血清AFP、AFP-L3、HSP90α表達(dá)水平在肝細(xì)胞癌診斷中的價(jià)值

段 云，楊穎卓，楊 雯，王 喬，徐蓉生

四川省腫瘤醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，四川成都 610041

肝細(xì)胞癌(HCC)在全球癌癥病死率中排第4位，占所有癌癥死亡人數(shù)的8.2%，在國(guó)內(nèi)其主要風(fēng)險(xiǎn)因素是乙型肝炎病毒(HBV)[1-3]。HCC篩選是基于血清甲胎蛋白(AFP)及成像技術(shù)和組織學(xué),在臨床實(shí)踐中許多醫(yī)生使用AFP來(lái)診斷肝癌,但是多達(dá)40%的HCC患者中AFP水平是正常的，尤其是在疾病的早期階段，這表明其靈敏度較低[4]。甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)能區(qū)分由于HCC或良性肝病引起的AFP升高，AFP-L3更特異性地診斷HCC[5-6]。熱休克蛋白90(HSP90)是進(jìn)化上高度保守的細(xì)胞內(nèi)分子伴侶，通常在細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)中被誘導(dǎo)。HSP90家族由4個(gè)主要成員HSP90α、HSP90β、Grp94和TRAP1組成。HSP90α和HSP90β主要位于細(xì)胞質(zhì)中，其他兩種蛋白質(zhì)分別主要位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體基質(zhì)中。由于HSP90α在調(diào)節(jié)信號(hào)傳導(dǎo)，特別是在腫瘤細(xì)胞中的關(guān)鍵作用，已成為研究熱點(diǎn)[7]。許多研究探討腫瘤標(biāo)志物AFP、AFP-L3在診斷HCC中的價(jià)值，但HCC與肝硬化(LC)患者的腫瘤標(biāo)志物之間比較卻較少報(bào)道[7-9]。本文通過(guò)對(duì)HCC患者與LC患者的腫瘤標(biāo)志物AFP、AFP-L3、HSP90α及其聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度，特異度等進(jìn)行檢測(cè)，并探討上述3個(gè)腫瘤標(biāo)志物在HCC診斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月至2019年10月在本院住院治療的HCC患者191例(觀察組)作為研究對(duì)象，其中男158例、女33例，年齡27～84歲，平均 (54.82±12.27)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均經(jīng)病理證實(shí)HCC；(2)無(wú)其他重要功能障礙。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)不符合納入標(biāo)準(zhǔn)；(2)轉(zhuǎn)移性肝癌；(3)合并有其他惡性腫瘤；(4)處于妊娠期或哺乳期的女性。另選取同期的28例LC患者作為對(duì)照組，根據(jù)組織學(xué)檢查或門脈高壓檢測(cè)結(jié)果診斷LC，對(duì)照組患者接受了影像學(xué)檢查(MRI、B超和CT)已排除HCC。所有患者均檢查了其臨床癥狀及血清腫瘤標(biāo)志物水平。另外，在診斷時(shí)沒(méi)有患者接受任何抗腫瘤治療或手術(shù)切除治療。臨床特征是從電子記錄中獲得的。根據(jù)巴塞羅那臨床肝癌(BCLC)分期對(duì)患者進(jìn)行分類，分為BCLC-A期(早期,包含最早期0期)、BCLC-B期(中期)、BCLC-C期(晚期)、BCLC-D期(終末期)[8]。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法 所有受檢者清晨空腹抽取靜脈血3 mL，分離血清，采用羅氏診斷醫(yī)療設(shè)備(上海)有限公司cobas e 411全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫儀測(cè)定AFP、AFP-L3水平，如果樣品的AFP、AFP-L3>1 210 ng/mL，則根據(jù)制造商的說(shuō)明根據(jù)先前的結(jié)果手動(dòng)稀釋原始樣品。采用煙臺(tái)普羅吉生物科技發(fā)展有限公司酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定HSP90α水平。所用檢測(cè)試劑均為相應(yīng)配套試劑，嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。各指標(biāo)的正常參考范圍：AFP 0～7 ng/mL、AFP-L3<1 ng/mL為陰性，AFP-L3≥1 000 ng/mL為陽(yáng)性，其余由AFP-L3/AFP比值判定，HSP90α<82.06 ng/mL。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者臨床病理特征和腫瘤標(biāo)志物水平比較 兩組病因?qū)W中HBV、酒精、原因不明、丙型肝炎病毒(HCV)占比比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBIL)水平高于觀察組，對(duì)照組清蛋白(ALB)水平低于觀察組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩組腫瘤標(biāo)志物AFP、AFP-L3、HSP90α水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2腫瘤標(biāo)志物AFP、AFP-L3和HSP90α的診斷HCC價(jià)值比較 3種腫瘤標(biāo)志物的ROC曲線分析結(jié)果顯示，AFP+AFP-L3+HSP90α聯(lián)合檢測(cè)診斷HCC的曲線下面積(AUC)最大，高于各項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)。見表2、圖1。在191例HCC患者中BCLC-A期96例(50.26%)，BCLC-B期52例(27.23%)，BCLC-C期34例(17.80%)，BCLC-D期9例(4.71%)。

圖1 腫瘤標(biāo)志物的AUC值比較

2.3各腫瘤標(biāo)志物對(duì)HCC患者BCLC分期的診斷能力比較 血清AFP-L3診斷HCC患者BCLC-A期的AUC最大，高于其他指標(biāo)。3個(gè)腫瘤標(biāo)志物在BCLC-A期中HSP90α靈敏度最高，AFP-L3特異度最高，見表3。ROC曲線分析評(píng)估AFP、AFP-L3、HSP90α在確定HCC 患者BCLC各分期與LC的診斷效率，AFP、AFP-L3、HSP90α診斷BCLC-D期的AUC大于BCLC-C期AUC；AFP、AFP-L3、HSP90α診斷BCLC-C期的AUC大于BCLC-B期AUC；AFP、AFP-L3、HSP90α診斷BCLC-B期的AUC大于BCLC-A期AUC，見圖2。

表1 各組患者臨床病理特征和腫瘤標(biāo)志物水平比較

續(xù)表1 各組患者臨床病理特征和腫瘤標(biāo)志物水平比較

表2 AFP、AFP-L3、HSP90α診斷HCC價(jià)值的ROC曲線分析

表3 AFP、AFP-L3、HSP90α診斷HCC患者BCLC-A分期的ROC曲線分析

注：A為BCLC-A期HCC與LC 的ROC曲線分析；B為BCLC-B期HCC與LC的ROC曲線分析；C為BCLC-C期HCC與LC的ROC曲線分析；D為BCLC-D期HCC與LC的ROC曲線分析。

3 討 論

慢性乙型肝炎被認(rèn)為是LC和HCC的主要原因[9-10]。GIANNINI等[11]研究了肝癌患者AFP升高的決定因素,這項(xiàng)研究表明，病毒性感染與肝癌患者的AFP升高獨(dú)立相關(guān)。本研究中，HCC患者與對(duì)照患者之間的感染可能是由HBV引起的。

以前研究證實(shí)了AFP、AFP-L3作為檢測(cè)HCC的腫瘤標(biāo)志物的價(jià)值，而且LC患者中AFP、AFP-L3的升高是發(fā)展為HCC的危險(xiǎn)因素[12-14]。HSP90α被廣泛識(shí)別為具有調(diào)節(jié)致癌蛋白的構(gòu)象、穩(wěn)定性和功能的作用，并且它參與細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期進(jìn)程、遷移和侵襲，在HCC細(xì)胞、血清和組織中的高表達(dá)，與肝癌轉(zhuǎn)移行為之間有一定的相關(guān)性[15]。

本研究中發(fā)現(xiàn)AFP-L3是區(qū)分HCC和LC的最佳腫瘤標(biāo)志物，與單獨(dú)檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物相比，AFP+AFP-L3+HSP90α聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值明顯更高，可提高LC患者HCC的診斷準(zhǔn)確性，與其他研究報(bào)道結(jié)果一致[16]。因此，推測(cè)血清AFP+AFP-L3+HSP90α聯(lián)合檢測(cè)有助于區(qū)分診斷HCC和LC。本研究中聯(lián)合檢測(cè)診斷性能不高可能是與LC患者比較，且部分LC患者的AFP、HSP90α水平升高有關(guān)。

本研究中，研究者重點(diǎn)比較3個(gè)腫瘤標(biāo)志物對(duì)LC和BCLC-A期HCC的診斷能力，3個(gè)腫瘤標(biāo)志物在BCLC-A期中HSP90α靈敏度最高，AFP-L3特異度最高，與先前的研究結(jié)果一致[5-6]，AFP-L3水平能區(qū)分肝臟良性病變與HCC的BCLC-A期病變。此外，本研究分析了血清AFP、AFP-L3和HSP90α水平與BCLC分期比較，隨著其BCLC分期發(fā)展，AUC值越來(lái)越大，診斷能力越來(lái)越明顯。

近年來(lái)診斷HCC的腫瘤標(biāo)志物較多，除了常見AFP、AFP-L3外，還有異常凝血酶原、骨橋蛋白等對(duì)其診斷有幫助[17]。文獻(xiàn)[17]還建議在良性結(jié)節(jié)對(duì)HCC的鑒別診斷中，AFP-L3比單獨(dú)使用AFP更有用，同時(shí)對(duì)于LC患者，建議采用動(dòng)態(tài)CT或動(dòng)態(tài)MRI進(jìn)行檢測(cè)。本研究有一些不足：它為回顧性設(shè)計(jì)，數(shù)據(jù)在單個(gè)中心獲得，研究人群小，入組患者病因?qū)W占比不同。

AFP、AFP-L3和HSP90α 腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)可提高HCC診斷性能，在BCLC-A期AFP-L3是區(qū)分HCC和LC病變較好的指標(biāo)，隨著其BCLC分期的發(fā)展，腫瘤標(biāo)志物AFP、AFP-L3和HSP90α的診斷能力越明顯。