鋪地黍染色體制片優(yōu)化及核型分析

林曉璇，陳林靜，容晨毓，陳凱琪，高桂娟

（廣東第二師范學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，廣東廣州510303）

鋪地黍(Panicum repens)廣布于熱帶、亞熱帶地區(qū)，繁殖能力強(qiáng)，其在干旱、水淹、重金屬脅迫、富營(yíng)養(yǎng)化水體等環(huán)境條件下，均表現(xiàn)出較好的抗逆性及凈化能力[1-3]，同時(shí)，還表現(xiàn)出一定的飼用價(jià)值。目前，鋪地黍以及相關(guān)屬的植物染色體制片報(bào)道較少[4]，《中國(guó)植物志》記錄鋪地黍染色體數(shù)2n=40[5]，但未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道鋪地黍的核型參數(shù)。

染色體核型分析在研究植物的起源、系統(tǒng)演化以及物種間親緣關(guān)系等方面都起著重要意義[6]。不同物種在預(yù)處理、解離以及制片等步驟中采用的方法各有不同，每個(gè)過(guò)程都可能對(duì)染色體帶來(lái)或多或少的影響[7-14]。為獲得更好的鋪地黍染色體制片效果及確定鋪地黍核型公式和不對(duì)稱程度，本研究對(duì)鋪地黍染色體制片技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化并進(jìn)行核型分析，以期為鋪地黍的起源、演化及遺傳育種提供一定的理論依據(jù)和技術(shù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)材料鋪地黍采自于廣東省大寶山，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程均采用同一株系擴(kuò)繁材料，以水培條件培養(yǎng)，取幼嫩根尖進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 方法

1.2.1 改良的制片技術(shù)

本研究采用改良的壓片法，將去壁低滲–火焰干燥技術(shù)的低滲環(huán)節(jié)加入到壓片技術(shù)中[10,15]，操作流程如圖1 所示；以鋪地黍根尖為材料，從預(yù)處理、固定、前低滲、解離4 個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)。

圖 1 改良的壓片操作過(guò)程Figure 1 Im proved process of pressure sheet

1.2.2 取材時(shí)間

植物分生組織的生長(zhǎng)具有一定周期性，一般認(rèn)為取材應(yīng)選在分裂中期最為合適，通常在08:00?11:00 或13:00?15:00 進(jìn)行[7]；但有研究發(fā)現(xiàn)最佳取材時(shí)間并不具有較好的穩(wěn)定性，且在最佳時(shí)間取材所獲得的分裂中期染色體比例也有較大波動(dòng)[16]。也有學(xué)者指出，不同植物在不同溫度條件下，細(xì)胞的分裂周期是可變的，而用一個(gè)固定的晝夜節(jié)律的概念去理解多變的細(xì)胞周期是缺乏理論依據(jù)而且在實(shí)踐上也不能得到證實(shí)，因此，只要植物的分生組織處在良好活動(dòng)狀態(tài)，在一天中任何時(shí)間取材均可[17]。將鋪地黍的根尖進(jìn)行取樣也證實(shí)，在08:00?18:00 取材均可得到一定數(shù)量可供核型分析的中期細(xì)胞(表1)，并且在根長(zhǎng)為0.5 和2 cm 時(shí)分別取材進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)兩者對(duì)有絲分裂中期細(xì)胞的數(shù)量并無(wú)太大影響，分生區(qū)細(xì)胞成熟程度也未發(fā)現(xiàn)較大區(qū)別。基于文獻(xiàn)以及方便后續(xù)研究，均在根尖長(zhǎng)度為0.5～2 cm 時(shí)，于15:00 左右取材進(jìn)行處理。

1.2.3 預(yù)處理階段優(yōu)化

預(yù)處理的目的在于阻止或破壞紡錘體形成，使有絲分裂被阻斷在中期；也可導(dǎo)致染色體高度濃縮，使染色體變短，從而利于染色體分散。另外，用不同的預(yù)處理方法所得效果不同，如用藥液(如秋水仙素和8-羥基喹啉的混合溶液)預(yù)處理，雖然濃度很低，但它們對(duì)細(xì)胞都有毒害作用，這種毒害作用強(qiáng)度隨溫度變化而不同；而用冰水混合物低溫預(yù)處理相對(duì)安全，但不適用于所有植物，因?yàn)椴煌参锛?xì)胞的合成、代謝及細(xì)胞分裂對(duì)低溫的反應(yīng)不同[17]。預(yù)處理?xiàng)l件的單因素優(yōu)化設(shè)計(jì)：對(duì)預(yù)處理進(jìn)行8 種不同條件設(shè)計(jì)，冰水混合物4℃分別設(shè)置12、20、22、24、48h，1?1 溶液(0.002mol·L?18-羥基喹啉溶液?0.0 5%秋水仙素溶液)4℃分別設(shè)置2、3、4 h，每處理5 個(gè)重復(fù)。固定、前低滲和解離統(tǒng)一采用常規(guī)固定條件(卡諾氏固定液Ⅰ、4℃、2 4 h)、常規(guī)前低滲條件(0.075mol·L?1KCl 溶液、25℃、30m in)和常規(guī)解離條件(混合酶液、25℃、4h)[17]，每處理5 個(gè)重復(fù)。

表 1 不同取材時(shí)間對(duì)鋪地黍中期細(xì)胞的影響Table 1 Effect of different collection tim es on the metaphase of Panicum repens

1.2.4 固定階段優(yōu)化

固定的目的在于用固定液將細(xì)胞迅速殺死，使蛋白質(zhì)沉淀并盡量使其保持原有狀態(tài)；一般采用卡諾氏固定液Ⅰ(無(wú)水乙醇?冰醋酸=3?1)低溫(4℃左右)固定材料；也有使用甲醇替代無(wú)水乙醇，但由于甲醇毒性較大，且對(duì)細(xì)胞壁和染色體的硬化作用較乙醇強(qiáng)，一般只用于去壁低滲干燥法中[15,17]。固定階段的單因素優(yōu)化設(shè)計(jì)：使用卡諾氏固定液Ⅰ(無(wú)水乙醇?冰醋酸=3?1)在4℃條件下，分別固定1、2、12 和24 h 的梯度設(shè)計(jì)。預(yù)處理、前低滲和解離統(tǒng)一采用已獲得的優(yōu)化預(yù)處理?xiàng)l件(冰水混合物4℃預(yù)處理22h)和常規(guī)前低滲條件(0.075mol·L?1KCl溶液、25℃、3 0m i n)、常規(guī)解離條件(混合酶液、2 5℃、4 h)[17]，每處理5 個(gè)重復(fù)。

1.2.5 前低滲階段優(yōu)化

在解離前進(jìn)行前低滲，解離后又進(jìn)行后低滲，水分通過(guò)細(xì)胞膜滲入細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞膨脹，進(jìn)而使得本來(lái)分散的染色體更加分散[18]。利用常規(guī)壓片方法進(jìn)行制片，解離后材料較硬，細(xì)胞較難分散，并且很難將細(xì)胞壓到同一個(gè)平面，所得染色體圖像不清晰；有研究將去壁低滲干燥技術(shù)的低滲加到壓片技術(shù)之中，所得制片效果良好[10,15]；一般使用蒸餾水或0.075mol·L?1KCl 溶液進(jìn)行低滲，處理時(shí)間的長(zhǎng)短也因植物的不同而定。前低滲條件的單因素優(yōu)化設(shè)計(jì)：前低滲階段用0.075mol·L?1KCl 溶液在25℃條件下分別設(shè)置5、10、15、20、25、30 及60 m in 共7 個(gè)時(shí)間梯度，預(yù)處理、固定和解離統(tǒng)一采用已獲得的優(yōu)化預(yù)處理?xiàng)l件(冰水混合物4℃預(yù)處理2 2 h)、優(yōu)化固定條件(卡諾氏固定液Ⅰ固定2 4 h)及常規(guī)解離條件(混合酶液、25℃、4h)[17]，每處理5 個(gè)重復(fù)。

1.2.6 解離階段優(yōu)化

解離的目的在于將部分細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞壁的纖維素和果膠物質(zhì)分解或軟化細(xì)胞壁，易于染色體分散制片；酸解法通常用1mol·L?1HCl 在60℃水浴鍋解離幾分鐘到十幾分鐘或更長(zhǎng)；對(duì)于難以解離或軟化的材料，也有用無(wú)水乙醇和濃鹽酸的混合液進(jìn)行解離；而采用纖維素酶(1%～5%)和果膠酶(1%～3%)的混合溶液去除細(xì)胞壁時(shí)，酶的濃度、質(zhì)量、pH 以及酶解的時(shí)間、溫度都對(duì)酶解效果有不同的影響，酶解時(shí)間一般在室溫下2～5 h[15-18]。解離階段的單因素優(yōu)化設(shè)計(jì)：酸解法用濃HCl?95%乙醇=1?1(25℃)分別設(shè)置5、10、15min 和1mol·L?1HCl(60℃)分別設(shè)置5、1 0、1 5m in；酶解法用1%果膠酶和2%纖維素酶(25℃)分別設(shè)置2、3、4 h，共9 種解離條件，預(yù)處理、固定、前低滲統(tǒng)一采用已獲得的優(yōu)化預(yù)處理?xiàng)l件(冰水混合物4℃預(yù)處理2 2 h)、優(yōu)化固定條件(卡諾氏固定液Ⅰ固定2 4 h)及優(yōu)化前低滲條件(0.075mol·L?1KCl 溶液、25℃、前低滲15～20m in)，每處理5 個(gè)重復(fù)。

1.2.7 鏡檢

用OLYMPUSCX22 顯微鏡觀察，選擇30 個(gè)染色體分散且形態(tài)較好的細(xì)胞進(jìn)行染色體數(shù)目統(tǒng)計(jì)，若85%以上染色體數(shù)目相同時(shí)，即能夠確定染色體數(shù)目[19]；其次選取5 個(gè)分裂相對(duì)良好且染色體形態(tài)清晰的細(xì)胞再用佳能相機(jī)借助顯微鏡單反相機(jī)轉(zhuǎn)接口(2X)在油鏡下拍照。

1.2.8 核型分析

選取5 張染色體形態(tài)清晰且無(wú)重疊的圖片使用Photoshop 軟件對(duì)染色體進(jìn)行測(cè)量和配對(duì)[20]，用Excel 軟件繪制核型模式圖[21]。核型分析方法依據(jù)李懋學(xué)和陳瑞陽(yáng)[19]的標(biāo)準(zhǔn)，染色體形態(tài)根據(jù)Levan等[22]的方法歸類，核型不對(duì)稱性按照Stebbins[23]的標(biāo)準(zhǔn)劃分。

臂比(r)＝長(zhǎng)臂(S)/短臂(L)；染色體絕對(duì)長(zhǎng)度(μm)＝放大的染色體長(zhǎng)度(mm)/放大倍數(shù)×1 000；染色體相對(duì)長(zhǎng)度(%)＝染色體長(zhǎng)度/染色體組總長(zhǎng)度×1 0 0%；染色體平均相對(duì)長(zhǎng)度(%)＝染色體組總相對(duì)長(zhǎng)度/染色體組總數(shù)；染色體相對(duì)長(zhǎng)度系數(shù)(Index of relativelength)＝每條染色體相對(duì)長(zhǎng)度/染色體平均相對(duì)長(zhǎng)度；平均長(zhǎng)度核型不對(duì)稱系數(shù)(As.k，%)=長(zhǎng)臂總長(zhǎng)/全組染色體總長(zhǎng)×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理階段優(yōu)化的染色體制片效果

2.1.1 預(yù)處理階段優(yōu)化的染色體制片效果

8 種處理?xiàng)l件中，冰水混合物4℃預(yù)處理2 2 h染色體長(zhǎng)度適宜、分散良好、清晰度高(圖2C)，是適合鋪地黍類染色體制片的預(yù)處理方法。冰水混合物4℃預(yù)處理2 0 h 和1?1 溶液4℃處理3 h 條件下會(huì)出現(xiàn)局部黏連現(xiàn)象(圖2B 和圖2G)，或者冰水混 合 物4℃預(yù)處理1 2 h 和1?1 溶 液4℃處理2 h后凝縮程度不足、嚴(yán)重拖尾現(xiàn)象(圖2A 和圖2F)。而4℃預(yù)處理2 4 h、4 8 h 和1?1 溶液4℃處理4 h的染色體凝縮過(guò)度，并出現(xiàn)染色體不同層現(xiàn)象(圖2D、圖2E、圖2H)。

圖 2 不同預(yù)處理?xiàng)l件的單因素試驗(yàn)制片效果Figure 2 Single-factor effect of different pre-treatmentconditions on chromosome preparation

2.1.2 固定階段優(yōu)化的染色體制片效果

4 種處理中，使用卡諾氏固定液Ⅰ(無(wú)水乙醇 ?冰醋酸=3?1)在4℃條件下固定2 4 h 細(xì)胞視野清晰，染色體分散，染色效果良好，易于觀察計(jì)數(shù)(圖3D)，即固定24 h 是適合鋪地黍類染色體制片的固定時(shí)間。固定1 h 會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)易染上顏色(圖3A)、固定2 h 細(xì)胞視野清晰但染色體局部黏連(圖3B)、固定12 h 染色深淺不一且局部聚集(圖3C)。

圖 3 不同固定條件的單因素試驗(yàn)制片效果Figure 3 Single-factor effect of different fixed conditions on chromosom e preparation

2.1.3 前低滲階段優(yōu)化的染色體制片效果

用0.075mol·L?1KCl 溶液在25℃條件下前低滲15 和20m in 染色體易于著色，染色體較分散(圖4C和圖4D)，即解離前低滲15～20m in 易于鋪地黍類染色體分散。前低滲5 和25m in 染色體染色效果較好，但染色體較黏連(圖4A 和圖4E)；前低滲10m in的染色體大致分散，但染色效果不佳(圖4B)；前低滲30 和60m in 染色體凝集纏繞嚴(yán)重，難以觀察計(jì)數(shù)(圖4F 和圖4G)。

2.1.4 解離階段優(yōu)化的染色體制片效果

鋪地黍根尖相對(duì)較佳的解離條件為1%果膠酶和2%纖維素酶于25℃條件下酶解3 h(圖5H)，經(jīng)此方法處理后，細(xì)胞壁完全溶解，細(xì)胞質(zhì)稀薄，染色體分散且易著色。而用1%果膠酶和2%纖維素酶于25℃條件下酶解2 h，細(xì)胞壁基本溶解，細(xì)胞質(zhì)較薄，染色體易著色但不夠分散(圖5G)；酶解4 h，細(xì)胞壁破壞徹底，細(xì)胞質(zhì)很稀薄，背景清晰，染色體易著色，但根尖易斷裂丟失，導(dǎo)致染色體易缺失(圖5I)。

圖 4 不同前低滲條件的單因素試驗(yàn)制片效果Figure 4 Single-factor effect of different pre-hypotension conditions on chromosome preparation

圖 5 不同解離條件的單因素試驗(yàn)制片效果Figure 5 Single-factor effect of different dissociation conditions on chromosome preparation

采用酸解法所得制片效果較差，在25℃條件下 用濃HCl?9 5%乙醇=1?1 解 離5、1 0min，細(xì) 胞壁均未全部溶解，細(xì)胞質(zhì)厚，細(xì)胞易重疊，染色體聚集且難著色(圖5A 和圖5B)；用濃HCl?95%乙醇=1?1 解離1 5m in 細(xì)胞壁已全部溶解，但細(xì)胞質(zhì)仍較厚，染色體不夠分散，難著色(圖5C)。在60℃條件下用1mol·L?1HCl 解離5m in，細(xì)胞壁全部溶解，細(xì)胞質(zhì)薄，但染色體不夠分散，難著色(圖5D)；解離10min，細(xì)胞壁破壞徹底，細(xì)胞質(zhì)很稀薄，背景干凈，染色體較分散，易著色，但細(xì)胞容易重疊(圖5E)；解離15min，細(xì)胞壁完全溶解、細(xì)胞質(zhì)薄，但染色體不夠分散、著色不均勻(圖5F)。

綜上，將優(yōu)化處理整理如圖6 所示。在根長(zhǎng)0.5～2c m、1 5:0 0 時(shí)剪取根尖，采用冰水混合物在4℃條件下預(yù)處理22h 后，于4℃條件下用卡諾氏固定液Ⅰ固定24h，接著用0.075mol·L?1KCl 溶液于25℃條件下前低滲15～20m in，置于1%果膠酶和2%纖維素酶混合酶液于25℃條件酶解3 h，再用蒸餾水于25℃條件后低滲3 0 m i n，于2 5℃條件下用卡諾氏固定液Ⅰ再固定30m in 后使用改良苯酚品紅染液染色8m in，用吸水紙吸取染液，蓋上蓋玻片，對(duì)邊輕壓玻片邊緣并用帶橡皮鉛筆頭敲擊。

圖 6 鋪地黍根尖細(xì)胞染色體制片優(yōu)化條件Figure 6 The optim ized conditions for preparing chrom osomes in Panicum repens root tip cells

2.2 鋪地黍核型分析

2.2.1 染色體數(shù)目

鋪地黍染色體數(shù)目為2 n=2 x=40，為二倍體。

2.2.2 核型特征鋪地黍核型公式為2n=2 x=4 0=3 4m+6sm，為中部和亞中部著絲粒染色體，未發(fā)現(xiàn)有隨體(表2、圖7)。染色體絕對(duì)長(zhǎng)度范圍為10.87～19.21μm，屬于大型染色體。染色體相對(duì)長(zhǎng)度為3.85～6.81，相對(duì)長(zhǎng)度組成為2n=40=2L+16M2+22M1；最長(zhǎng)與最短染色體長(zhǎng)度比值為1.77，臂比值范圍為1.04～2.08，核型不對(duì)稱系數(shù)為58.99%，核型類型屬于2A 型。

表 2 鋪地黍染色體核型參數(shù)Table 2 Parameters of the chromosome karyotype of Panicum repens

3 討論

3.1 鋪地黍染色體制片優(yōu)化效果分析

圖 7 鋪地黍中期分裂相(A)、染色體核型(B)及核型模式圖(C)Figure 7 Chromosomes in the metaphase cleavage phase (A), karyotypes (B), and karyotype models (C) of Panicum repens

在染色體制片過(guò)程中，每個(gè)過(guò)程都可能對(duì)染色體的核型參數(shù)帶來(lái)影響[24-25]；許多學(xué)者也根據(jù)不同的物種對(duì)染色體制片進(jìn)行優(yōu)化[8-14]。良好的染色體制片效果受多方面因素的影響，大量研究表明，預(yù)處理?xiàng)l件是染色體制備的關(guān)鍵步驟之一[26]。有研究發(fā)現(xiàn)冰水混合物不適合用于山藥(Dioscorea oppositifolia)的預(yù)處理[27]；另有研究發(fā)現(xiàn)用對(duì)二氯苯飽和溶液和0.003mol·L?18-羥基喹啉將雅礱江冬麻豆(Salweenia bouffordiana)預(yù)處理3 h 的中期染色體形態(tài)良好，更有利于開(kāi)展核型分析[28]。本研究通過(guò)對(duì)鋪地黍根尖進(jìn)行不同預(yù)處理發(fā)現(xiàn)，置于冰水混合物在4℃條件下預(yù)處理2 2 h，染色體凝縮程度適宜、分散良好，其最佳預(yù)處理?xiàng)l件與平邑甜茶(Malus hupehensis var.mengshanensis)的研究結(jié)果一致[29]。

固定的時(shí)間一般為2～24 h，材料小者時(shí)間可短，大者可長(zhǎng)，大多植物在4℃條件用卡諾氏固定液Ⅰ固定的效果較好[17]；也有研究發(fā)現(xiàn)青花菜(Brassica oleracea)根尖材料對(duì)固定時(shí)間沒(méi)有嚴(yán)格的要求，12～24 h 均可[15]。鋪地黍根尖的最佳固定條件是卡諾氏固定液Ⅰ4℃條件固定2 4 h。

有研究將去壁低滲干燥技術(shù)的前低滲環(huán)節(jié)(0.075mol·L?1KCl溶液、25℃、30m in)用于青花菜根尖的壓片法[15]，另有研究將去壁低滲干燥技術(shù)的后低滲(蒸餾水、室溫、30m in)加到白姜花(Hedychium coronarium)、金姜花(H. gardnerianum)等姜科植物根尖的壓片技術(shù)之中，均制得分散良好的染色體裝片，且染色效果好，所制染色體圖像清晰，易于觀察[10]。鋪 地黍 在0.075mol·L?1KCl 溶 液于25℃條件下前低滲15～20m in 的效果最佳，可以獲得濃縮程度適宜且分散的染色體。

有研究將小麥根尖放入預(yù)熱的1mol·L?1HCl 中在60℃的水浴鍋解離7～8 m in，所得材料最適合制片；而酶解法中使用纖維素酶和果膠酶進(jìn)行解離時(shí)，只需在37℃條件下酶解8 m in 左右就可以得到好的分裂相[30]。也有研究發(fā)現(xiàn)用5%纖維素酶和4%果膠酶混合液對(duì)尖葉牛樟(Cinnamomum kanehirae)根尖酶解3 h 制片效果最差[25]。對(duì)于鋪地黍，用1%果膠酶和2%纖維素酶混合酶液于25℃條件酶解3h 效果最佳；用1mol·L?1HCl60℃水浴加熱發(fā)現(xiàn)，解離10min 就能夠去除細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)，但不易于壓片，細(xì)胞容易發(fā)生重疊，不利于染色體的觀察。

3.2 鋪地黍染色體數(shù)目及核型特征分析

在系統(tǒng)演化上，具有對(duì)稱核型的植物屬于較古老或原始類型，而不對(duì)稱核型往往出現(xiàn)在進(jìn)化水平較高或特化的植物中，并且具有較相似核型的物種往往親緣關(guān)系較近。核型不對(duì)稱系數(shù)越接近50%，表明核型的對(duì)稱程度越高，進(jìn)化程度就越原始[23,31]。而鋪地黍的核型不對(duì)稱系數(shù)為58.99%，接近50%，具有較大的對(duì)稱性，核型為2A 型，表明鋪地黍在進(jìn)化類型上可能屬于原始類型。

一種植物染色體的核型、數(shù)目是穩(wěn)定的，具有自我復(fù)制的能力，并且作為決定物種繁衍的遺傳物質(zhì)的載體[32]。但也有學(xué)者認(rèn)為，預(yù)處理、固定、酸解離或酶解離、普通壓片時(shí)對(duì)材料施加的外力等各個(gè)環(huán)節(jié)的掌握不同會(huì)導(dǎo)致染色體伸長(zhǎng)或縮短的程度不同，并且在測(cè)量時(shí)由于著絲點(diǎn)的位置辨認(rèn)不清也可能導(dǎo)致長(zhǎng)臂與短臂的測(cè)量結(jié)果不準(zhǔn)確；染色體本身結(jié)構(gòu)的差異可能導(dǎo)致同一條染色體有的部位染色深，有的部位染色淺，這些都有可能致使染色體核型出現(xiàn)差異[8]。另外，雖然有些植物對(duì)重金屬具有一定的耐受性，但當(dāng)環(huán)境中重金屬離子超過(guò)臨界值時(shí)，就會(huì)對(duì)植物的生理生化特性產(chǎn)生很大影響；在自然條件或人工因素的重金屬影響下，可能導(dǎo)致染色體變異或DNA 的損傷，染色體變異表現(xiàn)為，一些染色體的數(shù)目增加或減少，一些染色體會(huì)出現(xiàn)斷裂，然后會(huì)再一次的異常連接等[33-34]。在本研究中，也發(fā)現(xiàn)鋪地黍根尖的臨時(shí)裝片在顯微鏡下觀察時(shí)有時(shí)出現(xiàn)大小差異；在幾組核型參數(shù)中也發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)上存在差異，本研究中所使用的鋪地黍材料長(zhǎng)期在大寶山重金屬尾礦地生長(zhǎng)，其生長(zhǎng)條件[35]是否對(duì)其有影響，有待于進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

鋪地黍染色體制片的優(yōu)化條件為:冰水混合物4℃預(yù)處理2 2 h，卡諾氏固定液Ⅰ4℃固定2 4 h，0.075mo l·L?1KCl 溶液25℃前低滲15～20m in，用1%果膠酶和2%纖維素酶混合酶液25℃酶解3 h效果最佳。鋪地黍核型公式為2n=2 x=4 0=3 4m+6sm，未發(fā)現(xiàn)有隨體，屬于大型染色體；核型不對(duì)稱系數(shù)為58.99%，核型類型屬于2A 型，在進(jìn)化類型上可能屬于原始類型。