸升高，前48 h內(nèi)總體上無(wú)顯著差異，而在96 h 時(shí)均顯著大于對(duì)照組；此結(jié)果與范耘碩等[27]對(duì)大鱗副泥鰍（P. dabryanus）中AST與ALT 隨溫度變化的研究結(jié)果相似。這可能是因?yàn)槊乐搛埵艿礁邷孛{迫后，肝中AST 活性開(kāi)始升高，在短時(shí)間內(nèi)有一定的調(diào)節(jié)作用，但當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間處于高溫環(huán)境下可能對(duì)肝造成一定的損傷，而導(dǎo)致AST 活性顯著升高。ALT 在30 ℃組中活性逐漸升高，而在28 ℃組表現(xiàn)出先升高后降低的變化趨勢(shì)，且在48 h 時(shí)，30 ℃組的ALT 活性顯著大于28 ℃組和24 ℃對(duì)照組，在96 h 時(shí)，其活性顯著大于28 ℃組。相似結(jié)果也出現(xiàn)在對(duì)虹鱒（O.mykiss）[30]的研究中。這主要是因?yàn)樵?8 ℃條件下，ALT活性通過(guò)機(jī)體的調(diào)節(jié)可以恢復(fù)到正常水平，未對(duì)肝細(xì)胞造成破壞，而30 ℃可能對(duì)肝產(chǎn)生了顯著影響，致使ALT活性顯著升高。因此，在30 ℃高溫脅迫下美洲鰣肝細(xì)胞可能受到了一定程度的損傷，但未造成永久性破壞。

4 結(jié)論

在本實(shí)驗(yàn)條件下，連續(xù)96 h的高溫脅迫會(huì)顯著抑制美洲鰣抗氧化能力與非特異性免疫能力，尤其是高溫條件（30 ℃）下對(duì)其非特異性免疫相關(guān)酶活性會(huì)造成抑制作用，可能對(duì)肝造成一定程度的損傷。由于美洲鰣對(duì)高溫條件的耐受能力較弱，因此，在實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中應(yīng)避免高溫，建議養(yǎng)殖溫度控制在28 ℃以下。