ICP-MS法測(cè)定不同產(chǎn)地藤茶中無(wú)機(jī)元素的含量

陳 強(qiáng)，蘇藝萍，徐 偉，李 煌，褚克丹，黃近丹，沙 玫*，林珠燦*

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州350122；2.福建省測(cè)試技術(shù)研究所，福建 福州350003）

藤茶，原植物為葡萄科（Vitaceae）蛇葡萄屬Ampelopsis Michx.的顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata（Hand-Mazz）W.T.Wang［1］，又名甜茶、龍須茶、白茶、霉茶等，主要分布于我國(guó)湖南、湖北、廣西、福建等長(zhǎng)江以南地區(qū)，是近年來(lái)研究較多的藥食兩用植物資源之一?，F(xiàn)代研究表明：藤茶的主要藥效成分為黃酮類化合物，如二氫楊梅素、楊梅素、沒(méi)食子酸等，具有抗炎、抗腫瘤、降血糖等藥理作用［2-4］。目前對(duì)藤茶的研究主要集中在藤茶中黃酮類成分的提取、分離、純化［5-6］以及藥理作用［7-8］等方面，對(duì)于藤茶的質(zhì)量控制主要是對(duì)黃酮類成分的控制［9］，評(píng)價(jià)指標(biāo)比較單一，不能完全反映藤茶的質(zhì)量?jī)?yōu)劣，對(duì)于藤茶中無(wú)機(jī)元素的測(cè)定也未見(jiàn)有報(bào)道。中藥中的無(wú)機(jī)元素對(duì)中藥的藥效有一定的影響，而有些重金屬如果超出限量范圍會(huì)影響中藥的用藥安全。因此，對(duì)中藥中的無(wú)機(jī)元素和重金屬元素進(jìn)行分析可為保證中藥的藥效及用藥安全提供更多的依據(jù)［10］。本實(shí)驗(yàn)采用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）方法對(duì)7個(gè)產(chǎn)地的藤茶中17種無(wú)機(jī)元素進(jìn)行測(cè)定，樣品來(lái)源涵蓋我國(guó)藤茶主要產(chǎn)地，可反映我國(guó)不同主產(chǎn)地藤茶無(wú)機(jī)元素含量的基本情況，其結(jié)果可為藤茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立與質(zhì)量控制、安全性評(píng)價(jià)以及資源的綜合開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材 料

1.1 儀器Nexion 2000電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（上海珀金埃爾默儀器有限公司）；ME204E電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；DHG-9246A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；ETHOS One型微波消解儀（美國(guó)CEM公司）。

1.2 試藥汞（Hg，批號(hào)：GBW€080124）、砷［As，批號(hào)：CBW（E）080117］標(biāo)準(zhǔn)溶液購(gòu)自中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院；鋇（Ba，批號(hào)：BWB2128-2016）、鍶（Sr，批號(hào)：BWB2155-2016）標(biāo)準(zhǔn)溶液購(gòu)自北京北方偉業(yè)計(jì)量技術(shù)研究院；鈣［Ca，批號(hào)：GSBG62012-90（2001）］、鉀［K，批號(hào)：GSBG62011-90（1901）］、鋅［Zn，批號(hào)：GSBG62025-90（3001）］、鎂［Mg，批號(hào)：GSBG62025-90（1201）］標(biāo)準(zhǔn)溶液購(gòu)自國(guó)家鋼鐵材料測(cè)試中心鋼鐵研究總院；鈷（Cd，批號(hào)：GSB04-1721-2004）、鉻［Cr，批 號(hào)：GSB04-1723-2004（a）］、銅（Cu，批 號(hào)：GSB04-1725-2004）、鐵（Fe，批 號(hào)：GSB04-1726-2004）、錳（Mn，批號(hào)：GSB04-1736-2004）、鈉（Na，批號(hào)：GSB04-1738-2004）、磷（P，批號(hào)：GSB04-1741-2004a）、鉛（Pb，批號(hào)：GSB04-1742-2004）、硒（Se，批號(hào)：GSB04-1751-2004）標(biāo)準(zhǔn)溶液購(gòu)自國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心。以上標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度均為1 000μg/mL。硝酸（分析純，批號(hào)：20180911，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。藤茶購(gòu)于不同產(chǎn)地，藤茶產(chǎn)地信息見(jiàn)表1。

表1 藤茶產(chǎn)地信息

藤茶樣品經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院黃澤豪副教授鑒定為葡萄科蛇葡萄屬顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata（Hand-Mazz）W.T.Wang的嫩莖葉。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液制備 將不同產(chǎn)地的藤茶樣品粉碎成粉狀，精密稱取0.2 g樣品于消解管內(nèi)，加入5 mL硝酸，擰緊消解管，于微波消解儀消解，取出冷卻后轉(zhuǎn)移消化液于容量瓶中并定容至50 mL，再稀釋100倍，供ICP-MS上機(jī)測(cè)定用。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液制備 精密量取多元素（16種，Hg除外）標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用5%硝酸溶液稀釋成每1 mL含16種無(wú)機(jī)元素1μg的混合標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液；另取Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2%硝酸溶液稀釋成每1 mL含Hg 1μg的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備 精密量取上述16種無(wú)機(jī)元素混合標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液適量，加5%硝酸溶液分別制成5、10、50、200、500 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取上述Hg標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液適量，加5%硝酸溶液稀釋成0.5、2、5、10、15 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.4 ICP-MS儀器設(shè)定參數(shù) 見(jiàn)表2。

表2 ICP-MS儀器設(shè)定參數(shù)

2.5 方法學(xué)驗(yàn)證

2.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 按“2.4”項(xiàng)下儀器設(shè)定參數(shù)對(duì)5個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x），待測(cè)元素分析峰信號(hào)值為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得各元素標(biāo)準(zhǔn)溶液的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各元素線性回歸方程

2.5.2 精密度試驗(yàn) 吸取各標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣6次，分別計(jì)算17種無(wú)機(jī)元素峰強(qiáng)度的RSD，結(jié)果見(jiàn)表4，RSD為0.95%～2.01%，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，每隔0.5 h測(cè)定1次，重復(fù)6次，分別計(jì)算17種無(wú)機(jī)元素峰強(qiáng)度的RSD，結(jié)果見(jiàn)表4。RSD為0.95%～1.92%，結(jié)果表明供試品溶液在3 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一供試品溶液6份，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4”項(xiàng)下儀器設(shè)定參數(shù)測(cè)定，計(jì)算各元素的含量RSD，結(jié)果見(jiàn)表4。RSD為0.98%～1.89%，結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 稱取樣品（湖北恩施）6份，每份0.2 g，分別精密加入約相當(dāng)于樣品中17種元素含量100%的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4”項(xiàng)下儀器設(shè)定參數(shù)測(cè)定，計(jì)算各元素平均加樣回收率以及RSD，結(jié)果見(jiàn)表4。平均加樣回收率為95.89%～104.77%，RSD為0.99%～2.52%。

2.6 樣品測(cè)定 取不同產(chǎn)地的藤茶樣品，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4”項(xiàng)下儀器設(shè)定參數(shù)測(cè)定不同產(chǎn)地藤茶樣品中無(wú)機(jī)元素的含量，結(jié)果見(jiàn)表5～表7。

2.7 不同產(chǎn)地藤茶Fe、Zn、Se每日攝入量 對(duì)于Fe、Zn、Se三種元素，中國(guó)居民膳食營(yíng)養(yǎng)素推薦每日攝入量（RNI）分別為12～20、7.5～12.5、0.06 mg，中國(guó)居民膳食營(yíng)養(yǎng)素每日最高可耐受攝入量（UL）分別為42、40、4 mg［11］。

在湖南省中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（2009年版）中，藤茶每天的推薦劑量為15～30 g［12］，藤茶Fe、Zn、Se攝入量＝Fe、Zn、Se含量×藤茶每天推薦劑量。按照本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的Fe、Zn、Se含量計(jì)算出不同產(chǎn)地藤茶Fe、Zn、Se每日攝入量均低于RNI，更遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于UL，見(jiàn)表8。

表4 精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表5 不同產(chǎn)地藤茶樣品常量元素的含量mg/kg

表6 不同產(chǎn)地藤茶樣品微量元素的含量mg/kg

表7 不同產(chǎn)地藤茶樣品重金屬元素的含量mg/kg

表8 不同產(chǎn)地藤茶Fe、Zn、Se每日攝入量mg

3 討 論

7個(gè)產(chǎn)地藤茶樣品中的Fe、Mn、Se、Zn、Cr、Ni、Sr、Ca、Na、Mg、K、P的元素含量分別為74.933～426.996、204.455～1519.669、0.046～0.111、12.363～31.544、0.561～3.260、1.513～4.404、11.771～79.253、1 900.487～5 527.380、3.181～10.463、1 137.086～1 888.278、4 692.059～16 108.966、940.305～3 681.988 mg/kg。其中，K、Ca、P的含量相對(duì)較高，三者含量大小順序因產(chǎn)地不同而異：湖北、湖南、云南為K＞P＞Ca；江西、廣東、廣西為K＞Ca＞P；福建為Ca＞K＞P。其他元素的含量順序?yàn)镸g＞Mn＞Fe＞Sr＞Zn＞Na＞Ni＞Cr＞Se。研究結(jié)果顯示：藤茶中含有多種無(wú)機(jī)元素，可以有效補(bǔ)充人體所需的常量元素與微量元素；不同產(chǎn)地?zé)o機(jī)元素種類沒(méi)有明顯差異，但含量差異較大。這可能與不同地方的地理環(huán)境、溫度、濕度、土壤等因素有關(guān)。

此外，研究結(jié)果顯示：藤茶中的元素種類及含量豐富，含有諸多人體必需的微量元素，如Fe、Zn、Se等；7個(gè)藤茶主產(chǎn)地樣品中，福建產(chǎn)藤茶的Fe、Zn、Se元素的含量較高。

Fe是骨髓造血系統(tǒng)的主要原料；Zn存在于眾多酶系統(tǒng)中，是核酸、蛋白質(zhì)、碳水化合物合成的必需物質(zhì)，也是免疫器官胸腺發(fā)育的重要營(yíng)養(yǎng)素，具有促進(jìn)人體生長(zhǎng)發(fā)育、增強(qiáng)免疫、維持正常味覺(jué)、促進(jìn)傷口愈合、促進(jìn)維生素A的吸收與代謝等作用［13］；Se是谷胱甘肽過(guò)氧化酶（GSH-Px）組成成分，是重要的自由基清除劑，具有抗氧化、增強(qiáng)免疫、抗腫瘤、調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的合成、調(diào)節(jié)維生素的吸收與利用等重要生理作用［14］。7個(gè)產(chǎn)地藤茶中Fe、Zn、Se含量豐富，且不超過(guò)中國(guó)居民膳食營(yíng)養(yǎng)素最高可耐受攝入量。由表8數(shù)據(jù)可見(jiàn)，7個(gè)產(chǎn)地藤茶樣品中Fe、Zn、Se 3種微量元素含量均在推薦劑量范圍內(nèi)。2013年國(guó)家衛(wèi)健委已將藤茶（顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata（Hand-Mazz）W.T.Wang的嫩莖葉）列入新資源食品目錄，食用藤茶可為人體所需的Fe、Zn、Se提供有益的補(bǔ)充。

Pb、Cd、Hg、Cu、As在體內(nèi)蓄積至一定量時(shí)，可引起免疫系統(tǒng)障礙和多種生理功能損害，影響中藥用藥安全，屬于需要控制限量的重金屬元素。依照《中華人民共和國(guó)藥典（一部）》［15］（2015年版）以及《中國(guó)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》中對(duì)于中藥材以及中草藥的重金屬限量標(biāo)準(zhǔn)：重金屬總量不多于20 mg/kg，其中Cu元素不多于20.0 mg/kg，Pb元素不多于5.0 mg/kg，As元素不多于2.0 mg/kg，Cd元素不多于0.3 mg/kg，Hg元素不多于0.2 mg/kg。各產(chǎn)地藤茶樣品5種重金屬元素總含量均符合限量要求，湖北、江西、云南、廣東、福建、廣西藤茶樣品As、Cd、Cu、Hg、Pb含量均符合限量要求，湖南產(chǎn)地樣品Cd含量（0.325 mg/kg）略超限量要求（Cd≤0.3 mg/kg）。因此應(yīng)注意加強(qiáng)無(wú)害種植，保證藤茶的質(zhì)量問(wèn)題。

本實(shí)驗(yàn)首次建立了不同產(chǎn)地藤茶樣品中17種無(wú)機(jī)元素的ICP～MS測(cè)定方法，可為藤茶藥材標(biāo)準(zhǔn)建立、質(zhì)量控制、安全性評(píng)價(jià)以及資源綜合開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)的參考依據(jù)。