乙肝病毒相關(guān)肝細(xì)胞肝癌中性激素受體的表達(dá)及其意義

李媛，郭琳，張松，侯紹章

1.寧夏醫(yī)科大學(xué)護(hù)理學(xué)院，寧夏銀川 750004；2.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，寧夏銀川 750004；3.寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，寧夏銀川 750004

肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是一種最多發(fā)的肝原發(fā)性腫瘤，致死性腫瘤中排名第二位[1]。乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）的感染存在于超過80%的HCC患者中[2]，有研究表明相比于女性，男性更容易感染HBV，這說明早在HCC癌前病變階段男女之間的差異就已經(jīng)存在[3]。有研究認(rèn)為雌二醇可通過激活雌激素受體（estrogen receptor，ER）在抑制肝癌細(xì)胞增殖和介導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡方面起到重大影響，并對(duì)HBV相關(guān)的肝癌進(jìn)展起到保護(hù)作用[4]。近些年研究發(fā)現(xiàn)雄激素受體（androgen receptor，AR）尤其是在胞核內(nèi)表達(dá)的激活A(yù)R在HCC癌細(xì)胞及癌旁肝細(xì)胞中的表達(dá)與病理組織學(xué)分級(jí)[5]以及預(yù)后[6]有關(guān)。HBV感染是HCC發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素，且機(jī)體對(duì)于病毒感染的應(yīng)對(duì)也存在性別差異[7]。該研究回顧性選取2016年6月—2020年12月240例HBV相關(guān)HCC病例進(jìn)行研究，旨在探討性激素受體（AR、ER）在HBV相關(guān)HCC癌及癌旁組織的表達(dá)情況，以期在HBV相關(guān)HCC患者的診斷、治療、預(yù)后等方面提供新的思路。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對(duì)象來源于回顧性選取寧夏某醫(yī)院病理科確診為HCC患者的相關(guān)臨床（包括年齡、性別等）及病理資料（包括癌細(xì)胞分化程度、mVI分級(jí)、癌旁組織有無肝硬化、有無衛(wèi)星灶等），經(jīng)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)篩查后共計(jì)HBV相關(guān)HCC患者240例，從上述240例HBV相關(guān)HCC病例中進(jìn)行簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣（分別從女性52例和男性188例中進(jìn)行簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣），抽出HBV相關(guān)HCC患者54例（女25例，男29例，平均年齡55歲）的組織蠟塊行免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）檢測(cè)。

1.2 方法

使用IHC檢測(cè)AR、ER在54例HBV相關(guān)HCC癌及癌旁組織標(biāo)本中的表達(dá)情況。將組織經(jīng)常規(guī)處理、切片后，按照說明書操作進(jìn)行免疫組化染色。

1.3 觀察指標(biāo)

運(yùn)用半定量計(jì)數(shù)評(píng)估癌細(xì)胞及癌旁肝細(xì)胞中AR、ER的IHC染色，陽性結(jié)果以腫瘤細(xì)胞和（或）癌旁肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃/黃褐色顆粒為標(biāo)記。每張切片任意觀察5個(gè)高倍鏡（×400倍）視野，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞/視野后取平均，細(xì)胞無染色或陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為（－），≥5%為（＋）。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用[n(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AR在HBV相關(guān)HCC癌細(xì)胞及癌旁肝細(xì)胞中的表達(dá)情況

AR陽性定位于細(xì)胞的胞漿和（或）胞核，陽性呈棕黃/黃褐色（圖1、圖2）。在54例癌組織及癌旁組織中，AR陽性表達(dá)率分別為癌細(xì)胞核陽40.7%（22/54）、漿陽3.7%（2/54）、核漿雙陽0.0%（0/54），癌旁肝細(xì)胞核陽1.9%（1/54）、漿陽9.3%（5/54）、核漿雙陽85.2%（46/54），且AR在癌細(xì)胞與癌旁肝細(xì)胞間的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），見表1。

表1 AR在HBV相關(guān)HCC癌及癌旁肝細(xì)胞中的表達(dá)情況[n(%)]

圖1 HBV相關(guān)HCC癌細(xì)胞中AR的表達(dá)（×400倍）

圖2 HCC癌旁肝組織中AR的表達(dá)（×400倍）

2.2 ER在HBV相關(guān)HCC癌細(xì)胞及癌旁肝細(xì)胞中的表達(dá)情況

ER陽性定位于細(xì)胞的胞核，陽性呈棕黃色（圖3）。在54例HBV相關(guān)HCC癌及癌旁組織中，ER在癌細(xì)胞中表達(dá)率為0.0%（0/54），在癌旁肝細(xì)胞中則為75.9%（41/54），癌及癌旁組織間的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），見表2。

圖3 HBV相關(guān)HCC癌及癌旁肝組織中ER的表達(dá)（×400倍）

表2 HBV相關(guān)HCC癌及癌旁組織中ER的表達(dá)情況[n(%)]

3 討論

HCC是最多發(fā)的肝細(xì)胞源性惡性腫瘤，而HBV感染、男性在HCC發(fā)展中屬于重要因素[2，7]。目前有關(guān)AR及ER在HCC發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制未像其他激素依賴性腫瘤一樣完全明確，尤其是其在HBV相關(guān)HCC中的表達(dá)及意義仍需深入學(xué)習(xí)和探討。

AR是一種被睪酮或二氫睪酮激活后連接到DNA特殊區(qū)域上進(jìn)而調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，有研究表明AR在HCC發(fā)生發(fā)展中起到的重要作用是通過AR的激活實(shí)現(xiàn)的而非僅僅是AR受體的存在[8]，相關(guān)研究結(jié)果表明67.7%肝癌細(xì)胞表達(dá)AR，癌細(xì)胞中AR陽性率要高于癌旁肝細(xì)胞且其表達(dá)在癌細(xì)胞、癌旁肝細(xì)胞、正常肝組織中依次減少[9-10]。進(jìn)一步挖掘AR在其中參與的通路及涉及的效應(yīng)能有助于更好地了解AR在HCC中所扮演的具體角色，進(jìn)而為HCC患者的靶向激素治療提供理論依據(jù)。在該研究中發(fā)現(xiàn)，AR在HBV相關(guān)HCC患者癌細(xì)胞中以核陽模式為主（40.7%），而在癌旁肝細(xì)胞中則以核漿雙陽模式為主（85.2%）。如上述，定位在胞漿中的多為未活化的AR，定位在胞核的則多為活化后的AR[11]，這支持了AR在HCC發(fā)生、發(fā)展中的影響不僅僅是與癌細(xì)胞中受體的存在有關(guān)，而AR主要通過雄激素（睪酮）激活，這在某種程度上解釋了HCC患者中男性發(fā)病率高的原因。

ER是雌二醇所有受體的總稱，主要包括了ER-α，ER-β和GPER。如生理劑量的雌激素通過ER-α，經(jīng)由抑制Toll樣受體適配蛋白MyD88調(diào)節(jié)的NF-κB活化來抑制IL-6的促腫瘤生長(zhǎng)能力并下調(diào)腫瘤生長(zhǎng)因子和在腫瘤微環(huán)境中的IL-6表現(xiàn)出抑制HCC癌轉(zhuǎn)移[12]。除此之外，出于免疫系統(tǒng)表現(xiàn)出的性二態(tài)性，相較于男性，女性能夠更好地應(yīng)對(duì)HBV感染[13]，而且女性HBV攜帶者的病毒載量低于男性攜帶者[14]，較男性更容易產(chǎn)生HBV相關(guān)抗體，如HBeAb和HBsAb[14-15]。這提示雌激素及其受體在HBV感染及HCC發(fā)生、發(fā)展中的作用是復(fù)雜而未完全明確的，需要更進(jìn)一步地研究。

在該研究中，與AR的表達(dá)模式不同，ER的表達(dá)僅定位于細(xì)胞核，且未發(fā)現(xiàn)ER在癌細(xì)胞中表達(dá)的病例，而在癌旁肝細(xì)胞中則有75.9%（41/54）的陽性率。

綜上所述，AR在HBV相關(guān)HCC癌細(xì)胞中主要表達(dá)于細(xì)胞核，在癌旁肝細(xì)胞中主要在細(xì)胞核、漿中表達(dá)，相比于作為明確HCC診斷的IHC標(biāo)志物，AR更適合作為HBV相關(guān)HCC患者的一項(xiàng)預(yù)后指標(biāo)，或可預(yù)測(cè)HBV相關(guān)HCC患者預(yù)后提供一定理論依據(jù)。ER主要在癌旁肝細(xì)胞細(xì)胞核中表達(dá)，ER或可成為鑒別高分化癌細(xì)胞與癌旁增生的標(biāo)記物。