基于中藥整合藥理學(xué)平臺(tái)的參桃軟肝方抗癌分子機(jī)制研究?

劉展華，莊振杰，林麗珠△，黃慈輝，孫治中，李佳容

(1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣州 510405； 2. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州 510405)

癌癥已經(jīng)成為嚴(yán)重影響人類(lèi)生命健康的常見(jiàn)疾病，近年來(lái)其發(fā)病率和死亡率不斷呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)。美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)發(fā)布的癌癥全球流行病學(xué)報(bào)告[1]顯示，2018年全球癌癥發(fā)病例數(shù)1810萬(wàn)，其中有960萬(wàn)人因癌癥疾病而死亡。在中國(guó)，癌癥的發(fā)病形勢(shì)同樣嚴(yán)峻。國(guó)家癌癥中心發(fā)布的《全國(guó)癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告2018版》[2]顯示，2014年全國(guó)惡性腫瘤估計(jì)新發(fā)病例數(shù)380.4萬(wàn)例(男性211.4萬(wàn)例,女性169.0萬(wàn)例)，平均每天超過(guò)1萬(wàn)人被確診為癌癥，每分鐘有7個(gè)人被確診為癌癥，癌癥日益嚴(yán)峻的發(fā)病形勢(shì)給抗癌的治療和預(yù)防帶來(lái)了巨大的社會(huì)醫(yī)療壓力。中醫(yī)學(xué)源遠(yuǎn)流長(zhǎng)，在長(zhǎng)期的防治腫瘤疾病的實(shí)踐中形成了基于中醫(yī)理論指導(dǎo)的具有鮮明特色的中醫(yī)腫瘤學(xué)科體系。中醫(yī)在預(yù)防腫瘤發(fā)生以及抗癌治療減毒增效、抗耐藥、抑制復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等方面具有明顯優(yōu)勢(shì)，已成為防治腫瘤疾病不可或缺的重要醫(yī)療措施[3]。

參桃軟肝方是國(guó)醫(yī)大師周岱翰教授治療肝癌常用經(jīng)驗(yàn)方，主方由山慈菇、桃仁、半枝蓮、當(dāng)歸、人參、白術(shù)、甘草、仙鶴草8味藥組成。本方以“健脾祛瘀法”組方，針對(duì)于癌邪“虛”與“瘀”的病理特點(diǎn)，功能健脾養(yǎng)肝、軟堅(jiān)消癥，其在培補(bǔ)脾氣、滋養(yǎng)肝陰的同時(shí)，兼顧活血化瘀、軟堅(jiān)消癥，常用于肝癌的不同臨床階段，具有改善肝功能、緩解黃疸、腹水等臨床癥狀等療效。研究證實(shí)，本方聯(lián)合肝癌的常規(guī)治療，可提高中晚期原發(fā)性肝癌患者的疾病控制率，延長(zhǎng)患者生存時(shí)間，同時(shí)保護(hù)患者肝功能，提高患者生存質(zhì)量[4]。鑒于其良好的臨床療效，目前以本方為基礎(chǔ)研制而成的參桃軟肝膠囊[5-8]、參桃軟肝丸[9-15]、參桃軟肝片[16-17]等口服制劑已逐漸運(yùn)用于臨床及相關(guān)研究。但參桃軟肝方抗癌分子機(jī)制尚未完全闡明，同時(shí)其治療肝癌外適應(yīng)證仍有待進(jìn)一步探索。

中藥方劑治療疾病的過(guò)程中涉及多成分、多靶點(diǎn)的協(xié)同作用，單一的“藥物-靶點(diǎn)-基因”的研究模式難以對(duì)中藥方劑作用過(guò)程及機(jī)制形成系統(tǒng)正確的認(rèn)識(shí)。針對(duì)目前存在研究模式的不足，相關(guān)學(xué)者借助中醫(yī)藥大數(shù)據(jù)聯(lián)合計(jì)算機(jī)平臺(tái)提出“整合藥理學(xué)”的研究新模式。該模式立足于藥物靶點(diǎn)預(yù)測(cè)、網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及功能分析等不同分析模塊，是探索中藥方劑化學(xué)物質(zhì)實(shí)體與機(jī)體生命活動(dòng)交互規(guī)律的一種新模式[18-19]。中藥整合藥理學(xué)計(jì)算平臺(tái)(http: / /www．Tcmip.cn /) 是這一模式下的研究實(shí)踐平臺(tái)，該平臺(tái)是以中醫(yī)藥大數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，以人工智能、數(shù)據(jù)建模和數(shù)據(jù)挖掘、網(wǎng)絡(luò)科學(xué)等學(xué)科方法和技術(shù)為支撐，構(gòu)建的用于中藥整合藥理學(xué)分析的計(jì)算機(jī)平臺(tái)[19]。該平臺(tái)可運(yùn)用于中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)分析、中藥有效成分分子機(jī)制探討、中藥質(zhì)量控制、中藥新藥研發(fā)以及中藥臨床精準(zhǔn)用藥等方面，同時(shí)也可為揭示中醫(yī)原創(chuàng)思維的科學(xué)價(jià)值和傳承名醫(yī)經(jīng)驗(yàn)提供一定的技術(shù)支撐[20-21]。

本研究旨在基于中藥整合藥理學(xué)計(jì)算平臺(tái)及相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)，運(yùn)用整合藥理學(xué)方法對(duì)參桃軟肝方中潛在的抗癌主要成分、作用靶點(diǎn)以及信號(hào)通路進(jìn)行分析，為進(jìn)一步借助實(shí)驗(yàn)探究其確切的抗癌機(jī)制以及臨床新藥研發(fā)提供依據(jù)。

1 數(shù)據(jù)來(lái)源與方法

1.1 參桃軟肝方的活性成分來(lái)源

在整合藥理學(xué)平臺(tái)(http:∥www．tcmip．cn /) 的中藥成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)中，收集“山慈菇”“桃仁”“半枝蓮”“當(dāng)歸”“人參”“白術(shù)”“甘草”“仙鶴草”8味中藥的活性成分，建立參桃軟肝方的化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)。

1.2 藥物及疾病靶點(diǎn)預(yù)測(cè)與獲取

整合藥理學(xué)平臺(tái)通過(guò)Open Babel提取參桃軟肝方藥物成分的化學(xué)分子指紋，并將其與Drug Bank中獲FDA批準(zhǔn)的抗癌藥物指紋進(jìn)行比對(duì)，平臺(tái)利用Tanimoto系數(shù)對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)分，選定評(píng)分>0.8的為相似性藥物，將相似性藥物靶點(diǎn)作為參桃軟肝方的潛在作用靶點(diǎn)[22]。以“cancer”及“tumour”為疾病關(guān)鍵字在整合藥理學(xué)平臺(tái)的疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，檢索結(jié)果為治療“cancer”及“tumour”的疾病靶點(diǎn)，建立癌癥靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)，將數(shù)據(jù)庫(kù)中的靶點(diǎn)結(jié)果作為參桃軟肝方的候選靶點(diǎn)來(lái)源。

1.3 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

整合藥理學(xué)平臺(tái)整合了In Act、DIP、MINT、HA蛋白互相作用、OPHID、PDZBase、Reactome、HPRD等8個(gè)現(xiàn)有蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)的信息，通過(guò)整合藥物學(xué)平臺(tái)的蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，構(gòu)建參桃軟肝方藥物的潛在作用靶點(diǎn)-癌癥疾病靶點(diǎn)的蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)[22]。通過(guò)整合藥理學(xué)平臺(tái)的網(wǎng)絡(luò)分析模塊蛋白互相作用網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?，以“?jié)點(diǎn)連接度”的2倍中位數(shù)為卡值，選取中藥靶點(diǎn)-疾病基因的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)(hubs)；在此基礎(chǔ)上，以“節(jié)點(diǎn)連接度”(degree)“節(jié)點(diǎn)緊密度”(closeness)“節(jié)點(diǎn)介度”(betweenness)的中位數(shù)為cutoff值，選取同時(shí)滿(mǎn)足3個(gè)卡值的節(jié)點(diǎn)為參桃軟肝方潛在靶點(diǎn)-癌癥疾病靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

1.4 基因功能和通路分析

中藥整合藥理學(xué)平臺(tái)整合了GO(Gene Ontology)(http: / /www． geneontology．org)和KEEG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)(http: / /www．genome．jp /kegg) 兩大基因組信息數(shù)據(jù)庫(kù)，可對(duì)篩選出的作用靶點(diǎn)直接進(jìn)行功能分析和通路富集分析。使用整合藥理學(xué)平臺(tái)中這2個(gè)模塊分別對(duì)參桃軟肝方潛在作用靶點(diǎn)、參桃軟肝方抗癌治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行GO及KEGG分析[22]，按P值大小分別獲取具有明確條目ID的前20個(gè)GO及KEGG分析結(jié)果。

1.5 共同關(guān)鍵靶點(diǎn)通路分析

將獲取的參桃軟肝方與癌癥疾病共同靶點(diǎn)，使用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)(Version 6.8 https:∥david.ncifcrf.gov/)[23]進(jìn)行KEGG通路分析，將獲得結(jié)果中P值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的前20個(gè)通路與參桃軟肝方抗癌治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)KEGG通路分析結(jié)果進(jìn)行匹配，并使用R軟件(version 3.5.1)繪制維恩圖。

2 結(jié)果

2.1 參桃軟肝方化學(xué)成分靶標(biāo)預(yù)測(cè)及分析

通過(guò)對(duì)參桃軟肝方成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及分析，共收集參桃軟肝方化學(xué)成分 437個(gè)，其中白術(shù)成分32個(gè)，其主要成分為多糖、白術(shù)三醇等；半枝蓮8個(gè)，其主要成分為內(nèi)脂類(lèi)、黃芩苷等；當(dāng)歸65個(gè)，其主要成分為多糖、阿魏酸等；甘草133個(gè)，人參158個(gè)，其主要成分為人參皂苷、人參多糖等；桃仁3個(gè)，其主要成分為苦杏仁甙、糖類(lèi)等；仙鶴草22個(gè)，主要成分為三萜及其苷類(lèi)、黃酮類(lèi)化合物；山慈菇16個(gè)，其主要成分為糖苷類(lèi)化合物及萜類(lèi)化合物等。收集藥物靶點(diǎn)共計(jì)3236個(gè)，其中山慈菇 108個(gè)，桃仁35個(gè)，半枝蓮62個(gè)，當(dāng)歸370個(gè)，人參2013個(gè)，白術(shù)210個(gè)，甘草360個(gè)，仙鶴草78個(gè)。

表1、2示，對(duì)參桃軟肝方潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO分析，結(jié)果顯示潛在靶點(diǎn)基因涉及的生物學(xué)功能包括細(xì)胞溶質(zhì)、外泌體、ATP結(jié)合、線(xiàn)粒體基質(zhì)、線(xiàn)粒體電子轉(zhuǎn)運(yùn)等條目，根據(jù) P值大小排序，篩選具有明確ID的條目共計(jì)20 條。KEGG通路富集結(jié)果顯示，參桃軟肝方潛在靶點(diǎn)作用的通路條目包括氧化磷酸化、碳代謝、糖酵解和糖質(zhì)生成等，其涉及病種包括阿爾茲海默病、 帕金森病、非酒精性脂肪性肝病等。根據(jù) P 值大小排序，篩選具有明確ID的條目共計(jì)13條。

表1 參桃軟肝方潛在靶點(diǎn)具有的功能信息

表2 參桃軟肝方潛在靶點(diǎn)參與的通路信息

圖1 參桃軟肝方抗腫瘤的關(guān)鍵靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

注：RS代表人參，GC代表甘草，TR代表桃仁，BZL代表半枝蓮，XHC代表仙鶴草圖2 參桃軟肝方藥物-成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

2.2 參桃軟肝方抗腫瘤的關(guān)鍵靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

圖1、2表3示，經(jīng)過(guò)整合藥理學(xué)平臺(tái)的篩選，得到參桃軟肝方及“cancer”&“tumor”關(guān)鍵靶點(diǎn)共計(jì)780個(gè)，其中藥物直接作用靶點(diǎn)152個(gè)，已知疾病靶點(diǎn)268個(gè)，藥物與疾病共同靶點(diǎn)29個(gè)，其他靶點(diǎn)331個(gè)。將以上靶點(diǎn)匯總并構(gòu)建“參桃軟肝方潛在作用靶點(diǎn)腫瘤疾病靶點(diǎn)”的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)。蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中，根據(jù)節(jié)點(diǎn)連接度僅顯示前100個(gè)靶點(diǎn)，連接度越大說(shuō)明節(jié)點(diǎn)越大。通過(guò)該網(wǎng)絡(luò)共確定參桃軟肝方與癌癥共同靶點(diǎn)5個(gè)，分別為ADORA3(Adenosine receptor A3)、RHOA(Transforming protein RhoA)、AKT1(RAC-alpha serine)、KRAS(KRAS proto-oncogene)、GMPS(Guanine monophosphate synthase)。將參桃軟肝方中靶點(diǎn)為包含上述5個(gè)靶點(diǎn)藥物及其成分進(jìn)行確認(rèn)并進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，使用Cytoscape軟件(version 3.7)構(gòu)建藥物-成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，其中參桃軟肝方中有上述關(guān)鍵靶點(diǎn)且存在作用關(guān)系的成分?jǐn)?shù)量為322個(gè)，通過(guò)該網(wǎng)絡(luò)體現(xiàn)了參桃軟肝方多成分-多靶點(diǎn)的藥物作用關(guān)系，表明參桃軟肝方可通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)治療癌癥疾病。參桃軟肝方中與上述5個(gè)靶點(diǎn)均存在相互作用關(guān)系的藥物成分及數(shù)量、主要藥物成分分類(lèi)。

表3 參桃軟肝方中與關(guān)鍵靶點(diǎn)有相互作用的成分及藥物分類(lèi)比較

注：條形圖中按 -log10(P.value) 值大小顏色從紅色向紫色漸變，-log10(P.value) 值越大則P值越小，條目相關(guān)性越強(qiáng)圖3 參桃軟肝方抗腫瘤關(guān)鍵靶點(diǎn)具有功能信息

BZ代表白術(shù)，SCG代表山慈菇，藍(lán)色節(jié)點(diǎn)代表藥物，綠色節(jié)點(diǎn)代表成分，紅色節(jié)點(diǎn)代表關(guān)鍵靶點(diǎn)。

2.3 參桃軟肝方化學(xué)成分靶標(biāo)預(yù)測(cè)及分析

圖3、4示，參桃軟肝方抗癌關(guān)鍵靶點(diǎn)的GO功能分析顯示，參桃軟肝方藥物靶點(diǎn)與疾病關(guān)鍵靶點(diǎn)基因功能涉及蛋白結(jié)合、細(xì)胞質(zhì)、核原生質(zhì)、ATP結(jié)合、信號(hào)傳導(dǎo)、蛋白質(zhì)磷酸化多個(gè)條目，根據(jù)P值大小進(jìn)行排序，篩選具有明確ID的條目共計(jì)20條。通過(guò)整合藥理學(xué)平臺(tái)進(jìn)行參桃軟肝方靶點(diǎn)通路富集分析顯示，參桃軟肝方抗癌關(guān)鍵靶點(diǎn)主要涉及的通路有T細(xì)胞信號(hào)通路、ERBB信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路、趨化因子信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡等，涉及病種為乙型肝炎、慢性髓性白血病、結(jié)直腸癌、前列腺癌、胰腺癌等。根據(jù) P值大小，篩選出具有明確ID的條目共計(jì)14 條。結(jié)果提示，參桃軟肝方的抗癌關(guān)鍵靶點(diǎn)在上述信號(hào)通路及病種中具有重要作用。

注：氣泡圖中氣泡按P值大小、顏色從綠色向紅色漸變，點(diǎn)的大小與富集的基因數(shù)量成正比圖4 參桃軟肝方抗腫瘤關(guān)鍵靶點(diǎn)所參與的通路信息

2.4 共同靶點(diǎn)分析

表4圖5示，將參桃軟肝方關(guān)鍵抗癌靶點(diǎn)ADORA3、RHOA、AKT1、KRAS及GMPS 使用DAVID 數(shù)據(jù)庫(kù)(Version 6.8 https:∥DAVID. ncifcrf.gov/)進(jìn)行基因注釋。其中ADORA3、RHOA、AKT1、KRAS 4個(gè)基因呈現(xiàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的注釋結(jié)果，將其所涉及的通路按P值大小選取前20個(gè)條目，將所得條目與參桃軟肝方抗癌關(guān)鍵靶點(diǎn)所涉及的通路進(jìn)行匹配，并使用R軟件繪制維恩圖，最終得到3條共同通路及2個(gè)涉及的共同病種。3條通路分別為T(mén)細(xì)胞受體信號(hào)通路(T cell receptor signaling pathway)、癌癥通路(Pathways in cancer)和趨化因子信號(hào)通路(Chemokine signaling pathway)，2個(gè)共同癌種為胰腺癌(Pancreatic cancer)和結(jié)直腸癌(Colorectal cancer)。結(jié)果表明，上述涉及的基因、通路及病種在參桃軟肝方抗癌治療中具有重要的作用，值得在今后的研究中進(jìn)行深入探索。

表4 參桃軟肝方抗癌治療關(guān)鍵靶點(diǎn)的KEGG分析

圖5 共同靶點(diǎn)涉及通路與關(guān)鍵靶點(diǎn)涉及通路維恩圖

3 討論

本研究基于整合藥理學(xué)方法對(duì)參桃軟肝方抗癌治療的有效成分、關(guān)鍵靶點(diǎn)、涉及通路及潛在治療癌種進(jìn)行分析，研究結(jié)果表明參桃軟肝方在治療癌癥方面具有多成分、多靶點(diǎn)的協(xié)同作用特點(diǎn)。參桃軟肝方是腫瘤名醫(yī)周岱翰教授的經(jīng)驗(yàn)方，方中人參為君藥大補(bǔ)元?dú)?，補(bǔ)脾益肺；白術(shù)能健脾益氣；桃仁善泄血滯、祛瘀力強(qiáng)，可治療血閉癥瘤等多種瘀血阻滯的病證；當(dāng)歸可活血通經(jīng)，當(dāng)歸、人參合用可補(bǔ)氣生血，活血祛瘀；仙鶴草補(bǔ)虛；山慈菇清熱解毒化痰散結(jié)；半枝蓮清熱解毒化瘀；甘草調(diào)和諸藥，諸藥合用共奏補(bǔ)氣健脾、活血祛瘀、清解熱毒之功，是治療肝癌的臨床有效方劑[24]。本研究立足其良好的治療肝癌的研究背景，通過(guò)整合藥理學(xué)分析，旨在預(yù)測(cè)其具有廣譜抗腫瘤作用的成分及靶點(diǎn)，為參桃軟肝方未來(lái)新藥開(kāi)發(fā)及適應(yīng)癥擴(kuò)展提供理論基礎(chǔ)。

本研究中人參篩選出的抗癌關(guān)鍵成分為人參皂苷Rg3、Rg1、Rb1、Rh1、Rh2及多種人參醇等；白術(shù)為白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、蒼術(shù)酮等；桃仁為兒茶素、苦杏仁苷、蟲(chóng)草素；仙鶴草為仙鶴草酚、仙鶴草內(nèi)酯等；山慈菇為秋水仙堿、反式甲酰胺；半枝蓮為漢黃芩苷、野黃芩苷、5-半乳糖苷黃芩苷、苦丁素。結(jié)合目前文獻(xiàn)報(bào)道，上述藥物抗癌作用研究表明，人參皂苷 Rg3、Rg1、Rb1、Rh1、Rh 2等均具有顯著的抗腫瘤活性，該類(lèi)成分具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤生長(zhǎng)、抑制腫瘤血管生成及調(diào)節(jié)免疫功能等多方面作用[25]。體外實(shí)驗(yàn)表明，以20(s)-原人參二醇為代表的人參醇類(lèi)化合物同樣具有良好的抑制肝癌細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞及Lewis 肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用[26]；白術(shù)提取物白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ可通過(guò)增強(qiáng)超氧化物歧化酶(SOD) 活性，下調(diào)腫瘤細(xì)胞CDK1，抑制 Notch 信號(hào)通路，從而發(fā)揮對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性作用[27-29]。白術(shù)提取物蒼術(shù)酮屬于倍半萜類(lèi)合物，具有抗炎、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用[30]，研究表明，蒼術(shù)酮可通過(guò)降低 CCDC12、PI3K、p-AKT 和 mTOR基因的表達(dá)，從而抑制結(jié)直腸癌HT29細(xì)胞的增殖并介導(dǎo)其凋亡，同時(shí)對(duì)HepG2肝癌細(xì)胞的增殖也具有良好的抑制作用[31]；桃仁成分兒茶素可通過(guò)抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抗氧化、抑制血管生成而發(fā)揮抗癌作用[32]；苦杏仁苷則可通過(guò)調(diào)控 Akt 和RICTOR等相關(guān)信號(hào)通路，下調(diào)細(xì)胞周期相關(guān)因子，誘導(dǎo)膀胱癌、肺癌、結(jié)腸癌等腫瘤細(xì)胞凋亡[33]；蟲(chóng)草素可通過(guò)阻滯腫瘤細(xì)胞RNA轉(zhuǎn)錄而治療多發(fā)性骨髓瘤[34]，誘導(dǎo)DNA損傷而殺傷乳腺癌細(xì)胞[35]；研究表明，仙鶴草主要成分仙鶴草酚能抑制和誘導(dǎo)白血病細(xì)胞(K562)凋亡，并存在劑量依賴(lài)性[36]，其成分仙鶴草內(nèi)脂進(jìn)一步的分離提取物具有較好的保肝藥理活性[37]及抗炎[38]作用，同時(shí)體外實(shí)驗(yàn)表明，其可以誘導(dǎo)人源胃腺癌AGS 細(xì)胞凋亡[39]；山慈菇成分秋水仙堿作為微管解聚劑，具有良好的抗炎、抗纖維化和免疫調(diào)節(jié)作用，同時(shí)也是一種廣譜抗癌藥物。秋水水堿可通過(guò)阻斷微管蛋白形成，從而抑制腫瘤細(xì)胞分裂，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡[31]；半枝蓮成分漢黃芩苷可以通過(guò)影響B(tài) 細(xì)胞淋巴瘤-2(Bcl-2) 和凋亡蛋白 Bax 蛋白的表達(dá)水平，調(diào)節(jié)信號(hào)MAPK-mTOR等信號(hào)通路以抑制腫瘤細(xì)胞增殖，同時(shí)對(duì)正常上皮及外周血及骨髓幾乎沒(méi)有毒性[40]。而野黃芩苷對(duì)舌鱗癌、結(jié)腸癌、肝癌、乳腺癌等多種腫瘤細(xì)胞均有毒性作用，其抗腫癌機(jī)制包括誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、阻遏細(xì)胞周期、增強(qiáng)黏附力、抗侵襲等[41]；甘草成分甘草素同樣具有良好的促腫瘤細(xì)胞凋亡作用，其機(jī)制涉及促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS) 產(chǎn)生，上調(diào) p53和 Bax基因表達(dá)，下調(diào) Bcl-2基因表達(dá)，激活線(xiàn)粒體凋亡途徑等[42]。

上述研究結(jié)果表明，本研究所分析預(yù)測(cè)的成分是參桃軟肝方發(fā)揮抗肝癌及其他類(lèi)型癌腫作用的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)也表明參桃軟肝方在抗癌治療中涉及多成分協(xié)同作用的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程。同時(shí)筆者也注意到，參桃軟肝方與關(guān)鍵靶點(diǎn)均存在相互作用，但目前文獻(xiàn)對(duì)其抗癌藥效仍鮮有報(bào)道的成分有山慈菇成分反式甲酰胺，半枝蓮成分5-半乳糖苷黃芩苷、苦丁素， 甘草成分甘草皂苷(如甘草皂苷C2、甘草皂苷A3、甘草皂苷G2等)，此類(lèi)成分的抗癌作用及價(jià)值值得在未來(lái)進(jìn)一步的研究。

本研究中篩選出的參桃軟肝方抗癌治療的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)種ADORA3、RHOA、AKT1、KRAS在網(wǎng)絡(luò)中具有重要意義。目前研究也表明，這些靶點(diǎn)在癌癥發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。腺苷受體(ADORA3)高度表達(dá)于小細(xì)胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌等實(shí)體瘤中，而在相應(yīng)的正常組織和癌旁組織中低表達(dá)，其活化可抑制多種腫瘤細(xì)胞增生，延緩腫瘤生長(zhǎng)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[43-44]；RHOA基因具有調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架及增殖作用，可促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展，在睪丸精原細(xì)胞瘤、肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌等多種腫瘤中表達(dá)增加，其上調(diào)和或過(guò)表達(dá)與癌癥不良預(yù)后相關(guān)[45]；絲蘇氨酸蛋白激酶-1(AKT1)異常表達(dá)于肺癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、結(jié)腸癌等癌腫，其異?？梢砸种萍?xì)胞凋亡，與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[46-47]；KRAS基因是原癌基因RAS家族的成員之一，其突變主要與結(jié)直腸癌的發(fā)病有關(guān)，可通過(guò)使 RAS-AF-MAPK 信號(hào)傳導(dǎo)通路持續(xù)激活，引起細(xì)胞的惡性增殖從而發(fā)生癌變[48]。本研究分析結(jié)果表明，參桃軟肝方中抗癌治療關(guān)鍵靶點(diǎn)的抗癌作用與蛋白結(jié)合、核原生質(zhì)、ATP結(jié)合有關(guān)，涉及通路為T(mén)細(xì)胞信號(hào)通路、ERBB信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路和趨化因子信號(hào)通路等。因此筆者認(rèn)為，未來(lái)研究可設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證參桃軟肝方的有效成分對(duì)上述關(guān)鍵靶點(diǎn)的作用效果，探索其對(duì)上述特定生物學(xué)過(guò)程及通路的影響，進(jìn)一步闡明參桃軟肝方抗癌治療的科學(xué)內(nèi)涵。

此外本研究發(fā)現(xiàn)，參桃軟肝方藥物關(guān)鍵靶點(diǎn)通路富集分析涉及結(jié)直腸癌、胰腺癌、慢性髓性白血病及前列腺癌等癌癥，這也提示參桃軟肝方及其方中的藥物可在結(jié)直腸癌、胰腺癌、慢性髓性白血病、前列腺癌等癌癥中進(jìn)行臨床運(yùn)用及開(kāi)展相關(guān)基礎(chǔ)研究，在一定程度上與中醫(yī)“異病同治”思想相契合。

綜上所述，本研究借助整合藥理學(xué)這一新興學(xué)科理念及技術(shù)，對(duì)參桃軟肝方抗癌作用機(jī)制及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行分析，既為參桃軟肝方復(fù)方未來(lái)的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)，也為其應(yīng)用于腫瘤疾病的臨床治療提供更加開(kāi)闊的思路。