液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定食品中烏洛托品 殘留分析方法

彭桂莊

（廣東方舟檢測(cè)技術(shù)有限公司，廣東惠州 516006）

食品安全問題是現(xiàn)階段人們最為關(guān)注的問題，盡管食品生產(chǎn)中有嚴(yán)格的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)以及生產(chǎn)流程，但是仍然存在不法分子為了提升食物色澤、延長(zhǎng)食物保質(zhì)期在食品生產(chǎn)中添加對(duì)人體有害的物質(zhì)[1]。烏洛托品白色吸濕性結(jié)晶粉末或無色有光澤的菱形結(jié)晶體，具有較好的抗腐蝕性，因此不法商家將該物質(zhì)被用于食品生產(chǎn)中起到防腐保鮮作用，該物質(zhì)攝入人體后對(duì)會(huì)造成消費(fèi)者出現(xiàn)胃痛、惡心、呼吸困難，長(zhǎng)期攝入對(duì)消費(fèi)者的心臟、腎臟以及中樞神經(jīng)均會(huì)造成影響，加強(qiáng)烏洛托品食品檢驗(yàn)是食品安全發(fā)展過程中的重要組成[2-3]。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是目前食品安全監(jiān)測(cè)中的重要技術(shù)，該技術(shù)原理主要是利用液相色譜進(jìn)行分離，而后利用串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對(duì)食品樣本進(jìn)行電離情況分析。該種食品檢測(cè)方法具有較高的選擇性和靈敏度，將兩者有效結(jié)合可以對(duì)食品中有害物質(zhì)進(jìn)行分析，目前技術(shù)已經(jīng)被廣泛用于農(nóng)藥殘留、獸藥殘留以及化學(xué)物質(zhì)測(cè)定中[4-5]。

《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單（第1～5批匯總）》中包括烏洛托品，傳統(tǒng)的食品檢驗(yàn)方法在檢驗(yàn)過程中只能對(duì)肉質(zhì)內(nèi)臟、腎臟及豬肉中的烏洛托品殘留量進(jìn)行檢驗(yàn)，無法滿足其他食品中該物質(zhì)的檢驗(yàn)需求。常見檢驗(yàn)烏洛托品手段主要利用點(diǎn)電導(dǎo)滴定法、極譜法、電位滴定法，這些檢驗(yàn)方法盡管可以滿足基礎(chǔ)食品檢驗(yàn)需求，但檢驗(yàn)靈敏度較低，檢驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)。因此加強(qiáng)烏洛托品液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定并進(jìn)行穩(wěn)定試驗(yàn)極為重要，筆者結(jié)合自身經(jīng)驗(yàn)以及文獻(xiàn)總結(jié)，對(duì)食品中烏洛托品含量進(jìn)行測(cè)定，保證食品檢測(cè) 安全。

1 材料與方法

1.1 試劑與設(shè)備

本次研究中涉及的試劑及儀器如表1所示。

表1 試驗(yàn)使用的試劑與儀器

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)液配制

精密稱取烏洛托品10 g，放置在100 mL容量瓶中，利用乙腈將其稀釋溶解搖勻，制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 mg/L）。吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0 mL，放置于 100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋，制成標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1 mg/L），將其放置在4 ℃遮光環(huán)境保存。樣品處理過程中，稱取3.0 g樣本，將其放置在50 mL離心管內(nèi)，加入無水硫酸鈉2 g、乙腈10 mL渦旋混勻 2 min，而后進(jìn)行離心，10 000 r/min離心5 min，使用0.22 μm濾膜過濾。再次進(jìn)行樣本處理，與前者處理方法相似，離心完成后將乙腈溶液放置于10 mL比色管中，用氮?dú)猓?0 ℃）吹干，利用2 mL 0.2 mol/L的醋酸銨溶液活化PCX固相萃取柱。

1.2.2 儀器條件

（1）色譜條件。Agilent Zorbax 300SCX色譜柱（150 mm×2.1 mm，5 μm）；柱溫：40 ℃；流速： 0.4 mL/min；流動(dòng)相A：0.01 mol/L醋酸銨，B：乙腈。線性脫洗程序：0～3 min，70%A；3～5 min，70%A線性降 至20%A；5.01～8 min，20%A；8～ 8.01 min，由20%A線性升至70%A。進(jìn)樣量控制 在10 mL。

（2）質(zhì)譜條件。電噴霧離子源，正離子模式，掃描方式以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；4 000 V毛細(xì)管電壓，40 Psi霧化器；干燥氣體溫度控制在350 ℃（N2），流速控制在9 L/min。

1.3 方法驗(yàn)證

分別使用乙腈對(duì)烏洛托品標(biāo)準(zhǔn)中間溶液進(jìn)行稀釋，分別稀釋為濃度為5 μg/L、20 μg/L、100 μg/L、500 μg/L等濃度溶液，利用0.22 μm尼龍過濾后進(jìn)行上機(jī)測(cè)定。測(cè)定結(jié)果顯示烏洛托品濃度在5～ 500 μg/L濃度具有良好的線性，線性方程Y=481X- 6 600，r=0.998 8，進(jìn)行空白樣品分析，100 μg/L隨機(jī)加標(biāo)樣品重復(fù)檢驗(yàn)，其偏差為1.1%以及3.5%。為進(jìn)一步對(duì)進(jìn)行研究，利用標(biāo)準(zhǔn)加入法對(duì)該物質(zhì)回收率進(jìn)行測(cè)定，選取食品魚仔熟食、濕米粉、腐竹等食品。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品加標(biāo)回收測(cè)定

通過研究發(fā)現(xiàn)子加標(biāo)回收試驗(yàn)中濕米粉、魚仔熟食、腐竹食品的加標(biāo)回收率范圍在52.5%～118%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差≤10.1%，具體見表2。

表2 樣品加標(biāo)回收測(cè)定

2.2 色譜圖分析

以濕米粉、魚仔熟食、腐竹食品為空白樣品，而后加入3個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)加入標(biāo)準(zhǔn)品樣品進(jìn)行5次重復(fù)試驗(yàn)，圖譜分析如下。通過色譜圖分析，發(fā)現(xiàn)在空白樣品測(cè)定過程中隨著試驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)其峰值面積逐漸升高降低，而添加不同濃度烏洛托品后隨著時(shí)間延長(zhǎng)峰值明顯，當(dāng)6～8 min后峰值出現(xiàn)回落，見圖1至圖5。

圖1 空白樣品色譜圖

圖2 添加1.2 μg/kg烏洛托品的濕米粉色譜圖

圖3 添加1.2 μg/kg烏洛托品的魚籽熟食色譜

圖4 添加50 μg/kg烏洛托品的魚籽熟食色譜

圖5 添加50 μg/kg烏洛托品的腐竹色譜

2.3 干擾試驗(yàn)

在食品檢驗(yàn)過程中會(huì)受到多種因素影響，而利用液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢驗(yàn)烏洛托品檢驗(yàn)中可能受到三聚氰胺、雙氰胺等影響造成烏洛托品測(cè)定數(shù)據(jù)出現(xiàn)異常，因此研究中添加了干擾試驗(yàn)，試驗(yàn)分別對(duì)三聚氰胺、雙氰胺進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)溶液制備，并進(jìn)行相同濃度分析。在相同的試驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行質(zhì)譜以及色譜檢驗(yàn)，結(jié)果表明，上述兩種物質(zhì)均未檢出，而且將上述溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行混合，發(fā)現(xiàn)對(duì)試驗(yàn)研究結(jié)果干擾并不明顯，說明三聚氰胺，雙氰胺等物質(zhì)在質(zhì)譜檢驗(yàn)聯(lián)合色譜檢驗(yàn)烏洛托品中干擾性較低，可以忽略。

2.4 試驗(yàn)樣品測(cè)定

對(duì)食品抽檢的采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定含量甲醛食物，雞爪，墨魚干、堿面、濕米粉、腐竹和豬肉等食品進(jìn)行烏洛托品含量測(cè)定，測(cè)定結(jié)果如表3。在實(shí)際的食品烏洛托品測(cè)定中發(fā)現(xiàn)，在6種食物中僅雞爪檢測(cè)出烏洛托品，且含量為0.333 mg/kg，其他食物中并未檢測(cè)出烏洛托品，但此次試驗(yàn)中由于食物均含有甲醛，不能絕對(duì)說明食品中不含烏洛托品，且烏洛托品易水解，因此食品檢測(cè)中不僅需要加強(qiáng)食品安全檢驗(yàn)研究，同時(shí)還需要從食品生產(chǎn)環(huán)節(jié)以及流通等環(huán)節(jié)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，加強(qiáng)食品安全檢驗(yàn)，保證人們的飲食安全。

表3 實(shí)際樣品測(cè)定數(shù)據(jù)（單位：mg/kg）

3 結(jié)論

此次研究中將液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用于測(cè)定烏洛托品，檢驗(yàn)結(jié)果顯示，線性方程Y=481X- 6 600，r=0.998 8，進(jìn)行空白樣品分析，100 μg/L隨機(jī)加標(biāo)樣品重復(fù)檢驗(yàn)，其偏差為1.1%和3.5%。加標(biāo)回收試驗(yàn)中濕米粉、魚仔熟食、腐竹食品的加標(biāo)回收率范圍在52.5%～118%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差≤10.1%。充分說明該種檢查方法可以滿足當(dāng)前食品中烏洛托品物質(zhì)檢查，使食物使用更加健康。

綜上所述，液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)作為靈敏度高、檢測(cè)效能高、準(zhǔn)確度高且操作簡(jiǎn)單的食品安全檢測(cè)方法，具有較廣泛的適用范圍。在進(jìn)行烏洛托品檢驗(yàn)中利用無水硫酸鈉干燥，乙腈溶液提取，使用0.01 mol/L醋酸銨-乙腈溶液進(jìn)行流動(dòng)相梯度洗脫，利用SCX色譜柱分離，進(jìn)行定量定性檢驗(yàn)。液相色譜-質(zhì)譜檢驗(yàn)中檢驗(yàn)速度快，時(shí)間花費(fèi)少，且符合食品檢驗(yàn)中大批量食物檢驗(yàn)，對(duì)于保證消費(fèi)者食品安全有重要積極意義。