細(xì)胞DNA倍體聯(lián)合Hsp90α、LDH診斷良惡性胸腔積液、腹水的臨床價(jià)值*

張 姚，楊麗瓊，葉 敏，吉彩霞

德陽市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川德陽 618000

正常情況下，胸/腹腔內(nèi)存在少量液體(胸腔內(nèi)液體<15 mL，腹腔內(nèi)液體<200 mL)對人體具有積極作用，當(dāng)胸/腹腔內(nèi)液體超過該限度時(shí)則提示機(jī)體可能處于病理狀態(tài)[1]。病理狀態(tài)的胸腔積液、腹水可由惡性腫瘤、心血管疾病、肝硬化等良性或惡性疾病引起，及時(shí)鑒別其良惡性并有效干預(yù)十分重要[2]。脫落細(xì)胞學(xué)檢查是目前診斷良惡性胸腔積液、腹水的金標(biāo)準(zhǔn)，但靈敏度低，假陽性率高，操作過程繁瑣，通常需要多次采集胸腔積液、腹水來確診[3]。DNA倍體分析是近十年來惡性腫瘤早期診斷的重要方法之一，但該方法在國內(nèi)的應(yīng)用尚未十分成熟，因此臨床將良惡性胸腔積液、腹水診斷重點(diǎn)放在了DNA倍體分析與多項(xiàng)腫瘤分子生物標(biāo)志物的聯(lián)合檢測上[4]。熱休克蛋白90α(Hsp90α)是一種與腫瘤相伴的蛋白，能夠促進(jìn)腫瘤增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移[5]。乳酸脫氫酶(LDH)是一種糖酵解酶，存在于機(jī)體所有組織細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，可在組織細(xì)胞受損時(shí)釋放入血，引起外周血中LDH水平上升[6]。已有研究顯示，Hsp90α、LDH對良惡性胸腔積液、腹水具有一定診斷價(jià)值[7-8]。為此，本研究分析了細(xì)胞DNA倍體聯(lián)合Hsp90α、LDH診斷良惡性胸腔積液、腹水的臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，選擇2019年2月至2020年2月本院收治的137例胸腔積液患者為研究對象，根據(jù)胸腔積液性質(zhì)分為胸腔積液良性組(n=53)與胸腔積液惡性組(n=84)。胸腔積液良性組：男32例、女21例；年齡18～78歲，平均(63.85±5.07)歲；病因：結(jié)核性胸膜炎16例，肝硬化5例，心力衰竭17例，肺炎相關(guān)低蛋白血癥15例。胸腔積液惡性組：男50例、女34例；年齡20～80歲，平均(62.68±5.42)歲；病因：肺癌48例，肝癌8例，胃癌5例，乳腺癌10例，卵巢癌7例，胸膜間皮瘤6例。兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。另選取本院同期收治的122例腹水患者，根據(jù)腹水性質(zhì)分為腹水良性組(n=50)與腹水惡性組(n=72)。腹水良性組：男30例、女20例；年齡22～75歲，平均(65.11±4.98)歲；病因：結(jié)核性胸膜炎5例，肝硬化37例，心力衰竭8例。腹水惡性組：男42例、女30例；年齡20～80歲，平均(65.96±5.13)歲；病因：肝癌20例，胃癌14例，膽囊癌9例，卵巢癌13例，胰腺癌8例，結(jié)腸癌6例，腎癌1例，胸膜間皮瘤1例。兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)胸腔積液和腹水性質(zhì)均經(jīng)脫落細(xì)胞學(xué)檢查證實(shí)；(2)入院前未接受任何治療；(3)無感染性疾病、凝血系統(tǒng)疾病、傳染性疾?。?4)病歷資料完整；(5)患者及家屬知情同意本研究而且自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并精神系統(tǒng)疾??；(2)妊娠期或哺乳期女性；(3)依從性差，不能配合完成本研究；(4)合并代謝性疾??；(5)合并自身免疫性疾病。

1.2研究方法 (1)胸腔積液、腹水LDH、Hsp90α水平檢測：對各組患者行胸腔/腹腔穿刺術(shù)，采集胸腔積液、腹水各10 mL，采用HC-2518R高速冷凍離心機(jī)(安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司)，3 800 r/min離心10 min，分離上清液，采用乳酸底物法檢測胸腔積液、腹水LDH水平，儀器為西門子ADVIA2400全自動生化分析儀，試劑為乳酸脫氫酶測定試劑盒(邁克生物股份有限公司)；采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測胸腔積液、腹水Hsp90α水平，儀器為Bayer1650酶標(biāo)儀(深圳海思安生物技術(shù)有限公司)，試劑為Hsp90α水檢測試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)。

(2)胸腔積液、腹水DNA倍體分析：采集胸腔積液、腹水各10 mL，制成單細(xì)胞懸液，用1-氨基碘化吡啶(廈門研科生物技術(shù)有限公司)染色，使用FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀(美國Beckman-Counter公司)進(jìn)行DNA定量分析，將不容易分辨的群體細(xì)胞分類為G1期、S期、G2期，在FACSDiva軟件上獲取DNA數(shù)據(jù)，再在FlowJo軟件上分析細(xì)胞周期及細(xì)胞DNA倍體，細(xì)胞DNA倍體采用DNA指數(shù)(DI)表示，二倍體DI=1.0±0.1(陰性)，異倍體DI<0.9或>1.1(陽性)。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者胸腔積液中LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率比較 與胸腔積液良性組比較，胸腔積液惡性組患者胸腔積液中LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率呈現(xiàn)上升趨勢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者胸腔積液中LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率比較

2.2胸腔積液LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率與惡性胸腔積液的相關(guān)性 胸腔積液LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率與惡性胸腔積液均呈正相關(guān)(r=0.753、0.844、0.573，P<0.05)。

2.3胸腔積液LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率對良惡性胸腔積液的鑒別診斷價(jià)值 胸腔積液Hsp90α對良惡性胸腔積液的鑒別診斷價(jià)值明顯優(yōu)于胸腔積液LDH(P<0.05)；胸腔積液DNA倍體陽性率對良惡性胸腔積液的鑒別診斷價(jià)值明顯優(yōu)于胸腔積液Hsp90α(P<0.05)；胸腔積液LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率聯(lián)合檢測對良惡性胸腔積液的鑒別診斷價(jià)值明顯優(yōu)于各項(xiàng)單獨(dú)檢測(P<0.05)，見表2、圖1。

表2 胸腔積液LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率對良惡性胸腔積液的鑒別診斷價(jià)值

圖1 胸腔積液LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率鑒別診斷良惡性胸腔積液的ROC曲線

2.4腹水良性組與腹水惡性組患者腹水中LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率比較 與腹水良性組比較，腹水惡性組患者腹水中LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率呈上升趨勢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

2.5腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率與惡性腹水的相關(guān)性 腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率與惡性腹水均呈正相關(guān)(r=0.807、0.832、0.456，P<0.05)。

2.6腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率對良惡性腹水的鑒別診斷價(jià)值 腹水Hsp90α對良惡性腹水的鑒別診斷價(jià)值明顯優(yōu)于腹水LDH(P<0.05)；腹水DNA倍體陽性率對良惡性腹水的鑒別診斷價(jià)值明顯優(yōu)于腹水Hsp90α(P<0.05)；腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率聯(lián)合檢測對良惡性腹水的鑒別診斷價(jià)值明顯優(yōu)于各項(xiàng)單獨(dú)檢測(P<0.05)，見表4、圖2。

表3 腹水良性組與腹水惡性組患者腹水中LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率比較

表4 腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率對良惡性腹水的鑒別診斷價(jià)值

圖2 腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率鑒別診斷良惡性腹水的ROC曲線

3 討 論

胸腔積液、腹水分為良性和惡性，其性質(zhì)不同給機(jī)體帶來的影響也不同，治療方法亦有很大區(qū)別，惡性胸腔積液、腹水是惡性腫瘤常見并發(fā)癥之一，如肺癌、卵巢癌、惡性腹膜腫瘤、結(jié)直腸癌、胰腺癌、胃癌等，對人類健康及生活造成嚴(yán)重影響，因此準(zhǔn)確鑒別良惡性胸腔積液、腹水具有重要臨床指導(dǎo)意義。

診斷惡性胸腔積液、腹水的金標(biāo)準(zhǔn)是胸腔積液、腹水脫落細(xì)胞學(xué)檢查，但其診斷陽性率差異大，通常為 50%～72%，其通常取決于腫瘤負(fù)荷、病理診斷醫(yī)師經(jīng)驗(yàn)、腫瘤類型，推廣性不強(qiáng)。腫瘤細(xì)胞內(nèi)DNA變化是細(xì)胞癌變重要的特征之一，癌細(xì)胞DNA變化能夠反映癌細(xì)胞增殖能力，癌細(xì)胞內(nèi)DNA含量可隨癌細(xì)胞增殖能力的增強(qiáng)而增加。DNA倍體分析是一種DNA定量分析技術(shù)，主要通過檢測細(xì)胞內(nèi)DNA含量變化判定細(xì)胞是否發(fā)生癌變[9]。正常情況下，人體內(nèi)大部分細(xì)胞為二倍體，當(dāng)這些細(xì)胞受到各種因素刺激后大量增殖，呈現(xiàn)異倍體形態(tài)。有研究顯示[10]，細(xì)胞DI值與異倍體細(xì)胞數(shù)量及細(xì)胞惡變程度具有顯著相關(guān)性。本研究將DNA倍體分析應(yīng)用于良惡性胸腔積液、腹水鑒別診斷中，發(fā)現(xiàn)胸腔積液、腹水惡性組DNA倍體陽性率明顯高于胸腔積液、腹水良性組，提示DNA倍體分析對良惡性胸腔積液、腹水鑒別診斷有一定價(jià)值。Hsp90α是一種廣泛表達(dá)于真核細(xì)胞中的分子伴侶蛋白，在生物進(jìn)化中高度保守，具有維持蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)、參與細(xì)胞加工(如細(xì)胞活化、凋亡、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等)、促進(jìn)組織修復(fù)、誘導(dǎo)血管生成等作用。Hsp90α也是一種與腫瘤相伴的蛋白，能夠促進(jìn)腫瘤增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移。有研究報(bào)道[11]，乳腺癌細(xì)胞分泌Hsp90α具有促進(jìn)乳腺癌腫瘤生長的作用，血漿Hsp90α水平檢測可用于評估肝細(xì)胞肝癌患者介入治療后的療效[11-12]。有研究發(fā)現(xiàn)[13]，肺癌患者癌組織中Hsp90α表達(dá)水平與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，Hsp90α可用于肺癌患者病情監(jiān)測。本研究顯示Hsp90α在惡性胸腔積液、腹水中高表達(dá)，提示Hsp90α可能與惡性胸腔積液、腹水有關(guān)。LDH是一種糖酵解酶，存在于機(jī)體所有組織細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，在腎臟中含量最高，LDH可在組織細(xì)胞受損時(shí)釋放入血，引起外周血中LDH水平上升[14]。有研究報(bào)道，造血系統(tǒng)惡性腫瘤(如多發(fā)性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤)患者血清LDH水平升高，LDH已被證實(shí)是預(yù)測侵襲性淋巴瘤患者生存期的強(qiáng)有力因子[15]。本研究顯示，胸腔積液、腹水惡性組患者胸腔積液、腹水中LDH水平較胸腔積液、腹水良性組呈上升趨勢，分析其原因可能是肺癌、卵巢癌、惡性腹膜腫瘤、結(jié)直腸癌等腫瘤生長造成正常組織破壞，從而導(dǎo)致胸腔積液、腹水中LDH水平升高。ROC曲線分析得出，胸腔積液、腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率聯(lián)合檢測對良惡性胸腔積液、腹水的鑒別診斷價(jià)值明顯優(yōu)于各項(xiàng)單獨(dú)檢測，胸腔積液、腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率聯(lián)合檢測對良惡性胸腔積液、腹水鑒別診斷價(jià)值較高，有望成為鑒別良惡性胸腔積液、腹水的有效方法。

綜上所述，胸腔積液、腹水LDH、Hsp90α水平及DNA倍體陽性率聯(lián)合檢測對良惡性胸腔積液、腹水鑒別診斷價(jià)值較高，具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。但本研究研究時(shí)間較短，納入病例不多，故仍需深入研究。