小肽與酵母培養(yǎng)物對舍飼牦牛瘤胃微生物多樣性和發(fā)酵參數(shù)的影響

黎凌鑠， 彭忠利， 陳仕勇， 柏 雪， 苗建軍

（西南民族大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，四川成都610041）

瘤胃作為反芻動物特有的消化器官， 其主要特點就是棲居大量的微生物。 由于瘤胃內(nèi)有很多微生物（細菌、真菌、原蟲等）的存在，使得反芻動物能夠更好利用高纖維的碳水化合物。 飼料在微生物的作用下， 進行一系列的降解與吸收后所產(chǎn)生的氨、肽、氨基酸等作為氮源，飼料中的有機物發(fā)酵所產(chǎn)生的揮發(fā)性脂肪酸作為碳架， 腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）作為能量共同合成菌體蛋白，產(chǎn)物可用來維持反芻動物的營養(yǎng)需求。研究表明，小肽是蛋白質(zhì)的一種存在形式， 能促進氨基酸的吸收、提高蛋白質(zhì)的沉積、促進礦物質(zhì)元素的吸收利用效率， 對瘤胃微生物有益菌群有加速繁殖的功效，縮短了細胞分裂周期，并提高微生物蛋白合成能力，增加抗病力（張瑞仙等，2012）。 在瘤胃中小肽可被微生物直接利用合成微生物蛋白（MCP）（王文娟等，2011）。 殷云浩等（2012）報道，飼糧中添加小肽能夠促進瘤胃微生物的發(fā)酵， 提高揮發(fā)性脂肪酸（VFA）含量和MCP 產(chǎn)量，降低NH3-N濃度和乙/丙，提高能量利用率。 李琍（2000）通過檢測瘤胃菌群發(fā)酵產(chǎn)氣量、VFA 和MCP 含量3個主要指標， 得出小肽能提高纖維分解菌的活力和粗纖維的分解。也有研究表明，酵母菌制劑對反芻動物的瘤胃發(fā)酵有促進作用， 可改善瘤胃乳頭的長度、 寬度， 并使瘤胃壁的厚度得到提高。Chauchey 等（2001）在給無菌羔羊飼喂酵母培養(yǎng)物的試驗中得知， 瘤胃內(nèi)纖維降解菌的定植速度加快，菌群穩(wěn)定性得到穩(wěn)固。 Pinloche 等（2013）在動物體內(nèi)及模擬瘤胃發(fā)酵的體外技術(shù)中都證實，酵母菌制劑能穩(wěn)定瘤胃液的pH，降低瘤胃乳酸的濃度。 酵母菌制劑對瘤胃特殊菌群的促進作用使微生物的生長得到加強，發(fā)酵效果得到優(yōu)化，使很多被消化的糖類用于合成MCP， 降低了碳的數(shù)量，減少揮發(fā)性脂肪酸的生成，瘤胃酸中毒幾率降低（仲偉光等，2018）。 牦牛主要分布在高寒地帶，而牧草的生長期有限， 冬春季節(jié)牧草生長停滯處于枯草和缺草期，這個時期的牧草營養(yǎng)價值較低，蛋白質(zhì)水平不足， 致使牦牛采食量下降、 體重減輕。 鑒于此， 本試驗以低海拔舍飼育肥的方式對牦牛進行飼養(yǎng)， 研究在日糧中添加小肽與酵母培養(yǎng)物對舍飼牦牛瘤胃微生物多樣性及發(fā)酵參數(shù)的影響，為舍飼牦牛育肥的可行性提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 時間與地點 試驗于2017 年11 月至2018年4 月在四川省阿壩藏族羌族自治州茂縣茂欣農(nóng)牧業(yè)發(fā)展有限責任公司進行。

1.2 試驗動物與飼養(yǎng)管理 試驗選取36 頭年齡為4 周歲左右、體重水平相當、健康狀況良好的麥洼牦牛，隨機分為4 個處理組，每個處理組9 個重復(fù)，每個重復(fù)1 頭牛。試驗場海拔1450 m，整個試驗期內(nèi)圈舍最高溫25 ℃，最低溫5 ℃。 試驗開始前對圈舍清理消毒， 牦牛進圈后用伊維菌素注射液肌肉注射驅(qū)蟲，稱重分組后按組栓系飼養(yǎng)。預(yù)飼期30 d，試驗期80 d，每日上午（8：00）和下午（16：00）各飼喂一次，自由采食、飲水。

1.3 試驗設(shè)計 根據(jù)前期大量體外試驗結(jié)果，綜合考慮體外發(fā)酵效果、 經(jīng)濟成本以及飼糧配方在牧區(qū)的可推廣性， 選用精粗比為5：5 的全混合日糧作動物試驗。對照組采用基礎(chǔ)的全混合日糧，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組在全混合日糧基礎(chǔ)上分別添加1%酵母培養(yǎng)物、0.75%小肽和1%酵母培養(yǎng)物+0.75%小肽。 各組日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.4 試驗材料 試驗中所采用的酵母培養(yǎng)物購于美國國際生物營養(yǎng)科技有限公司， 小肽購于成都美溢德生物技術(shù)有限公司。

1.5 樣品采集及指標檢測

1.5.1 瘤胃液采集 采用瘤胃口腔導(dǎo)管法采集瘤胃液（為盡量減少采樣誤差， 插管由同一人操作），用四層紗布過濾瘤胃液并分裝于4 個15 mL離心管和2 個5 mL 凍存管中，15 mL 離心管放于-20°C 保存，用于測定NH3-N、MCP、VFA。 5 mL凍存管放于液氮中保存， 用于測定瘤胃液細菌區(qū)系。

1.5.2 檢測指標 pH：牦牛屠宰后，立即用四層紗布過濾瘤胃內(nèi)容物，收集瘤胃液，使用PHB-5型便攜式pH 計測定瘤胃液pH。

NH3-N： 參照馮宗慈等 （2010） 的方法進行NH3-N 測定， 取10 mL 瘤胃液4000 r/min 離心10 min， 取1 mL 上清液加1 mL 蒸餾水置15 mL玻璃管內(nèi)，加入8 mL 0.2 mol/L 鹽酸搖勻，取混合液0.4 mL 于玻璃管內(nèi)，分別加A 液（2 mL）、B 液（2 mL），漩渦振蕩搖勻靜置10 min，用721 型分光光度計在700 nm 波長進行比色。

VFA：參照曹慶云等（2006）揮發(fā)性脂肪酸檢測方法。瘤胃微生物細菌DNA 的提取及MiSeq 測序交由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進行。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 進行初步處理，然后用SPSS 24.0 統(tǒng)計分析軟件進行單因素方差分析， 用鄧肯氏法進行多重比較，結(jié)果用“平均值±標準差”表示，P＞0.05 表示差異不顯著，P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。 瘤胃菌群相關(guān)分析數(shù)據(jù)在上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司I-Sanger 云平臺進行。

2 結(jié)果與分析

2.1 測序基本數(shù)據(jù)分析 如表2 所示， 通過MiSeq 測序，20 個瘤胃液樣本共獲得1134617 條優(yōu)化序列，每個樣本平均產(chǎn)生56731 條，序列平均長度為438.63 bp 左右。

表2 樣本測序數(shù)據(jù)結(jié)果

2.2 Alpha 多樣性分析 香農(nóng)指數(shù)和辛普森指數(shù)可反映瘤胃菌群的多樣性，香農(nóng)指數(shù)值越大，群落多樣性越高； 辛普森指數(shù)值越大， 群落多樣性越低。如表3 所示，各組的Alpha 多樣性指數(shù)無顯著差異（P＞0.05），從數(shù)值上看，對照組的香農(nóng)指數(shù)高于其他組，辛普森指數(shù)則低于其他組，說明對照組的瘤胃菌群比其他組的多樣性低； 艾斯指數(shù)和趙氏指數(shù)可反映瘤胃菌群的豐富度， 各處理組沒有出現(xiàn)顯著的差異（P＞0.05），從數(shù)值上來看，以對照組的豐富度較好，其他組的豐富度逐漸降低，但其差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。各組樣本覆蓋率均在99%以上，說明測序量合理，能夠很好地反映瘤胃中微生物的種類和結(jié)構(gòu)。

表3 添加小肽、酵母培養(yǎng)物對舍飼育肥牦牛瘤胃細菌群落Alpha 多樣性的影響

2.3 物種組成及差異分析 由圖1 可以看出，對照組、試驗Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組牦牛瘤胃中OTUs 總數(shù)分別為1381、1267、1326、1240， 對照組獨有53 個，Ⅰ組獨有26 個，Ⅱ組獨有21 個，Ⅲ組獨有37 個，四組共同擁有1083 個， 分別占四組OTU 總數(shù)的78.42%、85.48%、81.67%、87.34%， 結(jié)果表明飼喂小肽和酵母培養(yǎng)物的日糧牦牛瘤胃中OTU 組成有比較好的相似度。

經(jīng)過序列對比和注釋，20 個樣本共1687 個OTUs， 從物種分類水平上可分為19 個門、32 個綱、56 個目、97 個科、238 個屬、483 個種。 從門水平對添加小肽和酵母的牦牛瘤胃微生物物種組成的相對豐度分析。由表4 可以看出，相對豐度均在1%以上的門有4 個，分別為擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門和互養(yǎng)菌門， 其中對照組所占總菌的比例分別為50.72%、43.67%、2.25%、1.24%，Ⅰ組分別為56.52%、34.01%、 1.01%、2.66%，Ⅱ組分別為53.38%、40.14%、 1.02%、 2.30%， Ⅲ組分別為61.29%、33.92%、0.82%、2.86%。 在日糧中添加小肽與酵母培養(yǎng)物對舍飼牦牛瘤胃菌群中的變形菌門、螺旋體門、纖維桿菌門和Saccharibacteria存在顯著差異（P＜0.05），其他門之間差異不顯著。試驗Ⅲ組變形菌門相對豐度顯著低于對照組水平，試驗Ⅰ和Ⅱ組之間無差異；小肽和酵母培養(yǎng)物的添加提高了螺旋體門、 纖維桿菌門和Saccharibacteria的相對豐度，試驗Ⅲ組的相對豐度均顯著高于對照組水平。

表4 添加小肽與酵母培養(yǎng)物對舍飼育肥牦牛瘤胃主要細菌豐度的影響（門水平） %

在屬水平上選取豐度前20 和具有差異性的菌屬做差異分析， 如表5 所示， 各組相對豐度在1%以上且占比在前五的屬有普雷沃氏菌屬、擬桿菌科的BS11 菌屬、理研菌科RC9 菌屬、克里斯滕森菌科的R7 菌屬、 疣微菌科NK4A214 菌屬；其中對照組所占比例分別為17.20%、8.24%、3.53%、2.69%、6.09%； Ⅰ組所占比例分別為22.46%、12.31%、7.23 %、4.40%、3.65%； Ⅱ組所占比例分別為20.75%、9.70%、4.95%、3.59%、5.28%； Ⅲ組所占比例分別為26.18%、14.55%、7.85%、4.41%、3.75%。 在日糧中添加小肽與酵母培養(yǎng)物對舍飼牦牛瘤胃菌群中的理研菌科RC9 菌屬、瘤胃球菌2 屬、 普雷沃氏菌科UCG-004 菌屬、 疣微菌科UCG-010 菌屬、帕匹桿菌屬、柔膜菌綱的RF9 菌屬存在顯著的差異（P＜0.05）， 其他菌屬間無差異。其中豐度前四的普雷沃氏菌1 屬、擬桿菌科的BS11 菌屬、理研菌科RC9 菌屬、克里斯滕森菌科R7 菌屬的相對豐度均隨著小肽與酵母培養(yǎng)物的添加而有所提高， 試驗Ⅰ組各優(yōu)勢菌屬的相對豐度較對照組分別高出30.51%、49.51%、104.80%、63.84%， 試驗Ⅱ組分別高出20.57%、17.84%、40.11%、31.73%； 試驗Ⅲ組分別高出51.71%、76.58%、122.03%、61.62%，均以試驗Ⅲ組相對豐度最高。試驗Ⅲ組理研菌科RC9 菌屬、普雷沃氏菌科UCG-004 菌屬、疣微菌科UCG-010 菌屬和帕匹桿菌屬、 柔膜菌綱的RF9 菌屬的相對豐度顯著高于對照組水平，試驗Ⅰ和Ⅱ組之間無顯著差異，差異屬中只有瘤胃球菌屬的相對豐度隨著小肽與酵母培養(yǎng)物的添加而降低，且差異極顯著（P＜0.01）。

表5 添加小肽與酵母培養(yǎng)物對舍飼育肥牦牛瘤胃主要細菌豐度的影響（屬水平）%

2.4 小肽與酵母培養(yǎng)物對舍飼牦牛發(fā)酵參數(shù)的影響 從表6 可以看出， 各試驗組舍飼育肥牦牛的NH3-N、乙酸和丁酸均低于對照組水平，但未達到差異顯著的水平（P＞0.05），從小到大依次為Ⅲ組＜Ⅰ組＜Ⅱ組，NH3-N 水平較對照組分別降低 了10.49% 、9.6% 、5.02% ， 乙 酸 分 別 降 低15.92%、7.76%、4.15%。 試驗Ⅱ組pH 和丙酸值與對照組差異不顯著， 試驗Ⅰ和Ⅲ組之間差異不顯著。 試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組丙酸含量較對照組分別提高了15.89%、4.67%、22.66%； 乙/丙分別降低了20.28%、8.59%、31.33%。

表6 添加小肽與酵母培養(yǎng)物對舍飼育肥牦牛瘤胃發(fā)酵的影響

3 討論

3.1 測序基本數(shù)據(jù)分析 瘤胃菌群的測序深度是堿基總量與基因組大小的比值， 測序所帶來的錯誤率會隨著測序深度及覆蓋度的提高而下降；覆蓋度即表示所取樣品能否真實地反映瘤胃細菌的組成及種類的分布情況， 兩者呈正比。 本試驗中，20 個瘤胃液樣本共獲得1134617 條優(yōu)化序列，每個樣本平均產(chǎn)生56731 條，序列平均長度為438.63 bp 左右，與陳蕓等（2017）在黑山羊和甄玉國等（2018）在綿羊的試驗中所得出的測序深度一致。 同時，本試驗20 個瘤胃液樣本測序覆蓋度均超過了99%，Mao 等（2015）研究表明，覆蓋度高于97%時，說明測序樣品取樣充分。因此，本試驗的測序結(jié)果能覆蓋牦牛瘤胃中大多數(shù)細菌群落， 能真實地反映舍飼育肥牦牛瘤胃中細菌的組成情況。

3.2 物種組成分析 在反芻動物的瘤胃中，微生物菌群的組成是判斷動物健康與否的重要指標，其群落對動物機體的健康有關(guān)鍵的作用（謝驍2018）。 有研究表明，擬桿菌門和厚壁菌門是反芻動物瘤胃中的優(yōu)勢菌門 （Myer 等，2015；Singh 等，2013；Marcelo 等，2013）。 楊 琦 玥 等（2017） 在牦牛的試驗中發(fā)現(xiàn)擬桿菌門、 厚壁菌門、變形菌門和螺旋菌門四種優(yōu)勢菌。 本試驗所得到的優(yōu)勢菌門分別為擬桿菌門、 厚壁菌門、變形菌門和互養(yǎng)菌門， 和前人研究結(jié)論有所差異，可能是由于所選用的牦牛品種、環(huán)境條件以及日糧組分不同等所造成的。

甄玉國等（2018）在綿羊的試驗中得出，普雷沃氏菌、理研菌科的RC9 菌屬、瘤胃球菌、Saccharofermentans為優(yōu)勢菌屬。高雨飛等（2016）在分析錦江牛時利用MiSeq 測序技術(shù)發(fā)現(xiàn)， 優(yōu)勢菌屬分別為普雷沃氏菌屬、帕拉普氏菌屬、理研菌屬。 而本研究中，各處理組在屬水平的優(yōu)勢菌屬為，擬桿菌科的BS11 菌屬、理研菌科的RC9 菌屬、普雷沃氏菌1 屬、疣微菌科NK4A214 菌屬、克里斯滕森菌科的R7 菌屬，與前人的研究有所不同，推測差異產(chǎn)生的原因是研究對象品種、所選用添加劑、動物個體差異及基礎(chǔ)日糧營養(yǎng)成分不同所引起的。Kobayashi（2006）在研究中發(fā)現(xiàn)，家養(yǎng)反芻動物瘤胃菌群的豐度不如野生和半家養(yǎng)的反芻動物，可能是由于野生和半家養(yǎng)反芻動物飼料結(jié)構(gòu)及瘤胃菌群較復(fù)雜導(dǎo)致的。

3.3 物種差異性分析 從門水平看，添加小肽和酵母培養(yǎng)物顯著提高了螺旋菌門和纖維桿菌門的相對豐度，并顯著降低了變形菌門的相對豐度，對擬桿菌門和厚壁菌門兩種優(yōu)勢菌門無顯著影響。甄玉國等（2018）在綿羊的試驗中得出，酵母培養(yǎng)物能增加瘤胃中擬桿菌門和纖維桿菌門的相對豐度，并且減少變形菌門的相對豐度。陳蕓（2017）在山羊飼喂抗菌肽后發(fā)現(xiàn)， 瘤胃細菌區(qū)系中厚壁菌門、疣微菌門和無壁菌門的相對豐度顯著升高，擬桿菌門有上升的趨勢。本試驗結(jié)果與之相差較大，可能是由于添加劑選擇、動物品種及其生理狀態(tài)、外界環(huán)境及日糧組成不同而產(chǎn)生差異。 有研究表明，螺旋菌門能夠降解纖維素和半纖維素類物質(zhì)，對纖維性飼糧成分轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性脂肪酸產(chǎn)生重要影響（張紅濤，2017），擬桿菌門能分解日糧中的糖類和蛋白質(zhì)類大分子物質(zhì)， 協(xié)助宿主利用機體不能消化的多糖，提高對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收效率，增加育肥效果（Tremaroli 等，2012）。

從屬水平分析， 添加小肽和酵母培養(yǎng)物顯著提高了理研菌科RC9 菌屬這一種優(yōu)勢菌屬的相對豐度，普雷沃氏菌1 屬、擬桿菌科的BS11 菌屬和克里斯滕森菌科的R7 菌屬的相對豐度均隨著小肽與酵母培養(yǎng)物的添加有所提高， 以試驗Ⅲ組相對豐度最高， 促進了蛋白質(zhì)等大分子的消化吸收。 本研究發(fā)現(xiàn)，隨著小肽和酵母培養(yǎng)物的添加，試驗Ⅲ組理研菌科RC9 菌屬、 普雷沃氏菌科UCG-004 菌屬、疣微菌科UCG-010 菌屬、帕匹桿菌屬、柔膜菌綱的RF9 菌屬的相對豐度顯著高于對照組水平，試驗Ⅰ和Ⅱ組之間無顯著的差異，差異屬中只有瘤胃球菌屬呈降低的趨勢， 且差異極顯著（P＜0.01）。

3.4 小肽與酵母培養(yǎng)物對舍飼育肥牦牛發(fā)酵參數(shù)的影響 pH 作為瘤胃發(fā)酵參數(shù)中最基本的指標， 是研究瘤胃內(nèi)環(huán)境微生物發(fā)酵情況最直接的指標， 對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和瘤胃微生物的生長產(chǎn)生影響，纖維分解菌的適宜pH 為6.1 ～6.9，淀粉分解菌為5.3 ～6.2，原蟲為5.6 ～6.9（Cardozo 等，2005）。李莉（2001）在研究中發(fā)現(xiàn)，若pH 低于6.2， 瘤胃內(nèi)的纖維素消化作用將會受到抑制；動物采食后，糖類在瘤胃內(nèi)進行發(fā)酵，產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸的速度加快、 數(shù)量也較多， 使得瘤胃中VFA 濃度過高，pH 明顯下降造成瘤胃酸中毒（李海燕等，2008）。 Chaucheyras-Durand 等（2010）報道，酵母菌對瘤胃沒有影響，甚至有降低瘤胃的作用，這與本試驗Ⅰ組結(jié)果相一致；本試驗Ⅱ組結(jié)果與王文娟等（2011） 在綿羊試驗中得出結(jié)論不一致， 瘤胃灌注大豆小肽對瘤胃液pH 不會造成顯著性影響， 可能是選用的動物及日糧配方的差異所造成的。 而Ⅲ組pH 最低，但在正常范圍內(nèi)，說明不會對瘤胃發(fā)酵造成顯著影響。

瘤胃的氨氮濃度直接關(guān)系到蛋白質(zhì)的降解與合成是否達到平衡， 也是飼料中蛋白質(zhì)與非蛋白氮在反芻動物瘤胃中的降解產(chǎn)物， 合成菌體蛋白后可直接進入血液循環(huán)， 氨氮濃度主要受飼料中蛋白質(zhì)的溶解度、瘤胃微生物的活性、瘤胃蠕動頻率、食糜在瘤胃中的排空速度等指標的影響（栗文鈺，2009）。 最適宜瘤胃微生物生長的氨氮濃度為6.3 ～27.5 mg/dL （Preston，1987）， 本試驗結(jié)果與Arroquy 等（2004）和Wickersham 等（2008）所報道的結(jié)果一致，說明瘤胃內(nèi)NH3-N 濃度能滿足瘤胃微生物生長的需要， 這可能是由于所選取的添加劑類型不同使微生物的群體結(jié)構(gòu)發(fā)生變化， 從而導(dǎo)致對氮素降解速度和氨氮利用率的不同。

VFA 作為日糧中有機物的發(fā)酵產(chǎn)物，是維持動物機體正常生長繁殖的關(guān)鍵因素， 其含量及組成比例是反映瘤胃消化代謝活動的重要指標（高健，2017） 。 樸光赫（2017）發(fā)現(xiàn)，添加酵母培養(yǎng)物可增加VFA 產(chǎn)量，降低乙/丙。 閆佰鵬等（2018）研究表明， 酵母培養(yǎng)物對瘤胃VFA 產(chǎn)量無影響，降低了乙/丙，Wang 等（2013）研究表明，小肽能夠提高丙酸含量，并顯著降低乙/丙。 殷云浩（2012）在體外試驗表明， 不同氨基酸組成的小肽隨著添加比例的升高，丙酸含量逐漸升高，乙/丙逐漸降低，促進異丁酸和異戊酸的生成，從而改變發(fā)酵類型。本試驗Ⅰ組與前人結(jié)論相一致， 丙酸含量得到顯著提高，乙/丙比值顯著降低，使得發(fā)酵類型逐漸向丙酸型轉(zhuǎn)變；試驗Ⅱ組乙/丙與夏楠等（2009）試驗結(jié)果相近，乙/丙與能量轉(zhuǎn)化效率相關(guān)，試驗中乙/丙下降，表明丙酸的比例提高，能量的利用效率提高。乙酸是反芻動物乳脂合成的主要前體，丙酸則是反芻動物重要的葡萄糖前體， 可經(jīng)血液循環(huán)到達肝臟，在肝臟內(nèi)異生成糖元，對動物機體能量的貯存有積極的意義（汪水平，2004）。本試驗Ⅲ組的丙酸含量最高，乙/丙值最低，說明小肽和酵母培養(yǎng)物能夠共同作用于牦牛的育肥。 小肽與酵母培養(yǎng)物單獨添加或同時添加提高了螺旋菌門和擬桿菌門的相對豐度， 進而提高了動物體對纖維素和半纖維素類物質(zhì)的降解力以及對日糧中的糖類和蛋白質(zhì)類大分子物質(zhì)的分解力， 最終達到育肥效果。

4 結(jié)論

小肽與酵母培養(yǎng)物單獨或同時添加均降低了瘤胃液pH、NH3-N、乙酸和丁酸的濃度，但差異不顯著。丙酸含量顯著增加，瘤胃發(fā)酵類型從乙酸型向丙酸型發(fā)酵轉(zhuǎn)變，有利能量利用效率的提高，以1%酵母培養(yǎng)物+0.75%小肽組效果最佳，建議小肽與酵母同時添加。

各處理組之間瘤胃微生物菌群的豐富度、多樣性及覆蓋度無顯著差異。從門水平看，相對豐度1%以上優(yōu)勢菌門有擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門和互養(yǎng)菌門， 小肽和酵母培養(yǎng)物的添加增加了擬桿菌門和互養(yǎng)菌門的相對豐度， 并降低了變形菌門的相對豐度；從屬水平分析，相對豐度在1%以上且占比前四的優(yōu)勢菌屬有普雷沃氏菌、 擬桿菌科的BS11 菌屬、 理研菌科的RC9 菌屬和克里斯滕森菌科的R7 菌屬， 表明小肽和酵母培養(yǎng)物單獨或同時添加均能提高優(yōu)勢菌屬的相對豐度。