中藥治療不孕癥方劑核心藥組挖掘及其分子作用機(jī)制研究?

孫占東，劉 嘉，曾慶琪

(江蘇衛(wèi)生健康職業(yè)學(xué)院，南京 211800)

不孕癥作為一種婦科常見的疑難病種，是目前臨床醫(yī)學(xué)關(guān)注的熱點(diǎn)，世界衛(wèi)生組織(WHO)已將其列為影響人類生活和健康的三大主要疾病之一[1]。中醫(yī)自古就對(duì)不孕癥有著深入的研究與認(rèn)識(shí)，在治療不孕癥方面可謂內(nèi)容豐富、效果顯著[2]。多部經(jīng)典中醫(yī)古籍，如《黃帝內(nèi)經(jīng)》《諸病源候論》《千金要方》等就有提及“無子”“全不產(chǎn)”“斷緒”病證，且中醫(yī)研究依據(jù)不孕癥的病因、病機(jī)、證候逐步形成了辨證論治思想[3-4]。中藥方劑作為一種中醫(yī)臨床治療疾病的基本方式，是由多種藥物組合、作用形成的一個(gè)復(fù)雜的“方劑-機(jī)體”藥效體系，具有多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多層次的藥理學(xué)作用特點(diǎn)[5]。大量的中藥方劑已被古今中醫(yī)應(yīng)用于臨床實(shí)踐，但目前尚缺乏從系統(tǒng)整體角度對(duì)不孕癥方劑的組方用藥規(guī)律、核心藥物、藥物化學(xué)成分、靶標(biāo)及作用機(jī)制的發(fā)現(xiàn)、辨識(shí)和分析研究。本研究從“疾病-方劑中藥-化學(xué)成分-靶點(diǎn)-基因功能”角度, 以數(shù)據(jù)挖掘、網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建、富集分析等為手段，探究中藥治療不孕癥方劑的核心藥物、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其可能的分子作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方劑來源于《中醫(yī)方劑大辭典》[6]、方劑現(xiàn)代應(yīng)用數(shù)據(jù)庫(國家人口與健康科學(xué)數(shù)據(jù)共享服務(wù)平臺(tái))、《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》(簡(jiǎn)稱《中藥成方制劑》)，分別以“不孕”“無子”“斷續(xù)”“全不產(chǎn)”等關(guān)鍵詞對(duì)上述數(shù)據(jù)庫及典籍進(jìn)行檢索，獲得初始方劑檢索數(shù)據(jù)。對(duì)初始數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選，在方劑主治功效中，應(yīng)明確提及至少1個(gè)檢索關(guān)鍵詞。對(duì)存在以下情況的方劑進(jìn)行排除：?jiǎn)挝吨兴幓蚪M成不完整；外用方劑；同一方劑在不同數(shù)據(jù)庫中重復(fù)，僅取其一；方劑中藥組成相同、名稱不同，僅取其一。其余方劑全部作為標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)進(jìn)行納入，構(gòu)建不孕癥方劑數(shù)據(jù)集。

1.2 方法

1.2.1 中藥治療不孕癥方劑核心藥組挖掘 利用由中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所研發(fā)的“中醫(yī)傳承輔助系統(tǒng)”(V2.5)[7]進(jìn)行中藥治療不孕癥方劑的核心藥組挖掘。將獲得的不孕癥方劑數(shù)據(jù)集錄入中醫(yī)傳承輔助系統(tǒng) (V2.5)。同時(shí)，以2015年版《中國藥典》[8]為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)不同炮制方式、不同地域、異名同藥的中藥，進(jìn)行統(tǒng)一規(guī)范化預(yù)處理，統(tǒng)一為標(biāo)準(zhǔn)同一中藥名稱收錄。如“元芪”“黃耆”等統(tǒng)一為“黃芪”，“薯蕷”“炒山藥”等統(tǒng)一為“山藥”。數(shù)據(jù)的錄入由雙人完成，以確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。利用軟件中的“統(tǒng)計(jì)報(bào)表” “數(shù)據(jù)分析”模塊功能對(duì)錄入的方劑數(shù)據(jù)進(jìn)行用藥規(guī)律分析，內(nèi)容包括藥物頻次統(tǒng)計(jì)、藥組模式等。對(duì)于核心藥組的提取，是將用藥頻次大于20%(單味藥物在方劑中出現(xiàn)的次數(shù)超過總方劑數(shù)的20%)與藥組頻次大于20%(藥組在方劑中出現(xiàn)的次數(shù)超過總方劑數(shù)的20%)所共有的中藥作為中藥治療不孕癥方劑核心藥組。單味用藥頻次的獲取過程，應(yīng)用“統(tǒng)計(jì)報(bào)表”中的藥物頻次統(tǒng)計(jì)，可一鍵化獲得各味中藥的用藥頻次，選取次數(shù)大于總方劑數(shù)×20%的藥物；對(duì)于藥組頻次的統(tǒng)計(jì)，是應(yīng)用數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)中的組方分析功能，基于關(guān)聯(lián)規(guī)則算法，將設(shè)置“支持度個(gè)數(shù)”(總方劑數(shù)×20%)獲得計(jì)算結(jié)果。

1.2.2 中藥治療不孕癥方劑核心藥組化學(xué)成分與靶點(diǎn)蛋白數(shù)據(jù)的收集 TCMSP(http:∥lsp.nwu.edu.cn/index.php)[9]是中草藥系統(tǒng)藥理學(xué)平臺(tái)，包含中國藥典注冊(cè)的499種中藥，可獲取中藥的化合物、靶點(diǎn)和藥物靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)等信息。將獲得的核心藥組數(shù)據(jù)分別輸入到該平臺(tái)中，獲取每味藥的化合物、靶點(diǎn)蛋白數(shù)據(jù)。將某味中藥名稱輸入平臺(tái)后，首先應(yīng)用平臺(tái)中的藥物ADME性質(zhì)進(jìn)行藥物有效成藥化合物的篩選，根據(jù)TCMSP中ADME性質(zhì)建議篩選標(biāo)準(zhǔn)，將藥物口服生物利用率(OB)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置為≥30%、類藥性(DL)標(biāo)準(zhǔn)為≥0.18，獲得該味中藥的有效成藥化合物；其次，利用平臺(tái)Related Targets板塊中的篩選功能，獲取該味中藥所有有效成藥化合物的靶點(diǎn)蛋白數(shù)據(jù)；最后，對(duì)于每味藥物的化合物-靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)信息，選取來源于DrugBank中記錄的數(shù)據(jù)。

1.2.3 利用UniProt查詢靶點(diǎn)蛋白編碼基因 對(duì)從TCMSP中獲取每味中藥的靶點(diǎn)蛋白，在UniProt數(shù)據(jù)庫中獲得相應(yīng)的編碼基因。UniProt(https:∥www.uniprot.org/)[10]是目前信息最豐富、資源最廣的免費(fèi)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫。在網(wǎng)站檢索框輸入“organism:‘Homo sapiens ’(Human) [9606]”，可下載獲得人類蛋白名稱信息、蛋白編碼基因名稱數(shù)據(jù)集，如Protein names(Alcohol dehydrogenase 1B)，Gene name(ADH1B)。利用數(shù)據(jù)集，分別獲得每味中藥的靶點(diǎn)蛋白編碼基因集。

1.2.4 構(gòu)建核心藥組藥物作用靶點(diǎn)共有編碼基因集的蛋白互作網(wǎng)絡(luò) 獲取核心藥組每味藥物的靶點(diǎn)蛋白編碼基因集后，對(duì)各個(gè)藥物所共同作用的基因進(jìn)行提取。利用Cytoscape 3.4軟件繪制不孕癥核心藥組藥物與共同作用靶點(diǎn)基因網(wǎng)絡(luò)圖。利用BioGRID(https:∥thebiogrid.org/)[11]構(gòu)建核心藥組共有基因集的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)。BioGRID數(shù)據(jù)庫是一個(gè)經(jīng)典的蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)庫，截止2019年1月，共包含人類23291個(gè)基因間的361468個(gè)相互作用關(guān)系。

1.2.5 基因富集分析 基因的富集分析可揭示生物分子作用機(jī)制。利用DAVID(https:∥david.ncifcrf.gov/)[12]數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行Gene Ontology、KEGG生物通路、Tissue expression分析，對(duì)于所得結(jié)果當(dāng)P<0.05時(shí)，富集結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。將核心藥組靶點(diǎn)蛋白編碼基因集輸入DAVID數(shù)據(jù)庫進(jìn)行Gene Ontology分析與KEGG生物通路，通過該項(xiàng)分析可以找出在統(tǒng)計(jì)上顯著富集的GO條目、生物通路，尋找可能的基因功能以及獲取代謝、遺傳信息、細(xì)胞過程、藥物分子間的相互作用等信息。將核心藥組藥物共有基因集的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)所包含的全部基因，輸入DAVID數(shù)據(jù)庫進(jìn)行Tissue_Expression組織表達(dá)分析(選取 UP_TISSUE模塊)，該分析可對(duì)基因進(jìn)行組織表達(dá)位置的鑒定。

2 結(jié)果

2.1 中藥治療不孕癥方劑單味藥用藥頻率統(tǒng)計(jì)

嚴(yán)格依據(jù)方劑篩選與數(shù)據(jù)錄入條件，分別收錄《中醫(yī)方劑大辭典》方劑265首，方劑現(xiàn)代應(yīng)用數(shù)據(jù)庫13首，《中藥成方制劑》18首，共計(jì)296首中藥治療不孕癥方劑，包含335味中藥。對(duì)各味中藥在方劑中出現(xiàn)的頻率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，提取頻率大于20%的藥材從高至低進(jìn)行列出，分別為當(dāng)歸(60.81%)、川芎(47.30%)、熟地黃(40.20%)、白芍(40.20%)、茯苓(39.19%)、人參(37.16%)、甘草(29.73%)、香附(29.39%)、白術(shù)(27.03%)、牛膝(23.99%)、肉桂(23.65%)、生地黃(22.97%)、生姜(20.27%)。

2.2 中藥治療不孕癥方劑藥物組合模式統(tǒng)計(jì)

表1示，應(yīng)用中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)中的組方分析功能，基于軟件的關(guān)聯(lián)規(guī)則算法，將“支持度個(gè)數(shù)”設(shè)置為60，即提取在全部方劑中出現(xiàn)占比至少為20%的藥物組合。

表1 治療不孕癥方劑的藥物組合模式(支持度≥60)

2.3 中藥治療不孕癥方劑核心藥物確定及相似方劑分析結(jié)果

在中藥治療不孕癥方劑中，單味藥用藥頻率大于20%的藥物共計(jì)13味，藥組用藥頻率大于20%的藥物共計(jì)9味，結(jié)合單味用藥頻次與藥組頻次，得出中藥治療不孕癥方劑核心藥物組成為當(dāng)歸、香附、川芎、熟地黃、白芍、茯苓、甘草、人參、白術(shù)。利用中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)中的組方分析功能，將這9味核心藥物作為組合與全部收錄的296首方劑進(jìn)行相似分析，發(fā)現(xiàn)與《醫(yī)略六書》卷二十七中記錄的勝金丸最為相似。勝金丸包含該核心藥組全部藥物，其組方為“熟地黃5兩，人參1兩半，白術(shù)1兩，茯苓1兩半，當(dāng)歸3兩，白芍1兩半，川芎1兩，桂心1兩半，香附2兩，白薇1兩，延胡索1兩半，甘草5錢”。

2.4 中藥治療不孕癥方劑核心藥物有效成藥化合物、作用靶標(biāo)及其基因分析

2.4.1 藥物化學(xué)成分統(tǒng)計(jì)分析 通過TCMSP軟件分析可知，核心藥組9味中藥共計(jì)包含162個(gè)有效成藥化學(xué)物，其中當(dāng)歸共計(jì)獲得2個(gè)有效成分，包括β-谷甾醇和豆甾醇；香附共計(jì)獲得15個(gè)有效成分，包括金圣草(黃)素、豆甾醇苷、醋酸糖酯、山奈酚等成分；川芎共計(jì)獲得7個(gè)有效成分，包括亞油酸乙酯、川芎醌、谷甾醇等成分；熟地黃共計(jì)獲得2個(gè)有效成分，包括谷甾醇、豆甾醇；白芍共計(jì)獲得13個(gè)有效成分，包括芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、兒茶素等成分；茯苓共計(jì)獲得15個(gè)有效成分，包括茯苓酸、常春藤皂苷元、去氫齒孔酸等成分；甘草共計(jì)獲得92個(gè)有效成分，包括甘草黃酮醇、甘草苷、異黃酮醇、甘油三酯等成分；人參共計(jì)獲得22個(gè)有效成分，包括人參皂苷、五味子酯乙、β-谷甾醇、花生四烯酸等成分；白術(shù)共計(jì)獲得7個(gè)有效成分，包括A-香樹素、β-欖香醇、棕櫚酸等成分。

2.4.2 藥物作用靶蛋白分析 表2示，中藥的化學(xué)成分多樣，成分與靶標(biāo)之間呈現(xiàn)多對(duì)多的復(fù)雜作用關(guān)系。以TCMSP分析結(jié)果為基礎(chǔ)，選擇Drugbank數(shù)據(jù)庫來源的“成分-靶標(biāo)”信息數(shù)據(jù)。當(dāng)歸2個(gè)有效成藥化合物與47個(gè)靶蛋白存在63個(gè)作用對(duì)；香附15個(gè)有效成藥化合物與97個(gè)靶蛋白存在226個(gè)作用對(duì)；川芎7個(gè)有效成藥化合物與30個(gè)靶蛋白存在42個(gè)作用對(duì)；熟地黃2個(gè)有效成藥化合物與31個(gè)靶蛋白存在34個(gè)作用對(duì)；白芍13個(gè)有效成藥化合物與68個(gè)靶蛋白存在95個(gè)作用對(duì)；茯苓15個(gè)有效成藥化合物與25個(gè)靶蛋白存在30個(gè)作用對(duì)；甘草92個(gè)有效成藥化合物與140個(gè)靶蛋白存在1643個(gè)作用對(duì)；人參22個(gè)有效成藥化合物與91個(gè)靶蛋白存在224個(gè)作用對(duì)；白術(shù)7個(gè)有效成藥化合物與19個(gè)靶蛋白存在23個(gè)作用對(duì)。

2.4.3 藥物作用靶標(biāo)基因分析 表3示，利用Uniprot數(shù)據(jù)庫中記錄的人類蛋白、編碼基因數(shù)據(jù)集獲取每味中藥靶標(biāo)的編碼基因。其中當(dāng)歸作用靶標(biāo)基因46個(gè)，香附作用靶標(biāo)基因91個(gè)，川芎作用靶標(biāo)基因28個(gè)，熟地黃作用靶標(biāo)基因31個(gè)，白芍作用靶標(biāo)基因66個(gè)，茯苓作用靶標(biāo)基因24個(gè)，甘草作用靶標(biāo)基因136個(gè)，人參作用靶標(biāo)基因88個(gè)，白術(shù)作用靶標(biāo)基因18個(gè)。核心藥組9味中藥包含靶標(biāo)基因157個(gè)，將超過60%(即6味)中藥都具有的靶標(biāo)基因納入“關(guān)鍵靶基因集”，該基因集包括基因28個(gè)(圖1)。

表2 中藥治療不孕癥方劑核心藥物間共有作用靶標(biāo)分析比較

表3 超過60%核心藥組藥物都含有的靶標(biāo)基因

圖1 核心藥組9味中藥關(guān)鍵靶基因網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 中藥治療不孕癥方劑核心藥物化合物靶標(biāo)編碼基因GO與生物通路分析

對(duì)核心藥組9味中藥所含化合物作用靶標(biāo)編碼的全部498個(gè)基因進(jìn)行g(shù)ene ontology與生物通路分析。GO分析包括分子功能(molecular function)、生物過程(biological process)、細(xì)胞組分(cellular component)三部分。其中顯著富集出的分子功能為45個(gè)條目，包括蛋白結(jié)合(protein binding)、蛋白質(zhì)同源/異二聚化活化(protein homodimerization/heterodimerization activity)、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合(transcription factor binding)等；生物過程有132個(gè)條目，包括信號(hào)傳導(dǎo)(signal transduction)、RNA聚合酶II啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控(positive regulation of transcription from RNA polymerase II promoter)、藥物反應(yīng)(response to drug)、細(xì)胞增殖的正調(diào)控(positive regulation of cell proliferation)、轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控過程(positive regulation of transcription)等；細(xì)胞組分有32個(gè)條目，包括細(xì)胞質(zhì)(cytosol)、線粒體(mitochondrion)、細(xì)胞外空間(extracellular region)、細(xì)胞核漿(nucleoplasm)等。核心藥物靶標(biāo)編碼基因GO富集條目占比(富集基因/條目全部基因)從高至低以各類前10條目排序(圖2)。

圖2 核心藥物靶標(biāo)編碼基因GO富集條目占比前10條目(從高至低排序)

圖3 核心藥物靶標(biāo)編碼基因生物通路顯著富集條目(P-value值排序)

圖4 關(guān)鍵靶基因集蛋白互作網(wǎng)絡(luò)組織表達(dá)分析顯著富集前10位置(P-value值排序)

通過生物通路富集分析，得到顯著富集的生物通路93條。核心藥物靶標(biāo)基因顯著富集在神經(jīng)活性配體-受體相互作用(Neuroactive ligand-receptor interaction)、雌激素信號(hào)通路(Estrogen signaling pathway)、催乳素信號(hào)途徑(Prolactin signaling pathway)、腎素分泌(Renin secretion)、神經(jīng)營養(yǎng)素信號(hào)通路(Neurotrophin signaling pathway)、黃體酮介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟(Progesterone-mediated oocyte maturation)、催產(chǎn)素信號(hào)通路(Oxytocin signaling pathway)等與不孕癥治療密切相關(guān)的生物反應(yīng)信號(hào)通路上(圖3)。

2.6 中藥治療不孕癥方劑關(guān)鍵靶基因集蛋白互作網(wǎng)絡(luò)組織表達(dá)分析

表3示，9味藥物關(guān)鍵靶基因集包含基因28個(gè)。基于BioGRID數(shù)據(jù)庫構(gòu)建核心藥物蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)該28個(gè)基因在人類蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中與1479個(gè)基因形成1930個(gè)關(guān)系對(duì)。對(duì)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)所包含的全部1507個(gè)基因進(jìn)行組織表達(dá)分析，將蛋白質(zhì)編碼基因列表提交到David數(shù)據(jù)庫，選擇功能注釋工具中的“組織表達(dá)”部分，應(yīng)用 UP.TISSUE 進(jìn)行蛋白質(zhì)組織表達(dá)分析，分析結(jié)果為顯著富集前10條(圖4)。通過對(duì)顯著富集的前10個(gè)表達(dá)位置可知，核心藥組所包含的各個(gè)藥物主要表達(dá)的身體部分有子宮、腎、垂體、腦、肝臟、皮膚、胎盤等。

3 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為, 不孕癥由腎虛(精血乏源、沖任不足)、肝郁(沖任不能相資)、脾虛(血脈失暢、氣血不合)、瘀滯(瘀血阻滯沖任)、痰濕(痰濕阻滯胞宮)等多因素導(dǎo)致，與先天稟賦、后天環(huán)境、個(gè)人情志緊密相關(guān)[13-14]。由于病因病機(jī)復(fù)雜，目前對(duì)于其發(fā)生機(jī)制尚不明確。通過本次數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果可知，中藥治療不孕癥方劑核心藥物組成為當(dāng)歸、香附、川芎、熟地黃、白芍、茯苓、甘草、人參、白術(shù)。研究表明，當(dāng)歸、白芍、熟地黃屬補(bǔ)血藥，功效以補(bǔ)血滋陰、益精填髓、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、行氣解郁為主；人參、甘草、白術(shù)屬補(bǔ)氣藥，功效以復(fù)脈固脫、補(bǔ)脾益氣、健脾安胎為主；川芎屬活血藥，功效以活血行氣、逐瘀通經(jīng)、引血下行為主；茯苓利水滲濕、健脾、寧心；香附疏肝解郁、理氣寬中、調(diào)經(jīng)止痛?？梢钥闯觯嗅t(yī)藥治療不孕癥以補(bǔ)血、補(bǔ)氣藥為主，其次為活血化瘀藥，并常輔以理氣、利水消腫類藥物。而這9味藥物構(gòu)成治療不孕癥的核心藥組正是勝金丸(《醫(yī)略六書》卷二十七)的基礎(chǔ)方，另加桂心、白薇、延胡索即可成方。該方主治經(jīng)遲不孕、脈虛者，具有補(bǔ)血滋沖任、養(yǎng)血營經(jīng)脈、扶元補(bǔ)氣、鼓運(yùn)脾元、解郁調(diào)經(jīng)、血?dú)鈨?nèi)充、解散寒滯之功效[5]。

中藥的方劑應(yīng)用構(gòu)成了一種復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)體系，其成分的紛繁復(fù)雜體現(xiàn)出中藥藥理作用的多組分、多靶點(diǎn)、多關(guān)聯(lián)等特點(diǎn)[15]。在本研究中，不孕癥核心藥組9味中藥經(jīng)化學(xué)成分分析及ADME篩選后可知，各中藥包含不同數(shù)量的化學(xué)成分，相同的化學(xué)成分也存在于不同的中藥之中。如谷甾醇分別存在于當(dāng)歸、川芎、熟地黃、人參4味中藥中，研究證實(shí)谷甾醇是一種具有較高營養(yǎng)價(jià)值與生物活性的植物甾醇, 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗炎等方面具有一定的治療功效[16]。同時(shí)，不同中藥間具有相同的化學(xué)活性成分意味著其在人體藥理作用中具有相同的靶點(diǎn)，而作用靶點(diǎn)的相同體現(xiàn)出中藥治療的“疊加作用”[17]，即在在同一個(gè)靶點(diǎn)上，不同的中藥化合物之間可能發(fā)生協(xié)同作用，使原有各個(gè)血藥濃度顯效很低的中藥藥效進(jìn)行疊加，進(jìn)而達(dá)到必要的藥效作用。核心藥組9味中藥間的多成分、多靶點(diǎn)相同，為進(jìn)一步探究核心藥組治療不孕癥的分子作用機(jī)理奠定了研究基礎(chǔ)。

本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)核心藥物作用靶點(diǎn)基因進(jìn)行了網(wǎng)絡(luò)作用機(jī)制研究，通過研究核心藥物活性成分對(duì)應(yīng)的靶蛋白和相互作用蛋白，分析各味中藥所涉及的蛋白網(wǎng)絡(luò)分子功能，以及通過探究核心藥物共有靶蛋白互作網(wǎng)絡(luò)組織表達(dá)位置，分析藥物在人體內(nèi)的表達(dá)作用情況。研究發(fā)現(xiàn)，核心藥組可能通過信號(hào)傳導(dǎo)、RNA聚合酶II啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、藥物反應(yīng)、細(xì)胞增殖的正調(diào)控、轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控過程、ERK1和ERK2級(jí)聯(lián)的正調(diào)控、細(xì)胞遷移的正調(diào)控等生物過程，并通過蛋白結(jié)合、蛋白質(zhì)同源/異源二聚化活性、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、受體結(jié)合、類固醇結(jié)合等分子功能發(fā)揮作用；其作用機(jī)制主要與雌激素信號(hào)通路(負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)生殖系統(tǒng)和其他幾種靶組織的生長(zhǎng)，分化和功能[18])、催乳素信號(hào)通路(催乳素是一種多肽激素，廣泛參與泌乳、生殖、內(nèi)分泌和新陳代謝、大腦和行為以及免疫調(diào)節(jié)等[19])、腎素分泌(由腎小球旁(JG)細(xì)胞合成，參與細(xì)胞外液體積和體內(nèi)血壓穩(wěn)態(tài)[20])、PI3K-Akt信號(hào)通路(參與許多細(xì)胞基本進(jìn)程調(diào)控，其中包括細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)錄、翻譯、細(xì)胞增殖、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)及糖原代謝[21])、神經(jīng)活性配體-受體相互作用、氨基酸的生物合成、代謝途徑等密切有關(guān)，其藥物靶點(diǎn)主要存在于人體中的子宮、垂體、肝臟、腎、腦、胎盤等器官組織。有學(xué)者提出中醫(yī)生殖軸理論，即由“心腦-腎氣-天癸-沖任-胞宮軸”構(gòu)成女性生殖軸，其對(duì)女性的生長(zhǎng)、發(fā)育、生殖及衰老起主動(dòng)作用[22-23]，不孕癥方劑核心藥物在體內(nèi)的主要表達(dá)位置與該理論所描述的人體軸線相符合。

綜上，本研究基于數(shù)據(jù)挖掘和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，挖掘中藥治療不孕癥方劑核心藥物，為探討其作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)為其臨床應(yīng)用的有效性提供理論依據(jù)，也為探究具有多組分、多靶點(diǎn)、多途徑等特點(diǎn)的中藥復(fù)方治療疾病的科學(xué)內(nèi)涵提供新的研究思路。