血站酶免檢測實驗室質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)分析方法探討

刁麗波，梁艷嬌

（大理白族自治州中心血站，云南大理 671000）

酶免檢測是許多采供血機構(gòu)在血液檢測策略中最常選擇的血清學(xué)檢測方法，《血站技術(shù)操作規(guī)程（2019 版）》〔1〕中明確規(guī)定：選擇能夠反映試驗系統(tǒng)變化的參數(shù)進(jìn)行試驗系統(tǒng)監(jiān)控，包括但不限于血清學(xué)檢測系統(tǒng)初復(fù)試反應(yīng)率及兩者的比例（復(fù)試有反應(yīng)性標(biāo)本數(shù)∕初次試驗有反應(yīng)性標(biāo)本數(shù)）。但由于酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）的方法學(xué)特點，血站血液檢測的特殊性，實驗室檢測能力差異等原因，往往導(dǎo)致檢測質(zhì)量參差不齊。本文擬通過對酶免檢測實驗室檢測數(shù)據(jù)的分析，探討通過觀察分析質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)，做好過程控制的方法。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源2018 年1 月—2019 年8 月大理白族自治州中心血站無償獻(xiàn)血者標(biāo)本，獻(xiàn)血前征詢及體格檢查均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》。標(biāo)本于獻(xiàn)血時同步留取，其中，酶免檢測標(biāo)本在采集當(dāng)日經(jīng)3 000 r∕min 離心10 min，于2～8 ℃保存，1 周內(nèi)檢測完畢。

1.2 檢測試劑HBsAg 檢測試劑盒（北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司，批號：B20170628、B20170839、B20180102 等8 批次；法 國BIO-RAD 公 司，批號：7A0226、7G0232、7M0239 等6 批次）；抗-HCV 檢測試劑盒（北京萬泰生物藥業(yè)有限公司，批號：CS20170605、CS20180101、CS20180304 等8 批 次；英科新創(chuàng)（廈門）科技股份有限公司，批號：2017065815、2017105824、2017125829 等9 批次）；抗-HIV-Ag∕Ab-1+2 檢測試劑盒（北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司，批號：H20170707、H20170910、H20171213 等8 批次；法國BIO-RAD 公司，批 號：7C0393、7H0405、8C0424 等6 批次）；抗-TP 檢測試劑盒（北京萬泰生物藥業(yè)有限公司，批號：N20170725、N20171033、N20180102 等8 批次；英科新創(chuàng)（廈門）科技股份有限公司，批號：2017067514、2017127523、2017127529等9批次）。

1.3 主要檢測設(shè)備Hamilton STAR-Let 液體工作站（瑞士HAMILTON 公司）；FAME 全自動酶免分析儀（瑞士HAMILTON公司）。

1.4 檢測策略及判定規(guī)則每份標(biāo)本均使用2 個不同廠家的ELISA 試劑進(jìn)行酶免檢測，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作并判定結(jié)果。2 種試劑檢測結(jié)果均為有反應(yīng)性和均為灰區(qū)的判為酶免檢測不合格；1 種試劑檢測結(jié)果為有反應(yīng)性或灰區(qū)的，使用該試劑對原血樣標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試，結(jié)果均為無反應(yīng)性的判為酶免檢測合格，結(jié)果任意1孔為反應(yīng)性或灰區(qū)的判為酶免檢測不合格?；覅^(qū)設(shè)置：HBsAg為0.6 ≤s∕co＜1，抗-HCV、抗-HIV 和 抗-TP 均 為0.8 ≤s∕co＜1。

1.5 質(zhì)量控制使用試劑盒提供的陰陽性對照和康徹斯坦公司的室內(nèi)質(zhì)控品進(jìn)行有效性控制；實驗室每年參加國家衛(wèi)生健康委員會臨床檢驗中心開展的室間質(zhì)評活動對檢測質(zhì)量進(jìn)行評價，成績合格。

2 結(jié)果

2.1 酶免檢測2018 年1 月— 2019 年8 月共檢測54 622 份標(biāo)本，由反應(yīng)性數(shù)分別計算出試劑1 及試劑2的反應(yīng)性率。見表1。

2.2 單試劑初次檢測反應(yīng)性標(biāo)本雙孔復(fù)試反應(yīng)性率檢測使用χ2檢驗比較同一項目2 種試劑的復(fù)試反應(yīng)性率，HBsAg 復(fù)試反應(yīng)性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），抗-HCV、抗-HIV 和抗-TP 復(fù)試反應(yīng)性率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表1 酶免四項檢測結(jié)果統(tǒng)計（n=54 622）

表2 單試劑初次檢測反應(yīng)性標(biāo)本雙孔復(fù)試反應(yīng)性率檢測情況統(tǒng)計（n=54 622）

2.3 同一試劑所有批次的單試劑初次檢測反應(yīng)性標(biāo)本復(fù)試平均反應(yīng)性率用各批次復(fù)試反應(yīng)性率計算SD、CV（%），分析反應(yīng)性率的離散程度。見表3。

2.4 試劑檢測反應(yīng)性率分布根據(jù)檢測結(jié)果，按月統(tǒng)計2 個不同廠家的ELISA 試劑檢測反應(yīng)性率分布。見圖1～4。

表3 2種試劑各批次單試劑初次檢測反應(yīng)性標(biāo)本雙孔復(fù)試平均反應(yīng)性率統(tǒng)計

3 討論

血站酶免檢測中，由于實驗室檢測體系和檢測能力存在差別，檢測過程質(zhì)量控制問題在小型血站實驗室中尤為突出。本文擬通過對大理白族自治州中心血站酶免檢測質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)的回顧性分析，提供一些小型血站酶免檢測中的關(guān)注視角。

圖1 HBsAg 2種試劑檢測反應(yīng)性率分布圖

圖2 抗-HCV 2種試劑檢測反應(yīng)性率分布圖

圖3 抗-HIV Ag∕Ab（1+2）2種試劑檢測反應(yīng)性率分布圖

圖4 抗-TP 2種試劑檢測反應(yīng)性率分布圖

同一ELISA 項目，反應(yīng)原理不同，檢測性能并非一致〔2〕。從表2可以看出，2種抗-HCV試劑，一為夾心法，一為間接法，雙孔復(fù)試反應(yīng)性率相差較大；2 種抗-HIV 試劑，均為第四代試劑（Ag-Ab 聯(lián)合檢測），雙孔復(fù)試反應(yīng)性率接近；2種HBsAg試劑，同為夾心法，理論上復(fù)試反應(yīng)性率應(yīng)接近，但實際上在檢測中差異較大。由此提示，應(yīng)進(jìn)一步關(guān)注HBsAg檢測的過程控制，如試劑配制、液體分配、孵育溫度、洗板參數(shù)等。

由于ELISA 方法的局限性，假陽性較多〔3〕，加之為了進(jìn)一步降低經(jīng)血傳播相關(guān)傳染病的風(fēng)險，血站普遍建立了“灰區(qū)”緩沖帶〔4-6〕。有報道〔7〕認(rèn)為獻(xiàn)血者篩查的ELISA 檢測，HBsAg 的假陽性率甚至達(dá)到了6成。從表3可以看出，HBsAg試劑2各批號雙孔復(fù)試平均反應(yīng)性率最高，CV最小，抗-HCV試劑1 各批號雙孔復(fù)試平均反應(yīng)性率最低，CV 最大。HBsAg（試劑2）、抗-HIV（試劑1∕試劑2）、抗-TP（試劑1）同一廠家多個批號間差異較小，CV 均在40%以下；2 種抗-HCV 試劑多個批號間差異均較大，其中試劑1 的CV 最高，為147.10%。當(dāng)然，抗-HCV（試劑1）反應(yīng)性標(biāo)本數(shù)最少，檢測下限也較低，雙孔復(fù)試反應(yīng)性率的這種差異可能跟樣本總數(shù)少及檢測下限低有關(guān)。但也提示我們，選擇酶免試劑，不能僅僅追求較低的檢測下限，也應(yīng)把重復(fù)性作為酶免檢測質(zhì)量保證的關(guān)鍵控制點之一。

復(fù)試∕初試反應(yīng)性率的變化體現(xiàn)了試驗過程狀態(tài)、實驗室檢測能力和質(zhì)量管理體系運行狀態(tài)，反映了實驗室檢測的整體情況〔8〕。結(jié)合表1和圖1～4，月檢測反應(yīng)性率明顯高于總反應(yīng)性率時，應(yīng)考慮是否因檢測過程，包括獻(xiàn)血者篩選、實驗人員操作方法、設(shè)備故障頻率、試劑物料儲存、使用條件和批號更換、試驗環(huán)境溫濕度改變等導(dǎo)致假反應(yīng)性增多；月檢測反應(yīng)性率明顯低于總反應(yīng)性率時，應(yīng)分析是否有漏檢的風(fēng)險。2 種試劑的反應(yīng)性率趨勢不一致時，如圖3 中抗-HIV 2018 年11 月與12 月2 種試劑的反應(yīng)性率相比，試劑1 的11∕12 月反應(yīng)性率接近，而試劑2的12月反應(yīng)性率明顯升高，應(yīng)考慮12月跟試劑2 有關(guān)的檢測過程是否存在問題，有無改進(jìn)的方法；2 種試劑反應(yīng)性率的總趨勢突然改變時，如圖1 中，HBsAg 檢測的反應(yīng)性率一直是試劑2 高于試劑1，但在2019 年3 月，試劑1 的反應(yīng)性率突然高于試劑2，應(yīng)及時回顧分析發(fā)生趨勢改變的原因并找出改進(jìn)措施。

自動化檢測過程應(yīng)實時監(jiān)控，盡量減少人工干預(yù)。文中所述的單試劑初試反應(yīng)性標(biāo)本，雙孔復(fù)試時均為手工加樣，雖然手工移液器和自動化加樣設(shè)備均經(jīng)過檢定或校驗，但二者仍然存在差異，并在多次分配液體等過程中放大了這種差異。全自動檢測的精準(zhǔn)、低錯是必然的〔9〕，因此，從2019 年9 月1日起，對所有雙孔復(fù)試的標(biāo)本，全部采用自動化加樣，以保證檢測體系的穩(wěn)定性，效果如何，我們將持續(xù)關(guān)注。

綜上所述，酶免檢測實驗室應(yīng)重視對質(zhì)量控制指標(biāo)的分析，不能把某次試驗及結(jié)果當(dāng)做一個獨立的事件，建立檢測結(jié)果是檢測體系整體過程綜合能力體現(xiàn)的觀念，通過對質(zhì)量控制指標(biāo)的分析與回顧，進(jìn)一步提高檢測質(zhì)量。