miRNA-126、miRNA-26a在食管癌中的表達(dá)及與患者臨床特征的關(guān)系分析

賀紅柳，崔美英，王豐

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，鄭州 450052

食管癌是全球惡性程度最高的六大腫瘤之一，幾十年來(lái)，食管癌的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)不斷上升，病死率居第六位。同時(shí)中國(guó)是全球食管癌發(fā)病率和病死率最高的國(guó)家，據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國(guó)每年大約有221萬(wàn)人死于該病，流行病學(xué)顯示中國(guó)農(nóng)村地區(qū)食管癌的發(fā)病率是城鎮(zhèn)地區(qū)的2～10倍，城鄉(xiāng)分布不均勻，且具有明顯的家族聚集現(xiàn)象，一般表現(xiàn)為家族多個(gè)成員患有食管癌。目前，食管癌的發(fā)病原因并未完全明確，可能與肥胖、吸煙、飲酒、飲食習(xí)慣等危險(xiǎn)因素有關(guān)。手術(shù)切除術(shù)、內(nèi)鏡切除術(shù)和放化療均為主要治療手段，但療效均不盡人意，患者5年生存率較低，僅為15%左右。由于食管癌早期癥狀表現(xiàn)不明顯，早期篩查手段效果有限，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已為疾病中晚期，喪失了最佳治療時(shí)機(jī)，因此尋找有效的食管癌生物標(biāo)志物具有重要臨床意義。miRNA在正常細(xì)胞的發(fā)育、分化、凋亡及調(diào)控靶mRNA的表達(dá)中有重要作用，同時(shí)也在腫瘤發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移和化療中有一定的作用，miRNA的組織特異性和疾病特異性表達(dá)可作為腫瘤診斷、預(yù)測(cè)和治療的研究基礎(chǔ)。本研究通過(guò)分析miRNA-126、miRNA-26a在食管癌中的表達(dá)及其與患者臨床特征的關(guān)系，以期為臨床診治提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年1月至2016年3月于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院行食管癌手術(shù)切除患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《食管癌臨床多學(xué)科綜合診斷與鑒別診斷》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)手術(shù)病理檢查確診；②采用手術(shù)切除治療，且術(shù)前未接受過(guò)相關(guān)治療；③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他類型腫瘤；②合并自身免疫性疾病和腎臟損傷。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入113例食管癌患者，其中男59例，女54例；年齡37～79歲，平均（59.12±4.79）歲；腫瘤部位：食管上段23例，中段54例，下段36例；病變長(zhǎng)度：≥3 cm 94例，＜3 cm 19例；分化程度：高分化19例，中低分化94例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期43例，Ⅲ～Ⅳ期70例；浸潤(rùn)深度：黏膜層～肌層74例，肌層以外39例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移61例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52例。收集113例患者的食管癌組織和癌旁組織各113例。

1.2 檢測(cè)方法

檢測(cè)所有患者血清miRNA-126、miRNA-26a的表達(dá)水平。所有患者禁食12 h以上，采集清晨空腹靜脈血4 ml，經(jīng)過(guò)離心處理取上清液置于-80℃冰箱保存。采用定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）法檢測(cè)患者血清miRNA-126、miRNA-26a的相對(duì)表達(dá)量。提取總RNA，使用miRNA qRT-PCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)行miRNA的逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，輕柔混勻qPCR預(yù)混液短暫離心，將預(yù)混液分別加入PCR八連管中，確保其集中于PCR八連管底部，使用定量PCR儀，設(shè)置PCR程序并進(jìn)行定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束收集數(shù)據(jù)，對(duì)數(shù)據(jù)Ct值進(jìn)行分析，采用2計(jì)算血清miRNA-126、miRNA-26a的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 miRNA-126、miRNA-26a相對(duì)表達(dá)量的比較

食管癌組織中miRNA-126和miRNA-26a相對(duì)表達(dá)量均明顯低于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.01）（表1）。ROC曲線分析結(jié)果顯示，當(dāng)約登指數(shù)最大時(shí)，對(duì)應(yīng)的miRNA-126和miRNA-26a為0.92和2.03，可作為診斷食管癌的臨界值（圖1）。miRNA-126和miRNA-26a在食管癌組織中的表達(dá)水平呈正相關(guān)（

r

=0.757，

P

＜0.01）。

表1 食管癌組織和癌旁組織中miRNA-126、miRNA-26a相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

圖1 miRNA-126、miRNA-26a診斷食管癌的ROC曲線

2.2 不同臨床特征食管癌患者中miRNA-126和miRNA-26a表達(dá)情況的比較

不同性別、年齡、腫瘤部位、病變長(zhǎng)度和浸潤(rùn)深度的食管癌患者中miRNA-126和miRNA-26a表達(dá)情況比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）；不同分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的食管癌患者中miRNA-126和miRNA-26a表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.01）。（表2）

表2 不同臨床特征食管癌患者中miRNA-126和miRNA-26a表達(dá)情況的比較（n=113）

3 討論

食管癌是一類常見(jiàn)的消化系統(tǒng)疾病，世界范圍內(nèi)每年約有48萬(wàn)新發(fā)病例，死亡人數(shù)可達(dá)40多萬(wàn)，中國(guó)食管癌每年新增人數(shù)達(dá)15萬(wàn)以上，發(fā)病率僅次于肺癌、胃癌和肝癌。其發(fā)病原因復(fù)雜，與飲食習(xí)慣、感染、食管反流病、遺傳、吸煙、喝酒等均有一定關(guān)聯(lián)。由于食管癌早期無(wú)明顯表現(xiàn)，當(dāng)患者出現(xiàn)胸痛、吞咽困難等臨床癥狀時(shí)，病情已發(fā)展至中晚期，致使食管癌患者5年生存率較低?，F(xiàn)代分子生物學(xué)認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生是多基因共同作用的結(jié)果，癌性基因過(guò)度表達(dá)和抑癌基因表達(dá)減弱、細(xì)胞增殖增強(qiáng)和凋亡減少等都在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用。探究食管癌的生物學(xué)機(jī)制和基因表達(dá)對(duì)其診斷和治療均有重要臨床意義。許多研究證實(shí)miRNA參與到人類腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中，miRNA的具體作用機(jī)制尚未完全明確，目前認(rèn)為主要與以下兩個(gè)方面因素有關(guān)：①某些miRNA可能為人類潛在的原癌基因或抑癌基因；②miRNA可能為調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、分化和凋亡提供了有利因素。血清miRNA的表達(dá)均可通過(guò)qRT-PCR技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，血清miRNA水平的表達(dá)也可為腫瘤的診斷、治療提供新思路。

本研究中，miRNA-126和miRNA-26a在食管癌組織中均呈低表達(dá)，miRNA-126和miRNA-26a的表達(dá)情況與食管癌分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，miRNA-126和miRNA-26a在食管癌組織中的表達(dá)水平呈正相關(guān)，提示miRNA-126和miRNA-26a在食管癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要調(diào)控作用。相關(guān)研究表明，miRNA-126在消化系統(tǒng)中發(fā)揮著抑癌基因的重要作用，當(dāng)miRNA-126呈低表達(dá)，血管內(nèi)皮黏附因子水平升高，參與新生血管形成，促使腫瘤細(xì)胞增殖。有研究發(fā)現(xiàn)，恢復(fù)miRNA-126的表達(dá)降低了乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖時(shí)間，表明miRNA-126低表達(dá)可加快腫瘤發(fā)展。miRNA-26a是血管平滑肌功能和新內(nèi)膜增生的重要調(diào)節(jié)因子，不僅可以調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的功能，同時(shí)對(duì)血管平滑肌細(xì)胞也具有明顯靶向調(diào)節(jié)作用，miRNA-26a的上調(diào)可抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移。此外，還有研究發(fā)現(xiàn)miRNA-26a與腫瘤細(xì)胞的增長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移也有一定的聯(lián)系，但有關(guān)miRNA-26a表達(dá)水平與食管癌的相關(guān)研究并不多見(jiàn)，本研究中發(fā)現(xiàn)，食管癌分化程度越低、病理分期越晚、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，血清miRNA-26a的表達(dá)水平越低，因此miRNA-26a可作為食管癌患者預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。綜上所述，miRNA-126和miRNA-26a在食管癌中均呈低表達(dá)，且與腫瘤分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有緊密聯(lián)系，這為食管癌的發(fā)生機(jī)制和診治提供了新思路。