常山散效力試驗(yàn)用蟲(chóng)株的敏感性

郭志廷，王 玲，張景艷，王貴波，徐海城，劉 宏，李建喜，梁劍平

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蘭州畜牧與獸藥研究所 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 甘肅省中獸藥工程技術(shù)研究中心，甘肅 蘭州 730050；2.石家莊正道動(dòng)物藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 050200)

雞球蟲(chóng)病是由一種或多種艾美耳屬球蟲(chóng)寄生于雞腸道上皮細(xì)胞內(nèi)，引起腸道組織損傷和腸道正常機(jī)能降低，進(jìn)而誘發(fā)感染其他病原微生物。球蟲(chóng)病耐過(guò)雞表現(xiàn)為增重緩慢、飼料報(bào)酬率降低和生產(chǎn)性能下降，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1-2]。目前，化學(xué)合成藥物在球蟲(chóng)病的防治過(guò)程中發(fā)揮著非常重要的作用，但是隨著藥物長(zhǎng)期、不合理的使用，耐藥蟲(chóng)株不斷出現(xiàn)，迫切需要研發(fā)新型抗球蟲(chóng)藥物。由于化學(xué)合成藥物研發(fā)周期長(zhǎng)，前期投入巨大，而且隨著2020年1月國(guó)家減抗和替抗政策的實(shí)施，科研工作者逐漸將目光轉(zhuǎn)向中藥防治球蟲(chóng)病上。常山散是中藥常山提取物經(jīng)加工制得，前期試驗(yàn)已證實(shí)其具有較好的抗球蟲(chóng)效果和免疫增強(qiáng)活性，臨床擬用于雞球蟲(chóng)病的治療[3]。為進(jìn)一步驗(yàn)證常山散的抗球蟲(chóng)效果，在百球清為對(duì)照的臨床試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)效力試驗(yàn)用蟲(chóng)株再次以磺胺氯吡嗪鈉為對(duì)照進(jìn)行臨床試驗(yàn)，旨在驗(yàn)證常山散治療球蟲(chóng)的效果和效力試驗(yàn)用蟲(chóng)株的敏感性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物1日齡黃羽肉雞，購(gòu)自蘭州某雞苗供應(yīng)商，系為廣東智威農(nóng)業(yè)科技股份有限公司孵化并供應(yīng)甘肅市場(chǎng)的黃羽肉雞苗。雛雞飼養(yǎng)于無(wú)雞球蟲(chóng)污染籠舍內(nèi)，按肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 33-2004)飼養(yǎng)。飼料為肉雛雞全價(jià)料，不含任何抗球蟲(chóng)藥物，購(gòu)自蘭州養(yǎng)動(dòng)力飼料有限公司。

1.2 試驗(yàn)用藥常山散中試產(chǎn)品(100 g/袋，批號(hào)20140108，1 g本品相當(dāng)于常山原藥材10 g；主要有效成分是常山生物堿，含量1.5 %)，石家莊正道動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。常山散主要生產(chǎn)工藝：從中藥常山中提取得到常山提取物，干燥粉碎后，加入適量淀粉混勻即得(常山提取物和淀粉質(zhì)量比9∶1)。三字球蟲(chóng)粉(磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉，含量30%)為對(duì)照藥物，購(gòu)自重慶永健生物技術(shù)有限責(zé)任公司，按1 g/L飲水給藥。柔嫩艾美耳球蟲(chóng)廣東株，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所蔡建平團(tuán)隊(duì)保存和提供[4]。

1.3 動(dòng)物分組與處理雛雞飼養(yǎng)至14日齡，挑取精神狀態(tài)良好的雞隨機(jī)分組，20只/組，包括不攻蟲(chóng)不給藥組、攻蟲(chóng)不給藥組、三字球蟲(chóng)粉對(duì)照組和常山散推薦劑量組。除不攻蟲(chóng)不給藥組外，其余各組每只雞經(jīng)口感染6萬(wàn)個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)廣東株完全孢子化卵囊，分別于攻蟲(chóng)后24，72 h開(kāi)始給藥，連用6 d和4 d，試驗(yàn)期間觀察記錄因球蟲(chóng)病所致的雞死亡情況和血便情況等(表1)。

表1 動(dòng)物分組與處理

1.4 效果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)接種球蟲(chóng)后168 h，對(duì)每組存活雞進(jìn)行稱(chēng)體質(zhì)量后全部捕殺，收集各組雞盲腸，縱向剪開(kāi)后對(duì)每對(duì)盲腸按JOHNSON與REID(1970)的方法進(jìn)行病變計(jì)分[5]，并收集各組盲腸內(nèi)容物及黏膜上皮組織進(jìn)行盲腸卵囊量計(jì)數(shù)[6]。

根據(jù)各組試驗(yàn)雞的相對(duì)增重率、存活率、病變值和卵囊值，按美國(guó)Merck公司的計(jì)算公式計(jì)算抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI)[7]：ACI=(相對(duì)增重率+存活率)×100-(病變值+卵囊值)。

以ACI為標(biāo)準(zhǔn)判定其效果：ACI≤120為無(wú)效；ACI=120～160為低效；ACI=160～180為中效；ACI≥180為高效。

1.5 排除標(biāo)準(zhǔn)非球蟲(chóng)病引發(fā)的死亡：接種后1～3 d 內(nèi)的死雞，剖檢查看病變情況，對(duì)無(wú)球蟲(chóng)病特異性病變者予以排除，定義為非球蟲(chóng)病死亡；死亡可能由應(yīng)激、接種不當(dāng)?shù)纫蛩卦斐伞?/p>

2 結(jié)果

2.1 雞臨床癥狀、血便排出和盲腸病變情況與攻蟲(chóng)不給藥組比較，常山散各劑量組和三字球蟲(chóng)粉對(duì)照組連續(xù)給藥3 d以上，雞血便排出停止，雞精神狀態(tài)和飲食欲明顯好轉(zhuǎn)或基本恢復(fù)正常。剖檢發(fā)現(xiàn)所有給藥組雞盲腸病變明顯減輕，血樣內(nèi)容物明顯減少，其他臟器未見(jiàn)明顯的眼觀病變。不攻蟲(chóng)不給藥組雞臨床表現(xiàn)正常，剖解盲腸未發(fā)現(xiàn)腫脹和血液性?xún)?nèi)容物(圖1)。

2.2 抗球蟲(chóng)指數(shù)攻蟲(chóng)后24,72 h給藥，常山散組的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為163.04和161.67，三字球蟲(chóng)粉組的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為174.26和170.71，均明顯高于攻蟲(chóng)不給藥組(84.78和81.13)；2種藥物的抗球蟲(chóng)指數(shù)攻蟲(chóng)后24 h給藥高于攻蟲(chóng)后72 h給藥(表2)。

A.不攻蟲(chóng)不給藥；B,C.攻蟲(chóng)不給藥(a，b組)；D,E.常山散(a，b組)；F,G.三字球蟲(chóng)粉(a，b組)

表2 各種藥物的抗球蟲(chóng)指數(shù)(n=20)

3 討論

雞球蟲(chóng)病是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疾病。目前大型養(yǎng)雞場(chǎng)球蟲(chóng)病的發(fā)病率居高不下，大多數(shù)養(yǎng)雞場(chǎng)不同程度都存在球蟲(chóng)感染。研究表明，全球每年抗球蟲(chóng)藥物消費(fèi)高達(dá)33億美元，球蟲(chóng)病不僅大幅增加養(yǎng)殖成本，而且容易造成藥物濫用、抗生素殘留、食品質(zhì)量安全下降等諸多問(wèn)題[8-10]。中藥在防治球蟲(chóng)病中因資源豐富、療效確切、毒副作用小等特點(diǎn)，具有廣闊的應(yīng)用開(kāi)發(fā)前景。

中藥常山具有良好的驅(qū)蟲(chóng)殺蟲(chóng)功效，早在我國(guó)古代醫(yī)學(xué)論《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載。常山生物堿是常山中的主要有效活性成分之一，包括常山甲素和常山乙素。最新研究發(fā)現(xiàn)，常山生物堿還具有良好的抗腫瘤、抗球蟲(chóng)、抗瘢痕等藥理活性[11]。前期以百球清為對(duì)照的臨床試驗(yàn)表明，常山散按1倍和2倍推薦劑量給藥，抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為162.0和157.9，達(dá)到中等抗球蟲(chóng)水平；由于常山散1倍和2倍推薦劑量組試驗(yàn)雞的相對(duì)增重率(117.7%和104.2%)高于百球清對(duì)照組(96.9%)，致其抗球蟲(chóng)指數(shù)稍高于百球清對(duì)照組(154.4)，但從病變值和卵囊值考察，百球清的抗球蟲(chóng)效果優(yōu)于常山散。

柔嫩艾美耳球蟲(chóng)是7種雞球蟲(chóng)中致病力最強(qiáng)的一種，主要侵害雞盲腸，發(fā)育史包括孢子生殖、裂殖生殖和配子生殖等3個(gè)階段。第二代裂殖生殖期是對(duì)雞危害最為嚴(yán)重的階段，產(chǎn)生的大量裂殖子重新入侵未感染的腸道上皮細(xì)胞，臨床上表現(xiàn)為雞腸道黏膜組織嚴(yán)重破壞、排出血便、消化和吸收功能下降，甚至死亡[12-13]。本試驗(yàn)中以三字球蟲(chóng)粉為對(duì)照，從攻蟲(chóng)后24 h(球蟲(chóng)入侵)和72 h(裂殖發(fā)育)給藥，進(jìn)一步考察常山散的抗球蟲(chóng)效果以及效力試驗(yàn)用蟲(chóng)株的敏感性。結(jié)果顯示，攻蟲(chóng)后24,72 h給藥常山散的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為163.04和161.67，三字球蟲(chóng)粉的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為174.26和170.71，均明顯高于攻蟲(chóng)不給藥組(84.78和81.13)?？骨蛳x(chóng)指數(shù)攻蟲(chóng)后24 h給藥高于攻蟲(chóng)后72 h給藥，說(shuō)明早期給藥抗球蟲(chóng)效果更好。攻蟲(chóng)后，三字球蟲(chóng)粉的抗球蟲(chóng)指數(shù)達(dá)到170以上，說(shuō)明試驗(yàn)所用的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(廣東株)的藥物敏感性較好。另外，以三字球蟲(chóng)粉為對(duì)照和百球清為對(duì)照的臨床試驗(yàn)中，常山散抗球蟲(chóng)指數(shù)基本相近(160左右)，驗(yàn)證了常山散抗球蟲(chóng)效果比較確切。綜上，常山散作為純中藥制劑，具有較好的抗球蟲(chóng)效果。