基于COⅠ基因片段的中國(guó)南部沿海近親擬相手蟹的群體遺傳多樣性研究

楊明柳，徐巖,，高霆煒，潘紅平，吳斌，閻冰*

(1.廣西科學(xué)院 廣西紅樹(shù)林研究中心 廣西紅樹(shù)林保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 北海 536007；2.廣西大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530005)

1 引言

近親擬相手蟹（Parasesarma affine）隸屬于方蟹總科（Grapsoidea），相手蟹科（Sesarmidae），擬相手蟹屬（Parasesarma），廣泛分布于東海、南海、印度?西太平洋[1]，棲息于紅樹(shù)林濕地中，以紅樹(shù)植物凋落物、沉積物、藻類(lèi)等為食，是一種活動(dòng)能力和適應(yīng)能力均很強(qiáng)的常見(jiàn)種與優(yōu)勢(shì)種[2-3]。近親擬相手蟹是紅樹(shù)林蟹類(lèi)中重要種類(lèi)之一，在紅樹(shù)林生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能中扮演著非常重要的角色[4]。目前，國(guó)內(nèi)外有關(guān)于近親擬相手蟹的研究已涉及生物學(xué)、攝食行為、形態(tài)分類(lèi)、線粒體DNA 全基因組等方面[5-8]，但未見(jiàn)其群體遺傳相關(guān)的研究報(bào)道。近年來(lái)，我國(guó)紅樹(shù)林遭到了不同程度的破壞，天然紅樹(shù)林植被的退化和生境的破碎化對(duì)紅樹(shù)林蟹類(lèi)群落造成了一定影響，環(huán)境污染、圍塘養(yǎng)殖、港口建設(shè)等人為活動(dòng)也使得蟹類(lèi)資源面臨著巨大威脅[2,9-10]。因此，開(kāi)展近親擬相手蟹群體遺傳的研究，對(duì)全面了解近親擬相手蟹群體遺傳多樣性現(xiàn)狀及加強(qiáng)紅樹(shù)林蟹類(lèi)資源保護(hù)工作具有重要意義。

線粒體DNA 具有分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、母系遺傳、進(jìn)化速度快、核苷酸替代速率高等特征，是研究動(dòng)物分子系統(tǒng)發(fā)育和群體遺傳的重要遺傳標(biāo)記[11]。細(xì)胞色素氧化酶Ⅰ（COⅠ）基因是線粒體DNA 中最常用的標(biāo)記之一，可用于揭示種群之間遺傳結(jié)構(gòu)，目前已被廣泛地應(yīng)用于蟹類(lèi)的群體遺傳研究中[12?15]。本研究采用線粒體COⅠ基因?qū)ξ覈?guó)南部沿海12 個(gè)近親擬相手蟹群體進(jìn)行群體遺傳學(xué)研究，分析近親擬相手蟹群體的遺傳結(jié)構(gòu)和歷史動(dòng)態(tài)，以期為紅樹(shù)林蟹類(lèi)的資源保護(hù)與利用提供基礎(chǔ)資料。

2 材料與方法

2.1 樣品采集

本研究所用的近親擬相手蟹于2012 年7 月至2013 年6 月采集于福建龍海、福建云霄、廣東珠海、廣東陽(yáng)江、廣東雷州、廣東徐聞、廣西合浦山口、廣西北海、廣西防城港、海南洋浦、海南東方等12 個(gè)采樣地，共計(jì)222 個(gè)個(gè)體(表1，圖1)。所有個(gè)體置于95%酒精中固定，并保存于?20℃冰箱。

表1 中國(guó)南部沿海近親擬相手蟹的采樣信息Table 1 The sampling information of P.affine from the South China Sea

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

圖1 近親擬相手蟹的采樣點(diǎn)地理位置Fig.1 Locations of the sampling stations of P.affine

取近親擬相手蟹步足肌肉10 mg 左右，采用E.Z.N.A.TMSQ Tissue DNA Kit 試劑盒(Omega 公司) 提取總DNA，于?20℃分管保存?zhèn)溆?。使用無(wú)脊椎動(dòng)物通用引物COILl490：5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’；COIH2198：5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’[16]擴(kuò)增COⅠ基因片段，引物由廣州英濰捷基測(cè)序公司合成。PCR 反應(yīng)體系為50 μL，其中包含2×Taq10 MasterMix (北京奧賽博公司)25 μL，模板 DNA 2 μL，引物各2 μL，其余用 Milli-Q-Water 補(bǔ)足到50 μL。PCR 反應(yīng)條件為94℃預(yù)變性2 min，94℃變性45 s，47℃退火50 s，72℃延伸1 min，35 個(gè)循環(huán)，最后72℃再延伸8 min。PCR 產(chǎn)物經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)確認(rèn)為目的片段后，將樣品送至廣州英濰捷基測(cè)測(cè)公司進(jìn)行純化，并用ABI3730XL 測(cè)序儀進(jìn)行正反鏈雙向測(cè)序。

2.3 數(shù)據(jù)處理

所獲得的序列均由DNAstar 7.1[17]軟件包中的SeqMan、MegAlign 進(jìn)行校對(duì)、編輯、排序。Dnasp v5.0[18]統(tǒng)計(jì)單倍型數(shù)目、多態(tài)位點(diǎn)數(shù)、簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)數(shù)，Arlequin3.1[19]計(jì)算單倍型多樣性和核苷酸多樣性。采用MEGA7.0[20]軟件計(jì)算近親擬相手蟹群體內(nèi)和群體間平均遺傳距離，并基于Kimura 2-parameter 模型構(gòu)建單倍型鄰接樹(shù)（1 000 次自展重復(fù)）。使用Network 4.51[21]軟件包中介鄰接網(wǎng)絡(luò)法（Median Joining,MJ）構(gòu)建單倍型中介網(wǎng)絡(luò)圖。利用Arlequin 3.1[19]軟件進(jìn)行分子方差分析（Analysis of Molecular Variance,AMOVA），來(lái)評(píng)估近親擬相手蟹群體間的遺傳變異，計(jì)算群體間的遺傳分化指數(shù)Fst值，并用Tajima'sD和Fu'sFs中性檢驗(yàn)及核苷酸不配對(duì)分布，來(lái)進(jìn)行群體的歷史動(dòng)態(tài)評(píng)估[22?23]。采用公式τ=2ut估算群體擴(kuò)張發(fā)生的大致時(shí)間，其中t為群體發(fā)生擴(kuò)張的時(shí)間，u為所研究的整個(gè)序列的進(jìn)化速率，u采用2.3% 每百萬(wàn)年的核苷酸分歧速率[24?25]。

3 結(jié)果

3.1 序列分析

本研究的近親擬相手蟹12 個(gè)群體共222 條序列經(jīng)比對(duì)分析后，獲得長(zhǎng)度為612 bp 的COⅠ基因片段，其A、T、C、G 的平均含量分別為28.93%、37.25%、17.17%、16.65%，A+T 含量（66.18%）明顯大于C+G 含量（33.82%），堿基存在明顯的偏向性（表2）。共檢測(cè)到34 個(gè)變異位點(diǎn)，包括19 個(gè)單核苷酸變異位點(diǎn)，15 個(gè)簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)，無(wú)插入或缺失位點(diǎn)。34 個(gè)變異位點(diǎn)共發(fā)生了35 次核苷酸替換，其中有30 次轉(zhuǎn)換，5 次顛換，轉(zhuǎn)換和顛換之比為6.0。

3.2 序列多態(tài)性分析

近親擬相手蟹總?cè)后w的單倍型多樣性指數(shù)Hd為0.508 9，核苷酸多樣性指數(shù)Pi為0.001 126。各群體間的單倍型多樣性指數(shù)Hd在0.222 2～0.710 0 之間，核苷酸多樣性指數(shù)Pi在0.000 362～0.001 726 之間，其中雷州企水群體的單倍型多樣性和核苷酸多樣性最高，海南東方群體的單倍型多樣性和核苷酸多樣性相對(duì)較低。

在222 個(gè)個(gè)體中，COⅠ基因片段檢測(cè)到的34 個(gè)變異位點(diǎn)共定義了40 個(gè)單倍型，由表3 可知，有29 個(gè)獨(dú)有單倍型和11 個(gè)共享單倍型。其中單倍型Hap2在12 個(gè)群體中均有分布，在群體中所占比例高達(dá)69.82%，為主體單倍型。Hap3 為10 個(gè)群體共享，在群體中所占 比例為6.31%；Hap22 為4 個(gè)群體共享，Hap30 為3 個(gè)群體共享，Hap7、Hap12、Hap18、Hap20、Hap29、Hap34 各為2 個(gè)群體共享。在12 個(gè)群體中，雷州企水群體的單倍型數(shù)量最多（10 個(gè)），其次為廣西北海群體（9 個(gè)），海南東方群體的單倍型最少（2 個(gè)）。由于部分群體的樣本個(gè)體數(shù)量較少，這可能會(huì)在一定程度上影響單倍型數(shù)量、單倍型多樣性和核苷酸多樣性的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

表2 近親擬相手蟹不同群體COⅠ基因片段的堿基組成和遺傳多樣性Table 2 The base composition and genetic diversity parameters of COⅠ gene fragments among different population of P.affine

表3 近親擬相手蟹12 個(gè)群體單倍型分布情況Table 3 Haplotype distribution of P.affine in twelve populations

3.3 系統(tǒng)發(fā)育分析與單倍型中介網(wǎng)絡(luò)圖

為了更好地了解近親擬相手蟹各單倍型之間的關(guān)系，以弧邊招潮（Uca arcua，基因登陸號(hào)：LC053370）為外群，構(gòu)建了單倍型鄰接發(fā)育樹(shù)（圖2）。從系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)可以看出，40 個(gè)單倍型沒(méi)有分成明顯的支系，不同地理群體的單倍型并沒(méi)有出現(xiàn)明顯的地域分群。利用中介網(wǎng)絡(luò)鄰接法構(gòu)建的單倍型網(wǎng)絡(luò)中介圖呈星狀散射分布，主體單倍型為Hap2，其他單倍型與主體單倍型Hap2 僅保留一步或兩步突變。中介網(wǎng)絡(luò)圖中近親擬相手蟹各群體的單倍型呈零散分布，沒(méi)有明顯的地理系譜結(jié)構(gòu)，其結(jié)果進(jìn)一步支持了系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的分析（圖3）。

圖2 基于近親擬相手蟹COⅠ基因構(gòu)建的40 個(gè)單倍型鄰接系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.2 Neighbor-joining tree for 40 haplotypes of P.affine based on COⅠ gene

3.4 遺傳距離分析

從表4 可以看出，12 個(gè)近親擬相手蟹群體內(nèi)的遺傳距離在0.000 36～0.001 73 之間，海南東方群體內(nèi)的遺傳距離最小，為0.000 36；雷州企水群體內(nèi)的遺傳距離最大，為0.001 73。在不同地理群體間的遺傳距離范圍為0.000 48～0.001 72，其中雷州企水群體與廣西北海群體遺傳距離最大，為0.001 72，而海南東方群體與福建龍海群體之間的遺傳距離最小，為0.000 48。這表明群體內(nèi)和群體間的遺傳分化程度均很低，各群體間沒(méi)有形成地理隔離現(xiàn)象。遺傳分化系數(shù)Fst結(jié)果顯示，12 個(gè)群體間的Fst值均較小，范圍為?0.055 04～0.021 51，且統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著（p＞0.05），表明各群體間沒(méi)有發(fā)生明顯的遺傳分化。絕大多數(shù)群體間的Fst值為負(fù)值，表明大部分群體內(nèi)的遺傳差異水平大于群體間的遺傳差異水平。

3.5 分子方差分析

根據(jù)群體間遺傳距離及遺傳分化情況，將12 個(gè)群體作為一個(gè)整體進(jìn)行分子方差分析，結(jié)果顯示，群體間的變異百分比為?0.4%，而組群內(nèi)的變異百分比為100.4%，這亦表明了群體間的遺傳分化程度低，且群體的遺傳變異主要來(lái)自群體內(nèi)，而不是群體間?？偟墓潭ㄖ笖?shù)（FST）為?0.004 02，表明來(lái)自同一個(gè)群體的兩個(gè)隨機(jī)個(gè)體比來(lái)自不同群體的兩個(gè)隨機(jī)個(gè)體有更大的遺傳差異（表5）。

3.6 群體動(dòng)態(tài)分析

由于近親擬相手蟹群體間沒(méi)有顯著的遺傳分化，因此將12 個(gè)群體合并為一個(gè)大群體進(jìn)行歷史動(dòng)態(tài)分析。中性檢驗(yàn)顯示（表6），總?cè)后w的Tajima’sD檢驗(yàn)（Tajima’sD=?2.497 80，p＜0.05）和Fu’sFs檢驗(yàn)（Fu’sFs=?29.929 97，p＜0.05）結(jié)果均為負(fù)值，差異顯著，并且Fu’sFs檢驗(yàn)的絕對(duì)值大于Tajima’sD檢驗(yàn)絕對(duì)值，提示近親擬相手蟹曾經(jīng)發(fā)生過(guò)群體擴(kuò)張事件。此外，核苷酸不配對(duì)分析結(jié)果表明，偏離方差（SSD）和Rg（Raggedness index）均較小，統(tǒng)計(jì)結(jié)果不顯著（p＞0.05），表明未顯著偏離群體擴(kuò)張模型，進(jìn)一步暗示了近親擬相手蟹可能經(jīng)歷過(guò)群體擴(kuò)張。并且，近親擬相手蟹的單倍型核苷酸不配對(duì)分布圖呈明顯的單峰泊松分布，且觀測(cè)值不明顯偏離模擬值（圖4）。由此可見(jiàn)，中性檢驗(yàn)和核苷酸不配對(duì)結(jié)果一致，均提示近親擬相手蟹群體在歷史上可能發(fā)生過(guò)群體擴(kuò)張?；诤塑账岵慌鋵?duì)分布得到的總?cè)后w擴(kuò)張參數(shù)τ值為0.714 84，估算得出中國(guó)南部沿海近親擬相手蟹群體發(fā)生擴(kuò)張時(shí)間大約在5.1 萬(wàn)年前。

圖3 近親擬相手蟹12 個(gè)群體COⅠ基因單倍型中介網(wǎng)絡(luò)圖Fig.3 The median-joining network of COⅠ gene haplotypes in twelve populations of P.affine

表4 基于COⅠ基因序列的近親擬相手蟹群體間遺傳分化系數(shù)Fst值（對(duì)角線下）和群體內(nèi)（對(duì)角線）及群體間（對(duì)角線上）遺傳距離Table 4 F-statistics (below diagonal) within populations and genetic distance within (diagonal) and between(above diagonal) populations of P.affine based on COⅠ gene

表5 近親擬相手蟹12 個(gè)群體的AMOVA 分析Table 5 Analysis of molecular variance (AMOVA) for the twelve P.affine populations

表6 近親擬相手蟹12 個(gè)群體的中性檢驗(yàn)和核苷酸不配對(duì)分布Table 6 Neutral testes and mismatch distributions of nucleotide in twelve P.affine populations

圖4 近親擬相手蟹COⅠ基因單倍型的核苷酸不配對(duì)分布Fig.4 Mismatch distributions based on COⅠ gene haplotypes of P.affine

4 討論

4.1 遺傳多樣性分析

本研究中，我國(guó)南部沿海12 個(gè)近親擬相手蟹群體222 個(gè)個(gè)體的COⅠ堿基組成中A+T 含量占總堿基的66.18%，表現(xiàn)出較強(qiáng)的AT 偏向性，與已經(jīng)報(bào)道的相手蟹科的雙齒近相手蟹（Perisesarma bidens）[14]、邁納新脹蟹（Neosarmatium meinerti）[26]、其他軟體動(dòng)物（疣荔枝螺Reishia clavigera）[27]、星蟲(chóng)動(dòng)物（可口革囊星蟲(chóng)Phascolosoma esculenta）[28]等的COⅠ堿基組成特點(diǎn)相似，符合無(wú)脊椎動(dòng)物線粒體DNA 的堿基組成特征。

單倍型多樣性指數(shù)和核苷酸多樣性指數(shù)是衡量群體遺傳多樣性的一項(xiàng)重要指標(biāo)[29]。根據(jù)單倍型多樣性指數(shù)和核苷酸多樣性指數(shù)的特征，Grant 和Bowen[30]對(duì)遺傳多樣性劃分為低Hd和低Pi（Hd＜0.5，Pi＜0.5%）、高Hd和低Pi、低Hd和高Pi、高Hd和高Pi等4 種遺傳特征類(lèi)型。近親擬相手蟹12 個(gè)群體的單倍型多樣性指數(shù)為0.508 9，核苷酸多樣性指數(shù)為0.001 126，符合高Hd和低Pi類(lèi)型，暗示其群體近期可能經(jīng)歷了快速擴(kuò)張事件[30]。這種高Hd和低Pi的遺傳多樣性特征不僅存在于蟹類(lèi)等甲殼動(dòng)物中[13,31]，許多種海洋無(wú)脊椎動(dòng)物，尤其是具有浮游幼體階段和高繁殖潛力的海洋無(wú)脊椎動(dòng)物也存在這種特征[27?28,32]。此外，近親擬相手蟹群體較低的核苷酸多樣性可能是由于新形成的單倍型存在的時(shí)間較短，其累積的核苷酸突變很快就隨之消失而造成[33]，瓶頸效應(yīng)及隨后的群體擴(kuò)張也可能會(huì)導(dǎo)致這種遺傳多樣性格局。

單倍型中介網(wǎng)絡(luò)圖中單倍型呈星狀散射分布，Hap2 位于網(wǎng)絡(luò)中介圖中心，其廣泛分布于各個(gè)群體，占總個(gè)體數(shù)的69.81%，這暗示著Hap2 為祖先單倍型。本研究檢測(cè)到40 種單倍型中有11 個(gè)共享單倍型和29 個(gè)獨(dú)有單倍型，獨(dú)有單倍型僅在1 個(gè)群體中的1 個(gè)個(gè)體表現(xiàn)，并且其他單倍型與主體單倍型Hap2僅保留一步或兩步突變，這種現(xiàn)象通?？梢哉J(rèn)為是群體瓶頸效應(yīng)后，少量有效群體近期迅速擴(kuò)張事件引起[34]，進(jìn)一步表明近親擬相手蟹可能經(jīng)歷過(guò)群體快速爆發(fā)事件。

4.2 群體遺傳結(jié)構(gòu)特征與群體歷史動(dòng)態(tài)

遺傳分化系數(shù)Fst結(jié)果顯示，近親擬相手蟹12 個(gè)群體間的Fst值范圍為?0.055 04～0.021 51，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著（p＞0.05），群體間的遺傳分化水平很低?；谶z傳距離分析的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，群體間的遺傳距離接近甚至小于群體內(nèi)的遺傳距離，各群體間沒(méi)有形成地理隔離，AMOVA 分析結(jié)果也表明，群體間的遺傳分化程度低，群體的遺傳變異主要來(lái)自群體內(nèi)。這些結(jié)果暗示著近親擬相手蟹各群體間存在廣泛的基因交流，并且不同地理群體可以以隨機(jī)交配的方式進(jìn)行基因交流[29]，推測(cè)中國(guó)南部沿?？赡苋鄙倌苊黠@影響近親擬相手蟹群體擴(kuò)散的地理屏障。

許多具有浮游階段且有較強(qiáng)潛在擴(kuò)散能力的海洋生物，在非常廣闊的范圍內(nèi)通常會(huì)表現(xiàn)出很低的遺傳分化[35]。在大多數(shù)海洋無(wú)脊椎動(dòng)物中，浮游性幼蟲(chóng)發(fā)育是它們繁殖策略中很重要的一部分，浮游幼蟲(chóng)期持續(xù)的時(shí)間越長(zhǎng)，它們可能在洋流的作用下擴(kuò)散得越遠(yuǎn)，不同地理群體在較大的地理范圍內(nèi)潛在的基因流就越高，從而導(dǎo)致遺傳同質(zhì)性[36]。近親擬相手蟹是一種廣泛分布于紅樹(shù)林中的常見(jiàn)種類(lèi)，與大多數(shù)紅樹(shù)林蟹類(lèi)一樣，會(huì)與潮汐同步釋放幼蟲(chóng)，這些浮游幼蟲(chóng)可能會(huì)借助潮汐和洋流運(yùn)輸作用跨越數(shù)十千米至數(shù)百千米進(jìn)行擴(kuò)散[37?38]。相手蟹的幼蟲(chóng)發(fā)育通常經(jīng)過(guò)4～5個(gè)溞狀幼體期和1 個(gè)大眼幼體期，幼蟲(chóng)期持續(xù)將近1 個(gè)月，有的甚至超過(guò)1 個(gè)月[26,31,39]。較長(zhǎng)的幼蟲(chóng)浮游期以及海洋環(huán)境中缺少影響群體擴(kuò)散的屏障可能是近親擬相手蟹群體能進(jìn)行頻繁的基因交流，從而在較大地理范圍內(nèi)表現(xiàn)出較低的遺傳分化水平的重要原因。類(lèi)似的結(jié)果在雙齒近相手蟹[14]、環(huán)紋招潮（Uca annulipes）[40]的群體遺傳研究中也有報(bào)道。

本研究中單倍型中介網(wǎng)絡(luò)圖呈星狀結(jié)構(gòu)、中性檢驗(yàn)和核苷酸不配對(duì)分析的結(jié)果均暗示著近親擬相手蟹近期發(fā)生過(guò)群體擴(kuò)張事件，根據(jù)核苷酸不配對(duì)τ值估算群體擴(kuò)張時(shí)間大約發(fā)生在5.1 萬(wàn)年前的更新世晚期。更新世的劇烈氣候波動(dòng)，冰期和間冰期變化頻繁，冰川不斷進(jìn)退消融，由此引起的海平面的升降對(duì)地球上的動(dòng)植物地理空間分布格局和遺傳結(jié)構(gòu)均產(chǎn)生了重大影響[41?42]。更新世海平面周期性的波動(dòng)使海洋生物經(jīng)歷了棲息地的反復(fù)收縮和擴(kuò)張，尤其是末次冰盛期，大部分地區(qū)為巨大的冰原所覆蓋，西太平洋邊緣海平面下降，棲息地急劇收縮，迫使眾多海洋生物進(jìn)入生物避難所，隨著冰川消退和氣溫回升，海平面上升，棲息地范圍擴(kuò)大，幸存物種開(kāi)始重新擴(kuò)散并快速增長(zhǎng)[41,43]。近親擬相手蟹的群體擴(kuò)張時(shí)間大約發(fā)生在5.1 萬(wàn)年前，推測(cè)近親擬相手蟹在更新世冰盛期經(jīng)歷了棲息地劇烈收縮和種群數(shù)量的減少，隨著氣溫回升，海平面的上升和棲息地范圍的擴(kuò)大，適宜的環(huán)境讓近親擬相手蟹幸存種群開(kāi)始迅速擴(kuò)張。不少研究也發(fā)現(xiàn)蟹類(lèi)在更新世發(fā)生過(guò)群體擴(kuò)張事件[12,14,40]，海平面和溫度的變化可能導(dǎo)致了其群體遺傳結(jié)構(gòu)的變化。由此可見(jiàn)，更新世的劇烈氣候變遷對(duì)海洋蟹類(lèi)群體的遺傳結(jié)構(gòu)和分布格局產(chǎn)生了巨大影響。

綜上所述，近親擬相手蟹12 個(gè)地理群體內(nèi)和群體間的遺傳距離小，不同地理群體的單倍型沒(méi)有明顯的地理系譜結(jié)構(gòu)，群體間的遺傳分化程度低，群體的遺傳變異主要來(lái)自群體內(nèi)，這些暗示著近親擬相手蟹不同地理群體間存在著廣泛的基因交流。幼蟲(chóng)浮游期長(zhǎng)和較強(qiáng)的潛在擴(kuò)散能力，海洋環(huán)境中缺少影響群體擴(kuò)散的屏障以及近期的群體擴(kuò)張事件，可能是近親擬相手蟹不同地理群體間存在著廣泛的基因交流，沒(méi)有形成顯著遺傳結(jié)構(gòu)的重要原因，研究結(jié)果為近親擬相手蟹自然資源的保護(hù)及合理開(kāi)發(fā)利用提供了一定理論依據(jù)。然而，浮游幼蟲(chóng)的擴(kuò)散是非常復(fù)雜的過(guò)程，易受到生活史特征、洋流、地理屏障等生物和非生物因素的影響，也有越來(lái)越多研究證明，海洋區(qū)域中存在著邊界和屏障，導(dǎo)致一些蟹類(lèi)群體的基因交流受限和出現(xiàn)遺傳分化[26,44?45]。此外，近年來(lái)中國(guó)沿海環(huán)境不斷發(fā)生變化，特別是人為干擾的加劇，可能會(huì)對(duì)近親擬相手蟹這種生活于潮間帶區(qū)域的蟹類(lèi)種群動(dòng)態(tài)產(chǎn)生較大影響。本研究的樣品采集于2012?2013年，至于這幾年的沿海環(huán)境變化和人為活動(dòng)是否會(huì)導(dǎo)致近親擬相手蟹群體的遺傳結(jié)構(gòu)在不同時(shí)間尺度上出現(xiàn)差異尚不明確。穩(wěn)定的遺傳變異對(duì)群體的演化及適應(yīng)環(huán)境變化有重要作用，不同區(qū)域動(dòng)物群體遺傳變異在時(shí)間尺度上具有一定的穩(wěn)定性[46]，但也有研究發(fā)現(xiàn)在不同的年份中，人為干擾嚴(yán)重的區(qū)域一些動(dòng)物群體的遺傳結(jié)構(gòu)出現(xiàn)分化，而遠(yuǎn)離人為干擾環(huán)境中的群體，在不同年份中群體之間遺傳結(jié)構(gòu)不存在差異[47]。由于本研究的采樣時(shí)間、地點(diǎn)和樣品量存在一定局限性，至于近親擬相手蟹群體在更大的地理范圍內(nèi)是否存基因交流限制和顯著遺傳結(jié)構(gòu)，以及在不同的時(shí)間尺度上群體遺傳結(jié)構(gòu)是否存在差異，還需擴(kuò)大研究范圍，深入研究群體遺傳變異的時(shí)空動(dòng)態(tài)變化，并運(yùn)用多種分子標(biāo)記手段，以得出更全面和客觀的結(jié)論。