牛病毒性腹瀉診斷方法及綜合防治

(武威市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院，甘肅 武威 733000)

牛病毒性腹瀉病毒(簡(jiǎn)稱BVDV)是一種與胃腸道、呼吸系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)相關(guān)的重要病原體，具有較高的傳染性，在全世界內(nèi)廣泛流行。動(dòng)物感染此類病毒后，會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物生產(chǎn)機(jī)能下降、產(chǎn)畸形胎或死胎、產(chǎn)奶量下降、食欲減退、呼吸困難等癥狀，給養(yǎng)殖農(nóng)戶帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在妊娠早期，病毒有通過胎盤的能力，導(dǎo)致胎兒免疫耐受，生產(chǎn)出持續(xù)感染的(PI)小牛犢。該病毒在牛犢內(nèi)長(zhǎng)期存在，以各種方式終身排出病毒，并形成傳染源，造成病毒在畜群中難以被徹底消滅。持續(xù)感染的動(dòng)物通常比短暫或急性感染的動(dòng)物更有效地傳播BVDV，因?yàn)樗鼈兡軌蛟谝簧信懦龃罅康牟《荆徽J(rèn)為是主要的BVDV庫。在我國牛群中，BVDV持續(xù)感染率高達(dá)2.4 %，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過很多歐美國家。因此必須要采取有效的防控措施，來阻止病毒的傳播。由于病毒感染的性質(zhì)，到目前為止，還沒有完全治愈該病的方法。

1 病原學(xué)特征

BVDV屬于黃病毒科瘟病毒屬的成員，為單股正鏈 RNA 病毒，基因組大小約12.5 kb，病毒粒子在電鏡下觀察成球形，直徑大約為40～60 nm。按照基因序列的差異，BVDV可分為BVD-1和BVD-2兩種基因型。根據(jù)病毒感染細(xì)胞后，是否產(chǎn)生細(xì)胞病變(CPE)。將 BVDV分成兩種不同的生物型，致細(xì)胞病變型(CP)和非致細(xì)胞病變型(NCP)。感染病毒后，兩種生物型引起的癥狀不同，主要表現(xiàn)在疾病的發(fā)生和嚴(yán)重程度上不同，這兩種生物型在牛群中都會(huì)引起疾病。實(shí)驗(yàn)表明，牛感染的90 %以上的病毒以及所有PI動(dòng)物均由NCP引起。據(jù)報(bào)道，CP型與已經(jīng)分離的黏膜病的暴發(fā)有關(guān)系。NCP型在自然界和PI動(dòng)物中最常見，它對(duì)淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞、呼吸道有很強(qiáng)的青睞性。CP型的BVDV起源于NCP的突變菌株。NCP與90 %以上的BVDV感染有關(guān)系，可引起輕度感染TI和重度感染PI動(dòng)物產(chǎn)生。兩種生物型引起的癥狀不同，主要表現(xiàn)在病毒感染后，疾病的發(fā)生和嚴(yán)重程度上不同。

2 流行特點(diǎn)

由于氣候多變，管理不善，畜體抵抗力下降等因素，造成牛病毒性腹瀉病在我國冬春季較為高發(fā)。BVDV可通過直接接觸病畜傳播，也可通過間接吸入受病毒污染的物質(zhì)傳播。經(jīng)懷孕母畜胎盤傳播時(shí)，會(huì)導(dǎo)致出生的小牛發(fā)展為持續(xù)性感染(PI)牛，終生帶毒、排毒，成為重要的傳播來源。該病的傳染源多為患病牛，患病牛的糞便、分泌物、部分臟器排出病毒。水平傳播主要發(fā)生在通過接觸病毒脫落的動(dòng)物，常見的傳輸介質(zhì)包括：飼料、水、設(shè)備等鼻鉗、奶瓶奶嘴和針頭、觸診、分泌物和排泄物(尿液、糞便、粘液、牛奶)，馬蠅、馬蠅、頭蠅也有已證明能傳播BVDV。垂直傳播介質(zhì)包括：受污染的精液、胚胎移植和改良活疫苗。持續(xù)感染的動(dòng)物持續(xù)脫落大量BVDV，存在于全身分泌物中，包括鼻涕、唾液、精液、糞便等。這些動(dòng)物作為一個(gè)主要的病毒庫來傳播病毒。迄今為止，該病毒已從40多個(gè)物種和血清學(xué)證據(jù)中分離發(fā)現(xiàn)，這表明大多數(shù)野生反芻動(dòng)物也會(huì)感染BVDV。

3 癥狀表現(xiàn)

病牛初期精神沉郁、食欲減退或廢絕、體溫升高至39～41 ℃、白細(xì)胞數(shù)量減少、發(fā)燒、腹瀉、脫水、消化道粘液病變、淋巴組織壞死、蹄部炎癥、鼻腔有漿液性到粘液性。一般來說，腸系膜淋巴結(jié)腫大，水腫，腫脹出血性。在流產(chǎn)的胎兒中，主要病變包括結(jié)膜炎、肺炎，胸腺發(fā)育不全和非特異性心肌炎。胎盤病變主要包括血管炎，水腫，充血和出血伴有一些變性和壞死。組織病理學(xué)顯示病變較為嚴(yán)重，外周血淋巴細(xì)胞減少和出血，全身淋巴結(jié)和淋巴濾泡。

4 診斷方法

4.1 血清學(xué)診斷

除了患病動(dòng)物所表現(xiàn)的臨床癥狀，如腹瀉、糞便稀薄、體溫升高、眼鼻部出現(xiàn)漿液等典型癥狀外，血清學(xué)診斷也是BVDV最常用的檢測(cè)方法。通過采集血清，檢測(cè)血清中BVDV特異抗體來間接診斷。常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、試管凝集試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)等。ELISA檢測(cè)具有簡(jiǎn)便、高效、特異性強(qiáng)、高通量等優(yōu)點(diǎn)，技術(shù)較為成熟，且對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員要求比較低，適合對(duì)樣本的快速檢測(cè)。

4.2 分子生物學(xué)診斷

主要包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、實(shí)時(shí)定量 PCR(RT-PCR)、核酸探針(Nucleic Acid Probe)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)等技術(shù)，對(duì)BVDV進(jìn)行快速診斷。這些方法各有優(yōu)點(diǎn)和不足。其中，常規(guī)PCR比較簡(jiǎn)便易行，多用于不同種屬的鑒別檢測(cè)，但容易出現(xiàn)假陽性；熒光定量PCR具有高靈敏度、高通量等優(yōu)勢(shì)，但對(duì)引物和探針的設(shè)計(jì)要求比較高；LAMP技術(shù)可對(duì)乳制品、組織等樣本進(jìn)行檢測(cè)，具有操作簡(jiǎn)便、可視性強(qiáng)、特異性高和試驗(yàn)條件要求低等優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)引物設(shè)計(jì)要求很高。

5 防治措施

5.1 提高飼養(yǎng)管理水平

定期對(duì)飼養(yǎng)環(huán)境進(jìn)行消毒處理，保持圈舍的清潔通風(fēng)，冬春季主要防寒保暖，為牛提供一個(gè)舒適的生產(chǎn)環(huán)境，減少疾病的發(fā)生。此外，要合理搭配飼料比例，滿足牛的生長(zhǎng)發(fā)育需求，增強(qiáng)牛的抵抗力、增強(qiáng)體質(zhì)，預(yù)防疾病的發(fā)生。

5.2 積極做好免疫接種

通過疫苗接種，讓動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生大量的抗體來預(yù)防BVDV，降低發(fā)病率。目前，國內(nèi)已經(jīng)研發(fā)了很多疫苗，如牛粘膜病弱毒疫苗、滅活疫苗，都可以用于疾病的預(yù)防。

5.3 嚴(yán)格做好檢疫工作

對(duì)牛群定期進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)患病動(dòng)物或者可疑動(dòng)物，及時(shí)進(jìn)行隔離。做到“早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療”，對(duì)圈舍進(jìn)行全面消毒，對(duì)健康動(dòng)物進(jìn)行緊急免疫，控制傳染源。對(duì)于嚴(yán)重的患病動(dòng)物，不計(jì)得失，盡快淘汰。對(duì)引入的外來牛，要嚴(yán)格進(jìn)行檢疫，確保完全健康方可進(jìn)行混養(yǎng)。

5.4 加強(qiáng)對(duì)PI動(dòng)物的檢測(cè)

目前世界上許多國家采用的防控方案，主要依靠對(duì)PI動(dòng)物的檢測(cè)，消滅它們或阻止它們返回牧群。在早期階段，特別是出生后不久，檢測(cè)PI動(dòng)物是非常有益的。執(zhí)行BVDV控制程序，可用的診斷試驗(yàn)，如病毒分離(VI)、免疫組織化學(xué)(IHC)，用抗原捕獲ELISA(ACE)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)PI牛。每種檢測(cè)BVDV的方法都有其優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和適用于不同的診斷情況。根據(jù)動(dòng)物年齡選擇合適的抽樣策略，優(yōu)化診斷試驗(yàn)。

6 結(jié)束語

綜上所述，牛病毒性腹瀉的發(fā)病率較高，給養(yǎng)殖戶帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失，如果不及時(shí)進(jìn)行治療，會(huì)導(dǎo)致極高的病死率。因此，在日常的養(yǎng)殖中，要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，增強(qiáng)動(dòng)物的抗病能力，定期對(duì)牛群開展檢疫工作，定期進(jìn)行相關(guān)檢查，為減少疾病的發(fā)生率提供科學(xué)支撐。