頂空氣相色譜法測定醋酸阿比特龍中8種溶殘留溶劑

于宗琴，李子靜，唐敏芳，趙海鵬

(1山東醫(yī)學高等專科學校，山東 臨沂 276000；2濰坊市檢驗檢測中心，山東 濰坊 261000)

醋酸阿比特龍是一種口服CYPl7-A1抑制劑，可與潑尼松聯(lián)合使用治療轉移性去勢抵抗性前列腺癌(CRPC)[1]。其合成路線有多種，大多以去氫表雄酮為起始原料，經縮合、取代、偶聯(lián)、酯化等五步反應制得，使用的有機溶劑有乙醇、乙醚、乙酸乙酯、四氫呋喃、正己烷、甲醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚等八種[2-5]。這些溶劑大多屬于二類或三類殘留溶劑，對人體有一定的危害。為了控制這些殘留溶劑的量，本文采用氣相色譜法對其進行檢測，現(xiàn)報道如下。

1 材料

1.1儀器 Agilent 6890型氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司)，氫火焰離子化(FID)檢測器及色譜工作站，Agilent G1888自動頂空進樣器；XS205型十萬分之一電子分析天平(瑞士Mettler-Toledo公司)。

1.2試藥 醋酸阿比特龍(批號分別為190501、190502、190503，由本校藥物化學教研室提供，含量均大于99.0%)；甲醇(批號：65310081612，純度≥99.9% GC)、乙醇(批號：K50447027832，純度≥99.5% AR)、乙醚(批號：20181121，純度≥99.7% AR)、二氯甲烷(批號：1901051，純度≥99.5% AR)、叔丁基甲基醚(批號：1749345435，純度≥99.8% GC)、正己烷(批號：SZBD3390V，純度≥99.5% GC)、乙酸乙酯(批號：171016391F，純度≥99.5% AR)、四氫呋喃(批號：I0970101839，純度≥99.5% GC)。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱型號DB-624，固定相為6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷，程序升溫：起始溫度為40℃，維持10 min，以25℃/min的速率升溫至200℃，維持8 min；進樣口溫度200℃；檢測器為FID，溫度250℃；載氣為高純氮氣，柱流速為2.5 ml/min；分流比為20:1；頂空瓶平衡溫度為70℃，平衡時間為30 min。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液 精密稱取甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷、叔丁基甲基醚、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃適量，用空白溶劑(80% N,N-二甲基甲酰胺水溶液，以下相同)稀釋制成每1 ml中約含甲醇1.5 mg、乙醇2.5 mg、乙醚2.5 mg、二氯甲烷0.3 mg、叔丁基甲基醚2.5 mg、正己烷0.145 mg、乙酸乙酯2.5 mg、四氫呋喃0.36 mg的混合溶液作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液1 ml，置10 ml量瓶中，用空白溶劑稀釋至刻度，搖勻即得對照品溶液。

2.2.2供試品溶液 取醋酸阿比特龍約適量，精密稱定，加入空白溶劑制成濃度為50 mg/ml的溶液，作為供試品溶液。

2.3系統(tǒng)適用性試驗 分別精密量取2 ml對照品溶液、供試品溶液、空白溶劑置于頂空瓶中，按“2.1”項下的色譜條件進樣檢測，記錄色譜圖。結果顯示，各待測殘留溶劑之間的分離度均大于1.5，實現(xiàn)了基線分離，理論板數(shù)按照甲醇計算為21591，完全符合要求。

A

B圖1 對照品 (A)與供試品(B)溶液色譜圖A圖：從左向右依次是甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷、叔丁基甲基醚、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃

2.4線性關系考察 分別準確量取對照品儲備液20、15、10、5、3、2 ml至100 ml容量瓶中，用空白溶劑稀釋至刻度，制成一系列濃度的對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件，進樣檢測，記錄色譜圖，測定峰面積，以對照品濃度(C，μg/ml)為橫坐標、峰面積(A)為縱坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程。結果見表1。

表1 8種殘留溶劑的線性關系和定量限(μg/ml)

2.5精密度試驗 精密量取“2.2.1”項下對照品溶液2 ml，重復頂空進樣10次，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積。結果甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷、叔丁基甲基醚、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃峰面積的RSD分別為0.98%、1.03%、0.87%、1.04%、1.11%、0.95%、0.99%、1.18%，表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗 精密量取“2.2.1”項下對照品溶液適量，分別于室溫下放置0、1、2、4、6 h，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷、叔丁基甲基醚、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃峰面積的RSD分別為1.25%、1.44%、1.05%、1.72%、1.28%、1.36%、1.22%、1.24%(n=6)，表明供試品溶液在室溫下放置6 h內穩(wěn)定性良好。

2.7檢測限和定量限 吸取“2.2.1”項下對照品溶液，用空白溶劑逐級稀釋，按“2.1”項下的色譜條件，按基線噪音峰的3倍計算檢測限，10倍計算定量限，結果見表1。

2.8回收率試驗 采用加樣回收方法測定。分別精密稱取9份阿比特龍樣品(批號：190501)，每份約0.1 g，置10 ml頂空瓶中，各加入相當于“2.2.1”項下對照品溶液質量濃度80%、100%、120%的溶液各2 ml(每個質量濃度3份)，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表2。

(續(xù)表)

2.9樣品測定 精密稱取3批醋酸阿比特龍樣品0.1 g(批號：190501、190502、190503)，置10 ml頂空瓶中，精密加入空白溶劑2.0 ml，混勻，密封，按上述條件頂空進樣，記錄色譜圖和峰面積，以外標法計算3批樣品的殘留溶劑量。結果見表3。

3 討論

醋酸阿比特龍在有機溶劑如二氯甲烷、四氫呋喃中溶解性很好，幾乎不溶于水，本方法選用80% N,N-二甲基甲酰胺的水溶液作為空白溶劑，可以很好地溶解樣品，同時不干擾樣品中殘留溶劑的檢測。本方法采用頂空進樣法，對微量的殘留溶劑也能很好的檢測，樣品分析時間約20 min，分離度、精密度、準確度均能滿足要求，可作為控制醋酸阿比特龍原料藥殘留溶劑的方法。