慢性阻塞性肺疾病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群及免疫細(xì)胞表達(dá)變化與肺功能的相關(guān)性研究

馮軍軍，李鑫，邵旦

作者單位： 315200 寧波，寧波市鎮(zhèn)海區(qū)中醫(yī)醫(yī)院

慢性阻塞性肺疾?。–OPD）是呼吸科常見疾病，近年來(lái)該病的發(fā)病率呈增長(zhǎng)趨勢(shì)[1]。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為在COPD 的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中，存在不同程度的炎性反應(yīng)，且T 細(xì)胞水平異常及免疫失衡是導(dǎo)致COPD 發(fā)生的重要因素[2]。研究表明，T 淋巴細(xì)胞是反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能的有效指標(biāo)之一，CD4+能促進(jìn)細(xì)胞免疫功能的發(fā)揮，而CD8+則對(duì)細(xì)胞免疫功能具有抑制作用，抑制性T 細(xì)胞（Treg）及輔助性T 細(xì)胞17（Th17）常參與患者的各種自身免疫性疾病和慢性感染性疾病，也在COPD的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[3]。本研究通過(guò)檢測(cè)穩(wěn)定期與急性期COPD 患者T 淋巴細(xì)胞亞群及免疫細(xì)胞水平的變化，探討其與肺功能指標(biāo)的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2018年10月至2019年10月寧波市鎮(zhèn)海區(qū)中醫(yī)醫(yī)院收治的160例COPD患者，其中穩(wěn)定期患者（穩(wěn)定期組）80 例，急性期患者（急性期組）80 例。穩(wěn)定期組男51 例，女29 例；年齡51～69歲，平均（58.5±7.0）歲。急性期組男48 例，女32例；年齡53 ～69 歲，平均（59.3±7.3）歲。另外選取同期健康體檢者95 例作為對(duì)照組，其中男68 例，女27 例；年齡54～68歲，平均（60.9±6.1）歲。3 組一般臨床資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)《慢性阻塞性肺疾病診治指南（2013 年修訂版）》[4]中的COPD診斷標(biāo)準(zhǔn)，具有呼吸困難、咳嗽及咳痰等臨床表現(xiàn)，經(jīng)肺功能、CT 等檢查確診；（2）對(duì)本研究知情，且自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并非COPD 引起的高血壓、糖尿病及其他臟器病變者；（2）其他系統(tǒng)感染、免疫功能異常及惡性腫瘤者。

1.3 方法

1.3.1 淋巴細(xì)胞亞群及免疫細(xì)胞水平檢測(cè)方法 采集所有患者晨起空腹血，使用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，取FCM專用試管2 支，分別加入單克隆三色抗體CD4-FITC/CD8-FE 5 l，均加入30 l抗凝血，使用流式細(xì)胞檢測(cè)儀（Cyto-FLEX LX 型，由美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公式生產(chǎn)）檢測(cè)患者外周血T 淋巴細(xì)胞亞群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）水平；淋巴細(xì)胞分離液分離出外周單核細(xì)胞，行表面染色，避光孵育20 min，上機(jī)檢測(cè)Treg及Th17 水平。采用ELISA 法檢測(cè)所有患者的中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞水平。

1.3.2 肺功能檢測(cè)方法 所有患者均由同一專職醫(yī)師行肺功能檢測(cè)，肺功能測(cè)定前24h 需停用口服平喘藥物。肺功能測(cè)定值以吸入沙丁胺醇200 g，10min后檢測(cè)數(shù)值為標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)所有患者第1 秒用力呼氣容積占預(yù)計(jì)值百分比（FEV1%）、用力肺活量占預(yù)計(jì)值百分比（FVC%）及第1 秒用力呼氣容積與用力肺活量比值（FEV1/FVC）。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)；采用Pearson 相關(guān)分析。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組淋巴細(xì)胞亞群比較 3 組C D4+、CD8+、CD4+/CD8+、Treg 及Th17 水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＜0.05），急性期組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平均低于穩(wěn)定期組和對(duì)照組（均P ＜0.05），穩(wěn)定期組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平均低于對(duì)照組（均P ＜0.05）；急性期組Th17 水平均高于穩(wěn)定期組及對(duì)照組（均P ＜0.05），Treg 水平均低于穩(wěn)定期組與對(duì)照組（均P＜0.05）；穩(wěn)定期組Th17水平高于對(duì)照組（P＜0.05），Treg 水平低于對(duì)照組（P ＜0.05）。見表1。

2.2 3 組中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞水平比較 3 組中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），急性期組中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞水平均高于穩(wěn)定期組及對(duì)照組（均P ＜0.05）。見表2。

2.3 3 組肺功能指標(biāo)比較 3 組FVC%差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），急性期組FEV1%、FEV1/FVC 水平均低于穩(wěn)定期組和對(duì)照組（均P ＜0.05），穩(wěn)定期組FEV1%、FEV1/FVC 水平均低于對(duì)照組（均P ＜0.05）。見表3。

2.4 相關(guān)性分析 CD4+/CD8+、Treg 水平與FEV1%、FEV1/FVC 水平呈正相關(guān)（均P ＜0.05），CD8+、Th17、中性粒細(xì)胞水平與FEV1%、FEV1/FVC 水平呈負(fù)相關(guān)（均P ＜0.05）。見表4。

表1 3 組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、Treg、Th17 水平比較 %

表2 3 組中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞水平比較 %

3 討論

目前，COPD 的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，多數(shù)研究者認(rèn)為其發(fā)病機(jī)制主要與炎癥機(jī)制及免疫機(jī)制等有關(guān)[5]。本研究結(jié)果顯示3組受試者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＜0.05），急性期組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平均明顯低于穩(wěn)定期組和對(duì)照組，穩(wěn)定期組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平均低于對(duì)照組（均P ＜0.05）。

3 組Treg、Th17 水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），急性期組Th17 水平均高于穩(wěn)定期組及對(duì)照組，Treg 水平低于穩(wěn)定期組與對(duì)照組；穩(wěn)定期組Th17水平高于對(duì)照組，Treg水平低于對(duì)照組。這說(shuō)明外周血T 淋巴細(xì)胞對(duì)COPD 的發(fā)病產(chǎn)生作用，且與患者持續(xù)的氣道炎癥及肺泡損傷密切相關(guān)。當(dāng)患者機(jī)體發(fā)生炎性反應(yīng)后，為提高機(jī)體對(duì)細(xì)菌的吞噬能力，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生大量的中性粒細(xì)胞[6]。而巨噬細(xì)胞亦能通過(guò)對(duì)細(xì)胞殘片及病原體的吞噬作用，激活淋巴球及其他免疫細(xì)胞，對(duì)病原體做出反應(yīng)[7]。且Th17 可通過(guò)分泌白細(xì)胞介素等炎性細(xì)胞因子來(lái)募集巨噬細(xì)胞及中性粒子，加大炎性反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示CD4+/CD8+、Treg 水平與FEV1%、FEV1/FVC 水平均呈正相關(guān)（均P ＜0.05）；CD8+、Th17、中性粒細(xì)胞水平與FEV1%、FEV1/FVC水平均呈負(fù)相關(guān)（均P＜0.05）。這說(shuō)明T淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)細(xì)胞因子、免疫細(xì)胞與肺功能損傷相關(guān)，分析原因可能由于患者促炎因子與自身免疫細(xì)胞因子比例失衡，導(dǎo)致COPD患者存在長(zhǎng)期的慢性炎性反應(yīng)，損傷上皮細(xì)胞，造成氣道重塑，最終損傷肺功能。綜上所述，COPD 患者肺功能與T淋巴細(xì)胞亞群及中性粒細(xì)胞水平關(guān)系密切，及早發(fā)現(xiàn)并調(diào)整患者細(xì)胞因子及免疫失衡狀態(tài)，對(duì)臨床早期治療COPD 并監(jiān)測(cè)臨床效果有指導(dǎo)意義。

表3 3 組肺功能指標(biāo)比較

表4 T 淋巴細(xì)胞亞群及免疫細(xì)胞表達(dá)與肺功能指標(biāo)的相關(guān)性