LncRNA MIAT表達(dá)與ACS患者炎癥因子及血管內(nèi)皮功能的相關(guān)性研究

高仁賢 柯樂斌 呂望 姜盈盈 林建鋒*

急性冠脈綜合征（Acute Coronary Syndrome，ACS）［1］是指一系列臨床嚴(yán)重的急性心肌缺血性疾病，主要包括不穩(wěn)定型心絞痛以及急性ST 段抬高或非ST 段抬高型心肌梗死。大量研究顯示，血管內(nèi)皮損傷引起的內(nèi)皮功能障礙和被激活的炎癥反應(yīng)［2］在ACS 發(fā)生發(fā)展各個環(huán)節(jié)均發(fā)揮著重要作用，也是造成動脈粥樣硬化斑塊（atherosclerotic plaque，AP）不穩(wěn)定的主要因素。長鏈非編碼RNA（LncRNA）是一類轉(zhuǎn)錄長度＞200nt、不編碼蛋白的RNA，從表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后翻譯等多個層面參與基因表達(dá)調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)其與多種疾病如冠心?。╟oronary heart disease，CHD）、糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等有關(guān)，因而在疾病診斷和靶點治療領(lǐng)域成為熱點［3］。LncRNA MIAT 作為一種重要的心臟相關(guān)LncRNA，盡管MIAT 特異性表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng)，但在心臟相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄、翻譯、翻譯后調(diào)控起著重要的作用，已有研究表明其在心肌梗死、動脈粥樣硬化進(jìn)程中起調(diào)控作用［4］。本研究旨在發(fā)現(xiàn)LncRNA MIAT 表達(dá)水平與血管內(nèi)皮損傷和多種炎癥因子分泌的相關(guān)性，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018 年9 月至2019 年9 月在本院心內(nèi)科住院的ACS 患者及健康對照組各100 例，所有患者均簽署知情同意書，本研究方案獲得醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)。ACS 患者納入標(biāo)準(zhǔn)：符合內(nèi)科學(xué)教材（第八版）和中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會發(fā)表的ACS 診斷與治療指南中關(guān)于ACS 診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］冠脈病變，均由本院或外院冠狀動脈造影結(jié)果確診患者知情同意參與本試驗。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）未控制的原發(fā)性高血壓者；（2）外周血管疾病者；（3）慢性心力衰竭者；（4）甲狀腺疾病者；（5）肝、腎功能不全者；（6）并發(fā)炎癥者；（7）腫瘤患者；（8）嚴(yán)重的其他系統(tǒng)疾病者。入組對象均檢測心肌酶譜、肌鈣蛋白I、血脂、血糖、腎功能等生化指標(biāo)；進(jìn)行心電圖、心臟彩超、冠脈造影等輔助檢查。

1.2 ELISA 檢測外周血清炎癥因子 在研究對象治療前抽取外周靜脈血，室溫靜置3 h 后放入4℃預(yù)冷的離心機(jī)中離心3000 r/min，30 min，調(diào)整為soft 模式，收集上清液為血清。按照ELISA 檢測試劑盒說明書檢測TNF-α（abcam，ab181421）、IL-1（Thermo Fisher Scientific，KHC0011）、IL-6（abcam，ab178013）、M-CSF（abcam，ab245714）等炎癥因子及NO（abcam，ab233628）及ET-1（Thermo Fisher Scientific，EIAET1）內(nèi)皮功能相關(guān)因子。

1.3 血管內(nèi)皮功能測定 應(yīng)用血管內(nèi)皮功能測定儀（德國拜耳公司生產(chǎn)的HP700 血管內(nèi)皮功能檢測儀）通過上臂肱動脈間接測定患者血管內(nèi)皮功能，血管內(nèi)皮功能測定值正常范圍0.9～1.3，＜0.9 被認(rèn)定為血管內(nèi)皮功能損傷。

1.4 循環(huán)lncRNA MIAT 測定 分離、純化外周血清，提取RNA，Realtime-PCR 檢測LncRNA MIAT。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件包。計量資料以（±s）表示，組間及組內(nèi)均數(shù)比較采用t檢驗，采用Logistic 回歸分析急性冠脈綜合征與循環(huán)LncRNA MIAT 表達(dá)水平的關(guān)系。采用Pearson 相關(guān)系數(shù)分析ACS 患者炎癥因子和內(nèi)皮功能損傷與循環(huán)LncRNA MIAT 水平相關(guān)性。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健康對照組與ACS 組生化指標(biāo)比較 見表1。

表1 健康對照組與ACS組生化指標(biāo)比較（±s）

表1 健康對照組與ACS組生化指標(biāo)比較（±s）

指標(biāo) 健康對照組（n=100） ACS 組（n=100） t 值 P 值A(chǔ)ST（U/L） 20.12±10.34 58.74±25.10 25.610 ＜0.05 CK（U/L） 55.74±12.78 171.34±43.65 41.980 ＜0.05 CK-MB（U/L） 9.74±5.69 18.94±7.29 4.774 ＜0.05 LDH（U/L） 380.50±123.46 677.50±193.40 23.920 ＜0.05 cTNI（Ug/L） 0.08±0.02 0.61±0.13 67.400 ＜0.05 LDL-C（mmol/L） 2.14±0.69 4.23±0.53 39.940 ＜0.05血糖（mmol/L） 4.92±0.94 4.76±0.89 1.156 ＞0.05肌酐（CRE）（μmol/L） 89.12±15.64 90.12±13.64 6.041 ＞0.05尿素氮（BUN）（mmol/L） 5.32±1.64 4.89±1.87 0.342 ＞0.05

2.2 健康組和ACS 組炎癥因子分泌水平檢測 見表2。

表2 健康組和ACS組炎癥因子分泌水平檢測［pg/ml，（±s）］

表2 健康組和ACS組炎癥因子分泌水平檢測［pg/ml，（±s）］

組別 n IL-6 TNF-α IL-1 M-CSF健康對照組 100 19.12±3.34 13.89±2.12 20.26±4.22 7.63±2.76 ACS 組 100 37.42±5.12 24.51±2.29 33.91±5.81 18.71±1.49 t 值 19.00 9.961 33.77 58.43 P 值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 健康組和ACS 組血管功能及內(nèi)皮功能因子檢測結(jié)果 見表3。

表3 健康組和ACS組血管功能及內(nèi)皮功能因子檢測結(jié)果（±s）

表3 健康組和ACS組血管功能及內(nèi)皮功能因子檢測結(jié)果（±s）

組別 n 血管內(nèi)皮功能數(shù)值 NO（pg/ml） ET-1（pg/ml）健康對照組 100 1.06±0.14 80.89±16.12 50.26±5.22 ACS 組 100 0.52±0.22 51.51±20.29 73.91±5.81 t 值 35.74 19.33 51.80 P 值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.4 健康對照組和ACS 組外周血清lncRNA MIAT相對表達(dá)水平比較 ACS 患者組外周血清LncRNA MIAT mRNA 表達(dá)水平為（2.49±0.25），健康對照組為（1.01±0.11），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示LncRNA MIAT 可能參與ACS 疾病進(jìn)程。

2.5 lncRNA MIAT 表達(dá)水平與急性冠脈綜合征Logistic回歸分析 利用Logistic 回歸分析外周血清內(nèi)LncRNA MIAT 表達(dá)水平與ACS 之間的關(guān)系，分析結(jié)果證明LncRNA MIAT 是ACS 的一個危險因素，OR=1.114，95%CI=1.012～1.236，P＜0.01。

2.6 LncRNA MIAT 表達(dá)水平與急性冠脈綜合征炎癥因子及內(nèi)皮功能損傷相關(guān)性分析 Pearson 相關(guān)系數(shù)分析結(jié)果表明在ACS 患者中，炎癥因子IL-6、TNF-α、血管內(nèi)皮ET-1 濃度與LncRNA MIAT 表達(dá)水平呈正相關(guān)，而血管內(nèi)皮功能數(shù)值和NO 濃度與其呈負(fù)相關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示在ACS 患者中，LncRNA MIAT 促進(jìn)炎癥反應(yīng)并加劇血管內(nèi)皮功能損傷。

3 討論

ACS 是臨床常見的危急重癥及威脅人類健康和生命的主要死因。盡管隨著醫(yī)療科技發(fā)展，ACS 這一災(zāi)難性疾病的預(yù)后有所改善，但ACS 患者的死亡發(fā)生率仍高達(dá)40%。目前認(rèn)為動脈粥樣斑塊破裂或糜爛和繼發(fā)血栓形成［6］是ACS 的主要病理基礎(chǔ)及發(fā)病機(jī)制，但是為何不同的ACS 類型及病理類型不同，臨床表現(xiàn)差異大，ACS 的始動因素等均未明確。近年來，LncRNA 在心血管疾病中的作用逐漸成為關(guān)注的熱點［7］。LncRNA Bvht可以通過作為心血管調(diào)節(jié)基因網(wǎng)絡(luò)中的核心基因調(diào)節(jié)心血管病的進(jìn)程［8］。LncRNA Fendrr 被證明可通過調(diào)節(jié)染色質(zhì)修飾，從而影響心血管系統(tǒng)的發(fā)育［9］。此外一些LncRNA已被證明與血管緊張素II相關(guān)性疾病如冠脈粥樣硬化有相關(guān)性［10］。越來越多的研究表明，LncRNA 在心血管疾病的病理生理和發(fā)病機(jī)制中扮演著重要角色。

LncRNA MIAT 是2006 年Ishii 團(tuán)隊在進(jìn)行大規(guī)模病例對照研究中發(fā)現(xiàn)的染色體22q12.1 上與MI 存在密切關(guān)聯(lián)的基因［11］。研究表明氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL）可誘導(dǎo)MIAT 的表達(dá)，在平滑肌細(xì)胞實驗中，利用不同濃度的ox-LDL 刺激細(xì)胞，MIAT 表達(dá)水平隨著ox-LDL 的增加而增加，結(jié)果提示LncRNA MIAT 可能參與動脈粥樣硬化病程［12］。本研究結(jié)果表明，LncRNA MIAT 表達(dá)水平是ACS 的獨立危險因素，此外在ACS 病程中，LncRNA MIAT 與IL-6、TNF-α 等炎癥因子顯著正相關(guān)，與血管內(nèi)皮功能顯著負(fù)相關(guān)，提示LncRNA MIAT可能在ACS中具有促進(jìn)炎癥反應(yīng)和加劇內(nèi)皮功能損傷的作用。

本研究結(jié)果提示LncRNA MIAT 可能是ACS 治療的潛在靶點，但LncRNA MIAT 在ACS 中參與炎癥反應(yīng)和內(nèi)皮損傷的具體機(jī)制尚未闡明，需進(jìn)一步研究。相信隨著LncRNA MIAT 在心血管疾病分子生物學(xué)機(jī)制研究的深入，對于ACS 的發(fā)病機(jī)制和診治策略將可能提供新的認(rèn)識。