SPE-HPLC同時測蔬菜中6種農(nóng)藥殘留

安智慧，田清良，羅 珊

（西藏農(nóng)牧學(xué)院，西藏林芝 860000）

0 引言

隨著社會的發(fā)展，人們的生活水平在提高，對蔬菜的質(zhì)量要求也越來越高。在日常生活中，由于蔬菜農(nóng)藥殘留問題引起中毒事件時有發(fā)生，對人們的身體健康造成了一定影響，所以建立完善的蔬菜農(nóng)藥殘留檢測方法已成為了刻不容緩的任務(wù)[1]。農(nóng)藥殘留檢測，需要將蔬菜水果上低濃度的農(nóng)藥提取分離，進(jìn)而定性、定量。通常需要將樣品進(jìn)行前處理，制樣、提取、提純、分離等過程，提取和提純起著關(guān)鍵性作用，SPE是比較常用的農(nóng)藥殘留純化的方法[2]，固相萃取能夠簡化樣品前處理，重復(fù)性好，節(jié)約實驗人員的時間和勞動強(qiáng)度[3-4]。試驗建立利用固相萃取-高效液法相同時檢測大棚種22種蔬菜中吡蟲啉、多菌靈、甲基硫菌靈、除蟲脲、滅幼脲、氟啶脲6種農(nóng)藥殘留的方法，有效縮短了前處理時間，又有效地避免了樣品中農(nóng)藥殘留量的損耗，結(jié)果表明，該方法前處理簡單、快捷、靈敏度高檢測結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點[5-6]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：高效液相色譜儀（Agilent 1260）；勻漿機(jī)（FSH-2A，常州金壇良友儀器有限公司）；震蕩器（HY-4，江蘇科析儀器有限公司）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（A1901230，金壇市盛藍(lán)儀器制造有限公司）；試劑：乙腈（HPLC色譜純試劑，天津益仁達(dá)化學(xué)試劑廠）；甲醇（Honeywell）；二氯甲烷、丙酮、氯化鈉為分析純（津益仁達(dá)化學(xué)試劑廠）；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（吡蟲啉、多菌靈、甲基硫菌靈、除蟲脲、滅幼脲、氟啶脲，北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院），氨基柱（500 mg/mL），22種蔬菜為林芝市巴宜區(qū)大棚中采摘。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品溶液制備。準(zhǔn)確稱取25.0 g蔬菜樣品于錐形瓶中，并加入50 mL乙腈溶液，高速勻漿2 min，震蕩儀震蕩40 min后過濾，向濾液中加入7 g氯化鈉劇烈搖晃后靜待分層。取上層清液10 mL，水浴鍋蒸干有機(jī)溶劑，用3 mL二氯甲烷：甲醇（95：3）溶液溶解，蓋上鋁箔待用，取2 mL混合液淋洗氨基柱，待頁面達(dá)到吸附層表面時立即加入帶凈化液，用3 mL混合液洗滌燒杯并淋洗氨基柱，重復(fù)1次，再用4 mL混合液洗滌燒杯并將洗滌液倒入SPE柱。將上述洗脫液在65℃條件下水浴蒸近干，用甲醇定容至5 mL并搖勻，過0.22 um濾膜后裝入樣品瓶。

1.2.2 液相色譜條件的建立。色譜柱：Agilent C18-Ether（4.6 mm×250 mm，5 um）；流動相A為水、B為甲醇；柱溫40℃；進(jìn)樣量：10 μl/min；梯度洗脫，梯度洗脫條件見表1；內(nèi)標(biāo)法測定。

表1 梯度洗脫條件

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。分別量取10 ug/mL的吡蟲啉、多菌靈等6種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，逐級稀釋成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按步驟1.2.2的色譜條件進(jìn)行測定，以標(biāo)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出線性回歸方程。

圖1 0.5 ng/uL混標(biāo)圖譜

1.2.4 回收率與精密度實驗。稱取一種蔬菜空白樣25g，向樣品中添加吡蟲啉、多菌靈等6種標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ng/μL，樣品處理按1.2.1步驟完成，檢測按1.2.2液相條件進(jìn)行，重復(fù)5次，測得的圖譜見圖1。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

6種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，各化合物定量離子峰面積與濃度呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2＞0.996。以3倍信噪比計算出6種農(nóng)藥的檢出限，以10倍信噪比計算出6種農(nóng)藥的定量限[7]，6種農(nóng)藥的檢出限為0.01～0.05 ng/μL。此方法可用于大部分蔬菜中6種農(nóng)藥的定性定量分析。見表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性

2.2 精密度與回收試驗

稱取1份蔬菜空白樣25 g進(jìn)行加標(biāo)回收實驗，添加混標(biāo)濃度為0.5 ng/μL，平行試驗5次，得到回收率與精密度，見表3。根據(jù)表中結(jié)果可知，該方法的回收率在77.2%～116.8%，RSD在2.431%～18.98%，該方法的精密度和準(zhǔn)確度良好，能夠用該方法同時測吡蟲啉等6種農(nóng)藥。

表3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性

3 結(jié)語

實驗建立了用SPE固相萃取法結(jié)合高效液相法檢測了吡蟲啉、多菌靈、甲基硫菌靈、除蟲脲、滅幼脲、氟啶脲6種農(nóng)藥的檢測方法，甲醇-水梯度洗脫，從6種農(nóng)藥的線性曲線、檢出限、回收率、重復(fù)率結(jié)果表明，該方法前處理簡單、分離度好、靈敏度高、線性范圍廣、檢測精準(zhǔn)。該方法適用于大部分蔬菜中這6種農(nóng)藥的同時測定。