髓系來源抑制性細(xì)胞對非小細(xì)胞肺癌患者疾病進(jìn)展和預(yù)后的評估價(jià)值

黃威，王芝濤

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，是導(dǎo)致男性癌癥患者死亡的最主要原因[1]。非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）是最常見的肺癌亞型，約占所有肺癌的85%。多數(shù)NSCLC 患者被確診時(shí)常已經(jīng)處于腫瘤晚期，并伴有肺部以外器官轉(zhuǎn)移[2]。對于此類患者，往往缺乏有效的治療手段，治療效果極差。目前，國內(nèi)外有關(guān)NSCLC的病因及發(fā)病機(jī)制尚缺乏統(tǒng)一觀點(diǎn)。因此，深入研究NSCLC患者的發(fā)病機(jī)制及尋找一種有效、可靠的治療靶點(diǎn)具有重要的醫(yī)學(xué)價(jià)值。髓系來源抑制性細(xì)胞（MDSC）是一群新近發(fā)現(xiàn)并具有免疫抑制功能的髓系細(xì)胞亞群[3]。已有多項(xiàng)研究表明，MDSC 通過抑制宿主的先天和獲得性免疫功能來減弱宿主的抗腫瘤免疫反應(yīng)[4]。前期研究表明，MDSC 在膀胱癌[5]、乳腺癌[6]、胰腺癌[7]等患者中數(shù)量異常增多，并且與疾病的進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)。然而，MDSC在NSCLC患者中的作用研究，目前鮮有報(bào)道。本研究旨在探討MDSC在NSCLC 中的表達(dá)情況及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015 年9 月至2019 年9 月于寧波大學(xué)附屬人民醫(yī)院胸外科初次確診的62 例NSCLC 患者（實(shí)驗(yàn)組）為研究對象，其中男38 例，女24 例；平均年齡（52.8±10.4）歲；且均無傳染性疾病及自身免疫性疾病等。TNM分期按照美國癌癥聯(lián)合會（AJCC）第七版癌癥分期標(biāo)準(zhǔn)[8]，其中Ⅰ期9 例，Ⅱ期16例，Ⅲ期18 例，Ⅳ期19 例；腺癌29 例，鱗癌20 例，其他13 例?？偵嫫冢∣S）定義為患者從確診開始至發(fā)生任何原因死亡或隨訪結(jié)束的時(shí)間。其中，20 例初診Ⅰ～Ⅱ和Ⅲa 期NSCLC 患者于本院行外科手術(shù)治療，術(shù)后輔助化療，并定期隨診，資料保存完整。選取本院體檢中心健康成年人30 例為對照組（HC組），男20 例，女10 例；平均年齡（50.5±9.6）歲。兩組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。所有受試者均取得書面知情同意，該研究方案經(jīng)本院倫理委員會審查后予以批準(zhǔn)。

1.2 方法 記錄NSCLC 患者的性別、年齡、TNM分期、病理類型、乳酸脫氫酶（LDH）水平、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及OS 等臨床資料。所有研究對象均采集肝素抗凝血2 ml，取CD14-FTTC、HLA-DRPE、CD45-PC5 單克隆抗體各10 l（Beckman Coulter 公司，USA），與上述抗凝血100 l 混勻。25 ℃孵育15 min 后，采用流式細(xì)胞儀（FC500 MPL，Beckman Coulter 公司，USA）收集檢測數(shù)據(jù)，采用Flowjo 軟件分析數(shù)據(jù)。本研究以CD14+HLA-DRlow/－作為MDSC的免疫表型。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t 檢驗(yàn)或方差分析；采用Pearson 法分析相關(guān)性；采用Kaplain-Meier 法繪制生存曲線，Log-Rank檢驗(yàn)進(jìn)行分析；采用Cox回歸模型分析影響NSCLC 患者生存時(shí)間的因素。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血中MDSC 表達(dá)水平比較 實(shí)驗(yàn)組外周血中MDSC 占CD14+細(xì)胞比例為（29.33±9.21）%，高于對照組的（11.53±3.73）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=10.663，P ＜0.05）。

2.2 MDSC與NSCLC臨床及病理特征的關(guān)系 TNM 分期增加、LDH 升高及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC 患者外周血中MDSC 表達(dá)水平明顯升高（均P ＜0.05），見表1。

2.3 初診NSCLC患者手術(shù)前后外周血中MDSC 表達(dá)水平比較 20 例初診Ⅰ～Ⅱ和Ⅲa 期NSCLC 患者于本院行外科手術(shù)治療，術(shù)后2 ～3 周復(fù)查外周血中MDSC 水平。NSCLC 患者手術(shù)前MDSC 為（28.18±7.88）%，手術(shù)后為（15.18±5.98）%，手術(shù)前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=10.358，P ＜0.05）。

2.4 初診NSCLC患者總生存期與MDSC的相關(guān)性 所有患者均隨訪至死亡或失去隨訪，隨訪時(shí)間為8 ～51個(gè)月，中位生存時(shí)間為32個(gè)月。NSCLC患者外周血MDSC水平與OS呈負(fù)相關(guān)（r=－0.43，P＜0.01）。選取NSCLC 患者外周血MDSC 的平均值29.33%為臨界值（cut-off 值），將患者分為高表達(dá)MDSC 組和低表達(dá)MDSC 組。高表達(dá)和低表達(dá)組NSCLC 患者中位生存時(shí)間分別為21 個(gè)月和39.5 個(gè)月。高表達(dá)組較低表達(dá)組OS 明顯縮短（2=21.3，P ＜0.01）。見封二彩圖7。

2.5 初診NSCLC 患者預(yù)后因素的Cox回歸分析 單因素分析顯示TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和MDSC 是影響NSCLC 患者預(yù)后的不良因素（均P ＜0.05）；多因素分析顯示TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和MDSC 水平均是影響NSCLC 患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（均P ＜0.05）。見表2。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)：（1）與健康對照組相比，MDSC在初診NSCLC中呈高表達(dá)狀態(tài)，這與Huang 等[9]的研究結(jié)果一致。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞通過分泌多種免疫抑制性細(xì)胞因子、生長因子及炎癥因子誘導(dǎo)生成并擴(kuò)增MDSC[10]。此外，MDSC 又可以通過多種途徑來抑制宿主的免疫功能[11]，腫瘤細(xì)胞和MDSC 成為互相促進(jìn)的細(xì)胞群體。在NSCLC 患者中，高表達(dá)狀態(tài)的MDSC 可能參與抑制了NSCLC患者的抗腫瘤免疫反應(yīng)，尤其是抑制了T、B 和NK 等細(xì)胞的免疫功能，從而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。（2）MDSC 表達(dá)水平與NSCLC 患者腫瘤TNM 分期、LDH 水平及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但是與NSCLC 患者性別、年齡及病理分型未見明顯相關(guān)性。前期研究表明，MDSC的表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展及病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)[12]。本研究亦表明MDSC與NSCLC 的疾病進(jìn)展與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，MDSC 可以作為評估MDSC 疾病進(jìn)展的新指標(biāo)。（3）經(jīng)外科手術(shù)后，NSCLC 患者外周血MDSC 水平較手術(shù)前明顯下降，隨著NSCLC 患者腫瘤負(fù)荷的減輕，MDSC 的表達(dá)水平亦明顯下降。因此，MDSC 可以作為評估NSCLC 患者療效的新指標(biāo)。

表1 MDSC 與NSCLC 臨床及病理特征的關(guān)系

表2 初診NSCLC 患者預(yù)后因素的Cox 回歸分析

有研究表明MDSC 在肝細(xì)胞癌、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中可以作為評估患者預(yù)后的指標(biāo)[13-14]。為了進(jìn)一步探討MDSC與NSCLC 患者預(yù)后的關(guān)系，本研究進(jìn)一步分析了MDSC 與NSCLC 患者OS 的相關(guān)性及作為預(yù)后指標(biāo)的可行性。在本研究中，通過相關(guān)性分析和生存分析發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者外周血MDSC 水平與患者的OS 呈負(fù)相關(guān)；MDSC 高表達(dá)的NSCLC 患者的OS明顯縮短。其次，通過單因素和多因素Cox回歸分析發(fā)現(xiàn)，TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及MDSC 水平是NSCLC 患者的獨(dú)立預(yù)后標(biāo)志物。因此，MDSC 對于NSCLC 患者的不良預(yù)后具有獨(dú)立的預(yù)測價(jià)值，MDSC可以作為評估NSCLC 患者預(yù)后的新指標(biāo)。

綜上所述，NSCLC患者的發(fā)病可能與宿主體內(nèi)存在的抑制性腫瘤微環(huán)境有關(guān)。MDSC在NSCLC患者中處于高表達(dá)狀態(tài)，并且與疾病進(jìn)展和療效密切相關(guān)。此外，MDSC還可以作為評估NSCLC患者預(yù)后的新指標(biāo)。