伊犁貝母中化學(xué)成分及其體外抗腫瘤活性研究

金悅仙，魏鴻雁，馬曉玲，陳 剛，石磊嶺*，張 晶

伊犁貝母中化學(xué)成分及其體外抗腫瘤活性研究

金悅仙1, 2，魏鴻雁2，馬曉玲2，陳 剛2，石磊嶺2*，張 晶1*

1. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130118 2. 新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830002

研究伊犁貝母的化學(xué)成分及其體外抗腫瘤活性。應(yīng)用多種色譜方法進(jìn)行分離純化，利用NMR、MS等波譜技術(shù)結(jié)合理化性質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定；并采用MTT法評(píng)價(jià)化合物對(duì)子宮頸癌HeLa細(xì)胞、結(jié)腸癌Ht-29細(xì)胞和人惡性黑色素瘤A375細(xì)胞的體外抑制活性。從伊犁貝母95%乙醇提取物中分離得到13個(gè)化合物，分別鑒定為1--阿魏酰單甘油酯（1）、4-羥基苯甲醛（2）、環(huán)()-脯-()-苯丙（3）、香草酸（4）、2-羥基-3-苯基丙酸甲酯（5）、燈盞花苷II（6）、反式肉桂酸甲酯（7）、西貝母堿（8）、阿魏酸乙酯（9）、貝母辛（10）、環(huán)(脯氨酸-甘氨酸)（11）、西貝母堿苷（12）、6,7-二甲氧基-2-萘乙酸（13）。化合物1～7、9、11、13為首次從伊犁貝母屬中分離得到；化合物3、8、10～12對(duì)3種腫瘤細(xì)胞株具有不同程度的抑制活性，其中化合物10活性較強(qiáng)，其半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為22.07、52.47、48.27 μmol/L。

伊犁貝母；生物堿類；抗腫瘤活性；燈盞花苷II；西貝母堿；貝母辛；西貝母堿苷

伊犁貝母Schrenk為百合科（Liliaceae）貝母屬L.植物，主要分布于新疆伊犁河流域[1-2]。其鱗莖入藥，味苦、甘、微涼，歸肺、心經(jīng)，臨床上是用于治療呼吸系統(tǒng)疾病的良藥。伊犁貝母被收錄在《中國(guó)藥典》2015年版中的“伊貝母”項(xiàng)下[3]，是新疆維吾爾族傳統(tǒng)維藥之一[4]，且產(chǎn)量較高，和同類貝母相比較具有較高的生物堿含量[5]?，F(xiàn)代藥理學(xué)表明，伊犁貝母具有鎮(zhèn)咳祛痰、抗炎、抗菌等生理活性[6-7]。為進(jìn)一步闡明伊犁貝母的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究對(duì)伊犁貝母95%乙醇提取物進(jìn)行了系統(tǒng)研究，分離得到了13個(gè)化合物，分別鑒定為1--阿魏酰單甘油酯（1--feruloylglycerol，1）、4-羥基苯甲醛（4-hydroxy- benzaldehyde，2）、環(huán)()-脯-()-苯丙[cyclo()-Pro- ()-Phe，3]、香草酸（vanillic acid，4）、2-羥基-3-苯基丙酸甲酯（2-hydroxy-3-phenylpropanoic acid methyl ester，5）、燈盞花苷II（erigeside II，6）、反式肉桂酸甲酯（methyl cinnamate，7）、西貝母堿（imperialine，8）、阿魏酸乙酯[ethyl 3-(4-hydroxy- 3-methoxyphenyl) acrylate，9]、貝母辛（peimisine，10）、環(huán)(脯氨酸-甘氨酸)[cyclo(pro-gly)，11]、西貝母堿苷（sipeimine-3β--glucoside，12）、6,7-二甲氧基-2-萘乙酸（6,7-dimethoxynaphthalene-2- carboxylic acid，13）。其中，化合物1～7、9、11、13為首次從伊犁貝母屬中分離得到。通過MTT法評(píng)價(jià)了13個(gè)化合物針對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞、結(jié)腸癌Ht-29細(xì)胞、人惡性黑色素瘤A375細(xì)胞的體外抑制活性，結(jié)果顯示化合物3、8、10～12分別對(duì)3種腫瘤細(xì)胞株具有不同程度的抑制活性，其中化合物10活性最強(qiáng)，其半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為22.07、52.47、48.27 μmol/L。

1 儀器與材料

Bruker Avance III 600型核磁共振波譜儀（德國(guó)Bruker公司）；賽默飛世LTQ-Obitrap XL液質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)Thermo Fisher公司）；柱色譜硅膠和薄層色譜用硅膠G、H、GF254（青島海洋化工有限公司）；HW-40C凝膠（Toyopearl公司），V-3003K型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、SZ-93型循環(huán)水真空泵（上海振捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；超聲波清洗儀（天津科貝爾光電技術(shù)有限公司）；BS223S分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；常規(guī)試劑均為分析純（北京化工廠）。

伊犁貝母（栽培）采自新疆博爾塔拉蒙古自治州溫泉縣安格里格鄉(xiāng)奇其爾根布呼村，經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所賈曉光研究員鑒定為伊犁貝母Schrenk的干燥鱗莖。

2 提取與分離

取伊犁貝母鱗莖部20 kg，均分成2部分，陰干，粉碎為粗粉，每個(gè)部分（10 kg）均用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，減壓回收溶劑，得到的總浸膏分為2部分，第1部分浸膏（1089 g）、第2部分浸膏（991 g）。

第1部分總浸膏用水分散后，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯各萃取3次，萃取液減壓濃縮至干，最終得到石油醚部位浸膏49.2 g、氯仿部位浸膏56.1 g、醋酸乙酯部位浸膏94.5 g。取氯仿部位浸膏（56.1 g）經(jīng)硅膠柱（100～200目）色譜，石油醚-氯仿（40∶1→0∶1）、氯仿-甲醇（80∶1→0∶1）梯度洗脫得到10個(gè)流分Fr. 1～10。Fr. 5（2.7 g）經(jīng)硅膠柱（100～200目）色譜，石油醚-氯仿（1∶1.5→0∶1）、氯仿-甲醇（80∶1→0∶1）梯度洗脫得到8個(gè)流分Fr. 5-1～5-8。Fr. 5-4經(jīng)HPLC半制備色譜（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，60%甲醇）得到化合物1（2.4 mg）和2（2.3 mg）。Fr. 5-6經(jīng)C18反相柱色譜（30%～90%甲醇溶液梯度洗脫）得到6個(gè)流分Fr. 5-6-1～5-6-6，F(xiàn)r. 5-6-2經(jīng)HPLC半制備色譜（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，65%甲醇）得到化合物3（3.2 mg）。Fr. 6（2.9 g）經(jīng)C18反相柱色譜（30%～90%甲醇溶液梯度洗脫）得到6個(gè)流分Fr. 6-1～6-6，F(xiàn)r. 6-1經(jīng)反復(fù)凝膠及高效液相色譜分離純化得到化合物4（4.9 mg）。Fr. 7（3.1g）經(jīng)C18反相柱色譜（30%～90%甲醇溶液梯度洗脫）得到6個(gè)流分Fr. 7-1～7-6，F(xiàn)r. 7-2經(jīng)HPLC半制備色譜（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，60%甲醇）得到化合物5（2.9 mg）。Fr. 9（3.3 g）經(jīng)C18反相柱色譜（30%～90%甲醇梯度洗脫）得到6個(gè)流分Fr. 9-1～9-6，F(xiàn)r. 9-2經(jīng)HPLC半制備色譜（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，55%甲醇）得到化合物6（3.4 mg）。

第2部分用2%鹽酸（pH 3.5）捏溶，濾得酸液，將酸液用石油醚萃取脫脂, 然后用氨水調(diào)pH值至10，依次用氯仿及水飽和的正丁醇萃取，得到氯仿部位（18.2 g）和正丁醇部位（70.3 g）。取氯仿部位浸膏（18.2 g）經(jīng)硅膠柱（100～200目）色譜，石油醚-丙酮-三乙胺（20∶1∶0.1→1∶5∶0.1）梯度洗脫得到9個(gè)流分Fr. A～I(xiàn)。Fr. A經(jīng)反復(fù)硅膠、凝膠色譜分離純化，得到化合物7（2.8 mg）。Fr. B經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶得到化合物8（30 mg）。Fr. C經(jīng)HPLC半制備色譜（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，60%甲醇）得到化合物9（2.5 mg）。Fr. E經(jīng)HPLC半制備色譜（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，70%甲醇）得到化合物10（3.1 mg）和11（4.4 mg）。Fr. G經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶得到化合物12（62.3 mg），其母液經(jīng)HPLC半制備色譜（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，48%甲醇）得到化合物13（2.9 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色油狀物，ESI-MS/: 291 [M＋Na]+（計(jì)算值291，C13H16O6Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.68 (1H, m, H-7′), 7.08 (1H, m, H-2′), 7.04 (1H, m, H-6′), 6.93 (1H, m, H-5′), 6.36 (1H, m, H-8′), 4.37 (2H, m, H-1), 3.86 (1H, m, H-2), 3.85 (2H, m, H-3), 3.92 (3H, s, 3′-OMe)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 168.9 (C-9′), 146.3 (C-3′), 146.2 (C-7′), 146.1 (C-4′), 126.9 (C-1′), 123.6 (C-6′), 114.9 (C-5′), 114.6 (C-8′), 109.5 (C-2′), 72.6 (C-2), 65.6 (C-1), 62.4 (C-3), 56.1 (3′-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8]，故鑒定化合物1為1--阿魏酰單甘油酯。

化合物2：淡黃色油狀物，ESI-MS/: 145 [M＋Na]+（計(jì)算值145，C7H6O2Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.82 (1H, d,= 8.4 Hz, H-2), 6.96 (1H, d,= 8.4 Hz, H-3), 6.94 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5), 7.81 (1H, d,= 8.4 Hz, H-6), 9.88 (1H, s, 1-CHO), 5.67 (1H, s, 4-OH)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 130.3 (C-1), 132.5 (C-2), 116.1 (C-3), 161.2 (C-4), 116.1 (C-5), 132.5 (C-6), 190.9 (1-CHO)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]，故鑒定化合物2為4-羥基苯甲醛。

化合物3：淡黃色油狀物，ESI-MS/: 267 [M＋Na]+（計(jì)算值267，C14H16N2O2Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 4.29 (1H, m, H-2), 2.52, 2.50 (2H, m, H-3), 3.34, 2.33 (2H, m, H-4), 3.59, 3.57 (2H, m, H-5), 4.30 (1H, m, H-2′), 2.82, 2.80 (2H, m, H-3′), 7.35 (1H, m, H-5′), 7.34 (1H, m, H-6′), 7.30 (1H, m, H-7′), 7.29 (1H, m, H-8′), 7.23 (1H, m, H-9′)。13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 169.8 (C-1), 60.3 (C-2), 28.8 (C-3), 22.7 (C-4), 45.6 (C-5), 165.2 (C-1′), 56.4 (C-2′), 37.0 (C-3′), 136.0 (C-4′), 129.4 (C-5′), 129.3 (C-6′), 127.7 (C-7′), 129.4 (C-8′), 129.3 (C-9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]，故鑒定化合物3為環(huán)()-脯-()-苯丙。

化合物4：淡黃色油狀物，ESI-MS/: 191 [M＋Na]+（計(jì)算值191，C8H8O4Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.58 (1H, d,= 1.8 Hz, H-3), 6.98 (1H, d,=1.8 Hz, H-6), 7.72 (1H, dd,=1.8 Hz, 8.4 Hz, H-7), 7.43 (1H, s, COOH), 7.08 (1H, s, 5-OH), 3.49 (3H, s, 4-OMe)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 169.7 (C-1), 121.3 (C-2), 114.4 (C-3), 150.8 (C-4), 146.4 (C-5), 112.2 (C-6), 114.4 (C-7), 56.3 (4-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]，故鑒定化合物4為香草酸。

化合物5：淡黃色油狀物，ESI-MS/: 203 [M＋Na]+（計(jì)算值203，C10H12O3Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.31 (1H, m, H-4′), 7.29 (2H, m, H-3′, 5′), 7.21 (2H, m, H-2′, 6′), 4.48 (1H, dd,= 7.2, 5.4 Hz, H-2), 3.20 (1H, dd,= 4.2, 13.8 Hz, H-3α), 3.14 (1H, dd,= 4.2, 13.8 Hz, H-3β), 3.77 (3H, s, 1-OMe)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 174 (C-1), 136.6 (C-1′), 129.8 (C-3′), 129.6 (C-5′), 128.6 (C-4′), 127.1 (C-2′, 6′), 71.4 (C-2), 40.7 (C-3), 56.8 (1-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[12]，故鑒定化合物5為2-羥基-3-苯基丙酸甲酯。

化合物6：淡黃色油狀物，ESI-MS/: 365 [M＋Na]+（計(jì)算值365，C16H22O8Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 6.44 (1H, s, H-3), 6.44 (1H, s, H-5), 7.05 (1H, m, H-7), 5.14, 5.90 (2H, m, H-8), 5.93 (1H, m, H-9), 3.80 (1H, m, H-10), 3.49 (1H, m, H-11), 3.61 (1H, m, H-12), 3.91 (1H, m, H-13), 3.82 (2H, m, H-14), 2.04 (4H, s, 11～14-OH), 3.85 (3H, s, 2-OMe), 3.85 (3H, s, 6-OMe)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 137.8 (C-1), 152.7 (C-2), 106.7 (C-3), 120.1 (C-4), 106.7 (C-5), 152.7 (C-6), 136.9 (C-7), 116.7 (C-8), 105.7 (C-9), 76.8 (C-10), 70.4 (C-11), 74.4 (C-12), 74.4 (C-13), 62.6 (C-14), 56.4 (2-OMe), 56.4 (6-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[13]，故鑒定化合物6為燈盞花苷II。

化合物7：淡黃色油狀物，ESI-MS/: 185 [M＋Na]+（計(jì)算值185，C10H10O2Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.7 (1H, d,= 15.6 Hz, H-7), 7.57 (1H, dd,= 1.2, 2.4 Hz, H-4), 7.56 (1H, d,= 2.4 Hz, H-3, 5), 7.42 (2H, d,= 1.2 Hz, H-2, 6), 6.46 (1H, d,= 16.2 Hz, H-8), 3.81 (3H, s, H-10)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 167.6 (C-9), 145.1 (C-7), 134.5 (C-1), 130.4 (C-2, 6), 129.1 (C-4), 128.2 (C-3, 5), 117.9 (C-8), 51.9 (C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)描述一致[14]，故鑒定化合物7為反式肉桂酸甲酯。

化合物8：白色粉末，ESI-MS/: 452 [M＋Na]+（計(jì)算值452，C27H43NO3Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 1.47 (2H, m, H-1), 1.76 (2H, m, H-2), 3.46 (2H, s, H-3), 2.01 (2H, m, H-4), 2.38 (1H, m, H-5), 2.38 (2H, m, H-7), 1.74 (1H, m, H-8), 1.47 (1H, m, H-9), 1.55 (2H, m, H-11), 1.40 (1H, m, H-12), 1.61 (1H, m, H-13), 1.40 (1H, m, H-14), 1.53 (4H, m, H-15, 16), 1.48 (1H, m, H-17), 2.38 (4H, m, H-18, 26), 1.15 (3H, m, H-19), 1.47 (1H, m, H-20), 1.33 (3H, m, H-21), 2.38 (1H, m, H-22), 1.59 (4H, m, H-23, 24), 1.61 (1H, m, H-25), 1.09 (3H, m, H-27), 2.02 (1H, m, 3-OH), 2.01 (1H, m, 20-OH)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 30.6 (C-1), 30.4 (C-2), 70.6 (C-3), 30.4 (C-4), 56.7 (C-5), 211.1 (C-6), 46.6 (C-7), 39.1 (C-8), 56.5 (C-9), 38.3 (C-10), 30.6 (C-11), 40.3 (C-12), 39.1 (C-13), 46.6 (C-14), 26.9 (C-15), 19.6 (C-16), 49.0 (C-17), 59.8 (C-18), 22.4 (C-19), 72.1 (C-20), 22.4 (C-21), 70.8 (C-22), 19.8 (C-23), 37.6 (C-24), 27.8 (C-25), 61.4 (C-26), 17.3 (C-27)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]，故鑒定化合物8為西貝母堿。

化合物9：淡黃色油狀物，ESI-MS/: 245 [M＋Na]+（計(jì)算值245，C12H14O4Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.63 (1H, d,= 15.6 Hz, H-7), 7.08 (1H, dd,= 2.4, 8.4 Hz, H-6), 7.04 (1H, d,= 2.4 Hz, H-2), 6.93 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5), 6.30 (1H,= 15.6 Hz, H-8), 4.27 (2H, q,= 7.2 Hz, H-10), 3.93 (3H, s, 3-OMe), 1.35 (3H, t,= 7.2 Hz, 10-Me)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 167.5 (C-9), 148.0 (C-4), 147.8 (C-3), 144.9 (C-7), 127.6 (C-1), 123.2 (C-2), 115.8 (C-5), 114.8 (C-6), 109.4 (C-8), 60.6 (C-10), 56.1 (3-OMe), 14.6 (10-Me)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[16]，故鑒定化合物9為阿魏酸乙酯。

化合物10：白色粉末，ESI-MS/: 450 [M＋Na]+（計(jì)算值450，C27H41NO3Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 1.47 (2H, m, H-1), 1.73 (2H, m, H-2), 3.17 (1H, m, H-3), 1.74 (2H, m, H-4), 2.30 (2H, m, H-7), 1.75 (1H, m, H-8), 1.76 (1H, m, H-9), 1.16 (1H, m, H-10), 2.09 (2H, m, H-11), 1.73 (1H, m, H-13), 2.09 (1H, m, H-14), 1.74 (2H, m, H-15), 1.75 (2H, m, H-16), 1.63 (3H, m, H-18), 1.16 (3H, m, H-19), 2.28 (1H, m, H-20), 1.09 (3H, s, H-21), 2.81 (1H, t,= 7.2 Hz, H-22), 3.79 (1H, t,= 7.2 Hz, H-23), 1.72 (2H, m, H-24), 1.47 (1H, m, H-25), 2.64 (2H, m, H-26), 1.03 (3H, d,= 7.2 Hz, H-27)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 39.1 (C-1), 31.7 (C-2), 70.5 (C-3), 37.1 (C-4), 56.7 (C-5), 210.6 (C-6), 45.8 (C-7), 46.0 (C-8), 54.5 (C-9), 38.5 (C-10), 28.5 (C-11), 128.5 (C-12), 141.0 (C-13), 48.6 (C-14), 24.2 (C-15), 30.0 (C-16), 85.1 (C-17), 13.1 (C-18), 12.5 (C-19), 39.7 (C-20), 10.7 (C-21), 66.3 (C-22), 75.6 (C-23), 30.4 (C-24), 31.6 (C-25), 54.7 (C-26), 18.9 (C-27)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]，故鑒定化合物10為貝母辛。

化合物11：淡黃色油狀物，ESI-MS/: 177 [M＋Na]+（計(jì)算值177，C7H10N2O2Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 3.61 (2H, s, H-3), 2.09 (2H, m, H-4), 2.35 (2H, m, H-5), 4.68 (1H, m, H-6), 8.11 (1H, m, NH-8), 4.05 (2H, m, H-9)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 159.1 (C-1, C=O), 153.6 (C-2, C=O), 45.5 (C-3), 25.3 (C-4), 29.8 (C-5), 63.1 (C-6), 46.7 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[17]，故鑒定化合物11為環(huán)(脯氨酸-甘氨酸)。

化合物12：白色粉末，ESI-MS/: 614 [M＋Na]+（計(jì)算值614，C33H53NO8Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 1.47 (2H, m, H-1), 1.76 (2H, m, H-2), 2.53 (1H, m, H-3), 2.01 (2H, m, H-4), 2.38 (1H, m, H-5), 2.39 (2H, m, H-7), 1.74 (1H, m, H-8), 1.47 (1H, m, H-9), 1.55 (2H, m, H-11), 1.40 (2H, m, H-12), 1.61 (1H, m, H-13), 1.40 (1H, m, H-14), 1.53 (4H, m, H-15, 16), 1.48 (1H, m, H-17), 2.38 (4H, m, H-18, 26), 1.15 (3H, m, H-19), 1.47 (1H, m, H-20), 1.33 (3H, m, H-21), 2.38 (1H, m, H-22), 1.59 (4H, m, H-23, 24), 1.61 (1H, m, H-25), 1.09 (3H, m, H-27), 3.76 (1H, m, H-2′), 3.47 (1H, m, H-3′), 3.49 (1H, m, H-4′), 3.56 (1H, m, H-5′), 4.40 (1H, m, H-6′), 3.51 (2H, m, H-7′), 2.05 (4H, m, 3′,4′,5′,7′-OH)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 30.6 (C-1), 29.7 (C-2), 72.2 (C-3), 28.7 (C-4), 56.7 (C-5), 211.1 (C-6), 46.6 (C-7), 39.1 (C-8), 56.5 (C-9), 38.3 (C-10), 30.6 (C-11), 40.3 (C-12), 39.1 (C-13), 46.6 (C-14), 26.9 (C-15), 19.6 (C-16), 49.0 (C-17), 59.8 (C-18), 22.4 (C-19), 72.1 (C-20), 22.4 (C-21), 70.8 (C-22), 19.8 (C-23), 37.6 (C-24), 27.8 (C-25), 61.4 (C-26), 17.3 (C-27), 78.2 (C-2′), 69.7 (C-3′), 73.4 (C-4′), 75.7 (C-5′), 101.1 (C-6′), 61.7 (C-7′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]，故鑒定化合物12為西貝母堿苷。

化合物13：淡黃色油狀物，ESI-MS/: 255 [M＋Na]+（計(jì)算值255，C13H12O4Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.54 (1H, s, H-8)，6.94 (1H, s, H-1), 6.96 (1H, d,= 6.8 Hz, H-3), 6.80 (1H, d,= 6.8 Hz, H-4), 5.88 (1H, brs, -OH), 3.75 (6H, s, -OMe)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 165.8 (-COOH), 148.4 (C-6), 146.2 (C-7), 144.4 (C-1), 131.2 (C-10), 126.1 (C-9), 122.6 (C-8), 115.8 (C-4), 114.5 (C-3), 114.3 (C-2), 109.7 (C-5), 55.7 (-OMe), 51.2 (-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[18]，故鑒定化合物13為6,7-二甲氧基-2-萘乙酸。

4 抗腫瘤活性篩選

采用MTT比色法測(cè)定化合物1～13的體外抑制人宮頸癌HeLa細(xì)胞[19]、結(jié)腸癌Ht-29細(xì)胞以及人惡性黑色素瘤A375細(xì)胞的活性[20]。以化合物1～13為實(shí)驗(yàn)組，順鉑為陽(yáng)性對(duì)照組，同時(shí)設(shè)對(duì)照組。分別稱取2 mg待測(cè)樣品，用DMSO溶液充分溶解后，配制成為40 mg/mL的母液，過濾除菌后避光保存于?20 ℃冰箱中。實(shí)驗(yàn)前采用倍半稀釋法，用完全培養(yǎng)基將母液稀釋為實(shí)驗(yàn)濃度。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HeLa細(xì)胞、Ht-29細(xì)胞、A375細(xì)胞，并用0.25%胰蛋白酶消化成單細(xì)胞懸液后，細(xì)胞計(jì)數(shù)，以6×104/mL的密度接種于96孔板中，并在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后給藥。對(duì)照組給予等體積的PBS。實(shí)驗(yàn)組中分別加入培養(yǎng)基配制的不同質(zhì)量濃度（0、200、400、600、800 μg/mL）待測(cè)樣品；在陽(yáng)性對(duì)照組中加入不同濃度的順鉑，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，在避光條件下，加入5 mg/mL的MTT溶液（10 μL/孔），在培養(yǎng)箱中再培養(yǎng)4 h，棄上清后加入DMSO溶液100 μL/孔。放置于搖床上震蕩5～10 min，使結(jié)晶充分溶解后，并于酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀570 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度（），根據(jù)值計(jì)算半數(shù)抑制濃度（IC50），見表1。結(jié)果顯示化合物3和11對(duì)HeLa、A375細(xì)胞具有一定的體外抑制作用，化合物8對(duì)HeLa細(xì)胞的抑制作用較弱，但對(duì)A375細(xì)胞的抑制作用較強(qiáng)，化合物12對(duì)HeLa、Ht-29細(xì)胞的抑制作用較弱，化合物10對(duì)HeLa、Ht-29和A375細(xì)胞的具有一定抑制作用。

5 討論

多項(xiàng)研究表明伊犁貝母具有抗腫瘤活性，Shen等[21]運(yùn)用色譜技術(shù)結(jié)合波譜技術(shù)從伊犁貝母中分離鑒定出了對(duì)HeLa細(xì)胞具有良好抑制作用的活性成分，其IC50值為5.1～75.8 μmol/L。本實(shí)驗(yàn)從伊犁貝母中分離鑒定出了13個(gè)化合物，根據(jù)已有對(duì)貝母屬中抗腫瘤活性物質(zhì)的研究，對(duì)13個(gè)化合物進(jìn)行了體外抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，化合物10對(duì)HeLa細(xì)胞、Ht-29細(xì)胞以及A375細(xì)胞均具有良好的抑制活性，說明伊犁貝母的抗腫瘤活性具有巨大的開發(fā)潛力[22]，對(duì)進(jìn)一步研究抗腫瘤新藥提供了一定的幫助。

表1 化合物3、8、10～12分別對(duì)HeLa、Ht-29、A375細(xì)胞的抑制作用

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Chemical constituents fromand their antitumor activities

JIN Yue-xian1, 2, WEI Hong-yan2, Ma Xiao-ling2, CHEN Gang2, SHI Lei-ling2, ZHANG Jing1

1. College of Chinese Medicinal Materials, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China 2. Xinjiang Institute of Chinese and Ethnic Medicine, Urumqi 830002, China

To study the chemical constituents fromand their antitumor activities.Separation and purification of 95% ethanol extract ofwere carried out by using silica gel column, gel column and pre-HPLC and other chromatographic techniques, using NMR, MS, and other spectral techniques combined with physical and chemical properties were used for structural identification;tumor cell inhibitory activities of constituents to cervical cancer cells (HeLa), colon cancer cells (Ht-29) and human malignant melanoma cells (A375) were evaluated.Thirteen chemical constituents, including 1--feruloylglycerol (1), 4-hydroxybenzaldehyde (2), cyclo()-pro-()-phe (3), vanillic acid (4), 2-hydroxy-3-phenylpropanoic acid methyl ester (5), erigeside II (6), methyl cinnamate (7), imperialine (8), ethyl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acrylate (9), peimisine (10), cyclo(pro-gly) (11), sipeimine-3β--glucoside (12), and 6,7-dimethoxynaphthalene-2-carboxylic acid (13) were isolated from.Compounds 1—7, 9, 11, and 13 are isolated fromfor the first time. And compounds 3, 8, 10—12 exhibit inhibitory activity against the tested cell lines. The IC50of compound 10 to the tested cell lines were 22.07, 52.47, and 48.27 μmoL/L, respectively.

Schrenk; alkaloids; antitumor activity; erigeside II; imperialine; peimisine; sipeimine-3β--glucoside

R284.1

A

0253 - 2670(2021)06 - 1562 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.06.003

2020-07-12

2018年中醫(yī)藥公共衛(wèi)生服務(wù)補(bǔ)助專項(xiàng)“全國(guó)中藥資源普查項(xiàng)目”（財(cái)社［2018］43號(hào)）；國(guó)家中醫(yī)藥管理局全國(guó)中藥資源普查項(xiàng)目（GZY-KJS-2018-004）

金悅仙，碩士研究生，從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究。E-mail: jyx0107@126.com

石磊嶺，副研究員，從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究。E-mail: shileiling@sina.com

張 晶，博士生導(dǎo)師，教授，從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究。E-mail: zhjing0701@163.com

[責(zé)任編輯 王文倩]