老年不同級別宮頸病變患者Treg、IFN-及IL-4水平變化及其臨床意義

周曉涵，寧玉梅，馬軍

宮頸癌是全球女性發(fā)病率較高的惡性腫瘤，其中90%以上的宮頸癌患者會合并人乳頭瘤病毒（HPV）感染。以往研究認(rèn)為HPV 感染多發(fā)生于性生活活躍的中青年女性群體，但近些年發(fā)現(xiàn)老年人HPV 的感染率呈上升趨勢，并在老年宮頸病變中起到關(guān)鍵影響，危及患者生命健康安全[1]。HPV 的持續(xù)感染能否引起宮頸病變與患者的自身免疫狀態(tài)及激素分泌水平等呈相關(guān)性，患者自身免疫系統(tǒng)在HPV介導(dǎo)的致癌作用中起到關(guān)鍵作用[2]。本研究旨在探討老年不同級別宮頸病變患者調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（Treg）、免疫因子-干擾素（IFN- ）及白細(xì)胞介素-4（IL-4）水平的變化及其臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2019 年3 月至2020 年5 月浙江中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院收治的92 例老年宮頸病變患者為研究組，按不同級別分為宮頸癌組39例、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）組34 例（CINⅠ級14 例、CINⅡ級9 例、CIN Ⅲ級11 例）和宮頸炎組19 例，并選取同期40 例健康體檢者為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）研究組患者經(jīng)病理檢查確診為宮頸病變，且均未接受過放化療；（2）所有受檢者及家屬自愿簽署知情同意書；（3）臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）免疫系統(tǒng)疾病；（2）嚴(yán)重心臟、肝腎功能異常；（3）合并惡性腫瘤；（4）合并感染性疾病。對照組40 例健康體檢者年齡60 ～82 歲，平均（69.4±7.3）歲；平均體質(zhì)量指數(shù)（BMI）（20.72±2.13）kg/m2。研究組92 例年齡60～81歲，平均（69.2±7.2）歲；平均BMI（20.21±2.18）kg/m2。

1.2 方法 患者入院后于清晨空腹下抽取外周靜脈血10 ml，置于－80 ℃冰箱中待檢。使用FACS CantoⅡ型流式細(xì)胞儀檢測Treg 細(xì)胞水平，將待檢樣血使用肝素鈉抗凝，抗凝完成后加入CD3、CD4、CD8 抗體10 l，混合搖勻完成后將其放至室內(nèi)避光處，20 min 后加入800 l的紅細(xì)胞裂解液，混合搖勻后繼續(xù)于室內(nèi)避光處放置10 min，待溶血完成后加入1000 l的PBS緩沖液洗滌2 次，采用Diva 分析軟件進(jìn)行結(jié)果分析。使用離心機將樣品管以3000r/min 離心10min，采用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）檢測血清IFN-和IL-4 水平；上述操作均由同一實驗員嚴(yán)格按照操作規(guī)章及試劑盒說明完成，試劑盒購自上海康朗生物科技有限公司。

1.3 統(tǒng)計方法 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗；采用Pearson 相關(guān)分析變量間的相關(guān)性。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組Treg 細(xì)胞、IFN- 及IL-4 水平比較 宮頸癌組Treg 細(xì)胞水平高于CINⅠ、CINⅡ、CIN Ⅲ級組、宮頸炎組和對照組，且CIN Ⅲ級組Treg 細(xì)胞水平高于宮頸炎組和對照組（均P ＜0.05）；宮頸癌組IFN- 水平低于宮頸炎組和對照組（均P ＜0.05）；宮頸癌組IL-4 水平高于CINⅠ、CINⅡ、CIN Ⅲ級組、宮頸炎組和對照組，且CIN Ⅲ級組IL-4 水平高于對照組（均P ＜0.05）。見表1。

2.2 Treg 細(xì)胞與IFN- 及IL-4 水平的相關(guān)性 Treg 細(xì)胞與IFN- 水平呈負(fù)相關(guān)（r=－0.302，P ＜0.05），Treg 細(xì)胞與IL-4 水平呈正相關(guān)（r=0.391，P＜0.05），IFN- 與IL-4 水平無相關(guān)性（r=－0.070，P ＞0.05）。

3 討論

有研究報道，發(fā)生宮頸病變后會抑制其細(xì)胞的免疫功能，大大降低免疫系統(tǒng)的識別能力及殺傷能力，腫瘤細(xì)胞的生長受其異化作用的影響，加快腫瘤細(xì)胞的發(fā)展及轉(zhuǎn)移[3]。Treg 是能夠起到負(fù)性調(diào)節(jié)作用的免疫抑制細(xì)胞，其表達(dá)以IFN- 和IL-4 為主，通過與多種免疫細(xì)胞相互作用，對其活化產(chǎn)生抑制作用。正因如此，Th 細(xì)胞失衡與腫瘤免疫關(guān)系愈發(fā)受到人們重視[4-5]。宮頸病變的發(fā)生是由多因素共同作用所致，Treg 介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞逃逸機制及Th 細(xì)胞的失衡可能是其重要的原因。

Treg細(xì)胞是極為重要的腫瘤免疫抑制細(xì)胞，是組成腫瘤免疫耐受的關(guān)鍵成分，維持和穩(wěn)定機體的免疫狀態(tài)是其主要功能；當(dāng)患者發(fā)生腫瘤時，其機體內(nèi)的Treg 細(xì)胞會顯著增多，強烈抑制了機體對腫瘤抗原的免疫應(yīng)答[6]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌患者的Treg 細(xì)胞水平高于CIN 患者、宮頸炎患者和健康者，且CINⅢ患者的Treg細(xì)胞水平高于宮頸炎患者和健康者。這說明Treg 細(xì)胞水平能夠較好的反應(yīng)患者的免疫功能狀態(tài)，是極為重要的參考指標(biāo)。Treg 細(xì)胞的升高過程可能參與了宮頸病變的發(fā)展過程，其通過分泌TGF- 、IL-10 等抑制性細(xì)胞因子進(jìn)而抑制樹突狀細(xì)胞，并與巨噬細(xì)胞相互作用，以此來參與宮頸病變的免疫躲避[7-8]。

表1 各組Treg 細(xì)胞、IFN- 及IL-4 水平比較

IFN- 作為Th1 細(xì)胞因子的代表，是極為重要的免疫調(diào)節(jié)因子，具有抗腫瘤與免疫調(diào)節(jié)的功能，能夠減慢或組織腫瘤細(xì)胞的病變轉(zhuǎn)化過程，若IFN- 降低則會導(dǎo)致機體抗腫瘤能力下降[9]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌患者的IFN- 水平低于宮頸炎患者和健康者。這說明隨著宮頸病變級別的不斷發(fā)展，導(dǎo)致其細(xì)胞免疫功能及抗腫瘤能力不斷下降，無法對機體細(xì)胞的增生進(jìn)行有效控制，進(jìn)而使其突變發(fā)展至惡性腫瘤。在宮頸病變級別不斷發(fā)展的過程中，患者的IFN- 水平隨之不斷下降，但在宮頸炎、CINⅠ級、CINⅡ級及CIN Ⅲ級中無明顯差異；這說明IFN- 水平在患者由宮頸炎發(fā)展到CIN Ⅲ級的過程中沒有發(fā)生明顯改變，即Th1 細(xì)胞起媒介的作用的細(xì)胞免疫功能沒有受到顯著抑制[10-11]。

IL-4 能夠?qū)h1 細(xì)胞因子的應(yīng)答起到抑制作用，并在Th2 細(xì)胞的發(fā)育過程中起媒介作用，其水平的升高可能是由于腫瘤細(xì)胞分泌可溶性因子，導(dǎo)致Th2增強效應(yīng)發(fā)生而造成的，加快了機體Th2細(xì)胞的分化，致使Th2 細(xì)胞因子的高表達(dá)[12]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌患者的IL-4 水平高于CIN 患者、宮頸炎患者和健康者，且CIN Ⅲ患者的IL-4 水平高于健康者。這說明在宮頸炎向?qū)m頸癌的發(fā)展過程中，Th1 細(xì)胞向Th2 細(xì)胞偏移更明顯，局部免疫抑制的發(fā)生使得癌細(xì)胞更容易逃避免疫系統(tǒng)監(jiān)視，腫瘤發(fā)展更為迅速。通過對Th1 細(xì)胞移動至Th2 細(xì)胞的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，如果能夠阻斷腫瘤部位Th1 細(xì)胞移動至Th2，會強化細(xì)胞免疫反應(yīng)，有利于免疫系統(tǒng)發(fā)揮抗腫瘤作用[13]。

本文結(jié)果顯示，老年宮頸病變患者的Treg 細(xì)胞與IFN- 水平呈負(fù)相關(guān)，與IL-4 水平呈正相關(guān)。其原因在于當(dāng)Treg細(xì)胞水平升高，IL-10 及TGF- 水平會隨之升高，進(jìn)而導(dǎo)致Th1 細(xì)胞移動至Th2細(xì)胞，抑制Th1 細(xì)胞分化的同時，使患者的IFN- 水平降低；IL-10 在Th2 細(xì)胞的發(fā)育過程中起媒介的作用，能夠有效促進(jìn)Th2細(xì)胞因子IL-4水平的升高[14]。Treg細(xì)胞、IL-4 及IFN- 三者之間有一定的相關(guān)性，這提示Treg 細(xì)胞水平的升高在導(dǎo)致宮頸病變免疫異常的同時，還在一定程度上影響了機體Th1 細(xì)胞/Th2 細(xì)胞的平衡，這說明Treg 細(xì)胞、IL-4 及IFN- 一起參與到了宮頸病變的發(fā)生及發(fā)展中。